漆黃素聯(lián)合胡椒堿的抗抑郁作用及其機(jī)制研究

王錢東+吳淑娟+朱國(guó)文+潘建春

[摘要] 目的 探討低劑量漆黃素（Fisetin）聯(lián)合閾下劑量胡椒堿的抗抑郁作用是否涉及單胺機(jī)制。 方法 采用行為絕望抑郁模型，即小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)和懸尾實(shí)驗(yàn)，觀察低劑量漆黃素與閾下劑量胡椒堿急性給藥對(duì)小鼠絕望模型不動(dòng)時(shí)間的影響，同時(shí)觀察兩藥聯(lián)用對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響。高效液相-電化學(xué)檢測(cè)腦區(qū)中單胺遞質(zhì)的含量，熒光分光光度法檢測(cè)單胺氧化酶（MAO）活性。 結(jié)果 漆黃素（1.25 mg/kg， 2.5 mg/kg， 5 mg/kg， ig）與閾下劑量胡椒堿2.5 mg/kg·ip聯(lián)合應(yīng)用能顯著減少小鼠強(qiáng)迫游泳和懸尾實(shí)驗(yàn)中的不動(dòng)時(shí)間，且實(shí)驗(yàn)劑量范圍內(nèi)藥物不影響小鼠的自主活動(dòng)。低劑量漆黃素與閾下劑量胡椒堿合用能升高海馬、皮層和杏仁核中的單胺遞質(zhì)水平同時(shí)降低腦內(nèi)的MAO活性，并且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論 低劑量漆黃素與閾下劑量胡椒堿聯(lián)合用藥能改善抑郁癥樣行為，該機(jī)制可能是通過抑制單胺氧化酶的活性，從而增加相關(guān)的神經(jīng)遞質(zhì)。

[關(guān)鍵詞] 漆黃素；胡椒堿；抑郁癥；單胺遞質(zhì)；單胺氧化酶（MAO）

[中圖分類號(hào)] R964 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-9701（2014）25-0001-06

抑郁癥會(huì)影響身心健康，是一個(gè)常見且嚴(yán)重的精神障礙。抑郁癥患者目前約占世界人口的21%[1]，其主要癥狀是降低語言功能、運(yùn)動(dòng)遲緩等。目前，臨床上使用的抗抑郁藥物主要有三類：?jiǎn)伟费趸福∕AO）抑制劑，經(jīng)典的三環(huán)類抗抑郁藥藥物，選擇性5-HT重?cái)z取抑制劑5-羥色胺和去甲腎上腺素再攝取抑制劑[2，3]。因?yàn)檫@些藥物只有約65%的患者有一定的作用，且有藥效不穩(wěn)定、毒副作用大、起效時(shí)間長(zhǎng)等缺點(diǎn)。因此尋找新型的高效低毒藥物作為抗抑郁的治療非常的重要。

漆黃素（Fisetin，又名非瑟酮）是一種多酚類化合物，其含量在草莓中最高[4]。有文獻(xiàn)報(bào)道，漆黃素具有保護(hù)和促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞再生作用并且可以改善動(dòng)物的學(xué)習(xí)記憶能力[5，6]。此外，C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞，漆黃素抑制單胺氧化酶（MAO）活性亞型，它可以調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的腦兒茶酚胺和5 - 羥色胺（5-HT）含量的作用。胡椒堿是胡椒的主要成分，具有抗腫瘤、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)等藥理作用，目前已經(jīng)有胡椒堿的研究表明，其具有較強(qiáng)的抗抑郁活性，這可能與大腦酶單胺[7]（單胺氧化酶，MAO）的活性有關(guān)。文獻(xiàn)報(bào)道，胡椒堿能夠通過減慢白藜蘆醇的代謝和延長(zhǎng)其在體內(nèi)的時(shí)間來增強(qiáng)多酚類化合物白藜蘆醇的生物效應(yīng)[8]。庫爾卡尼和姜黃素和胡椒堿的其他建議結(jié)合能顯著增強(qiáng)姜黃素[9，26]的抗抑郁作用。

本研究首先提出了漆黃素和胡椒堿的聯(lián)合應(yīng)用，探討其聯(lián)用的抗抑郁機(jī)制，同時(shí)說明聯(lián)用是否能降低漆黃素的用藥劑量，來達(dá)到單用時(shí)的效果，從而提高漆黃素的生物利用度，為開發(fā)新一代的高效低毒天然抗抑郁藥物提供一條新的思路。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑

漆黃素和氟西汀均購自美國(guó)Sigma公司；嗎氯貝胺購自中國(guó)藥品生物制品檢定所。漆黃素、嗎氯貝胺和氟西汀均用蒸餾水溶解，漆黃素和嗎氯貝胺均灌胃給藥，氟西汀腹腔給藥。聯(lián)合用藥的給藥方式為：先灌胃給予漆黃素（1.25 mg/kg， 2.5 mg/kg 和5 mg/kg），45 min后再分別腹腔注射胡椒堿（2.5 mg/kg），15 min后進(jìn)行測(cè)試；在預(yù)實(shí)驗(yàn)中，給予胡椒堿和蒸餾水的小鼠在懸尾和強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間上沒有明顯差異，所以在正式實(shí)驗(yàn)中僅用胡椒堿作為對(duì)照組。

1.2實(shí)驗(yàn)儀器

BS-11OS型電子分析天平，北京賽多利斯天平有限公司；WH-966漩渦混合器，太倉市科教器材廠；DY89-Ⅱ型電動(dòng)玻璃勻漿機(jī)，寧波新芝生物科技股份有限公司；Bio-RAD 680酶標(biāo)儀，美國(guó)伯樂公司；RF-5301PC型熒光分光光度計(jì)，日本島津公司；JY92-2D超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)，寧波新芝生物科技股份有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

雄性ICR小鼠，體質(zhì)量為20～25g，購自溫州醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。小鼠隨機(jī)分組，8只/籠，室溫（25±1）℃，濕度（50±10）%，自然光照，自由攝食飲水條件下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。開始實(shí)驗(yàn)之前先適應(yīng)5d。小鼠隨機(jī)分組：正常對(duì)照組（Pip 2.5 mg/kg）、聯(lián)合給藥組（Pip 2.5 mg/kg+Fisetin 1.25 mg/kg， 2.5 mg/kg，5 mg/kg ）、氟西汀組（10 mg/kg）和嗎氯貝胺組（20 mg/kg ）。嗎氯貝胺組用于MAO活性的測(cè)定。

1.4 小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)[10]

小鼠末次給藥后，在小鼠的尾巴末端用醫(yī)用膠帶固定，然后將此懸掛在小鼠懸尾測(cè)試儀器中（其懸掛高度為50 cm）。觀察小鼠在6 min內(nèi)的行為并記錄最后4min內(nèi)小鼠的不動(dòng)時(shí)間。小鼠的不動(dòng)時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)：小鼠倒掛在儀器中表現(xiàn)為完全不動(dòng)。

1.5 小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)[11]

在測(cè)試前24h，將小鼠放在一個(gè)裝有水的圓形玻璃容器內(nèi)，水的深度為10 cm，水的溫度為24 ℃～25 ℃（圓形玻璃容器的規(guī)格：高25 cm；直徑10 cm）進(jìn)行強(qiáng)迫游泳訓(xùn)練，時(shí)間為15 min。24 h以后再次給藥，然后將小鼠再次放入玻璃圓缸內(nèi)做強(qiáng)迫游泳6 min，觀察并記錄后4 min小鼠的強(qiáng)迫游泳的不動(dòng)時(shí)間。不動(dòng)時(shí)間的標(biāo)準(zhǔn)為：小鼠停止掙扎浮在水中保持不動(dòng)，或僅僅做一些必要的輕微動(dòng)作保持頭部浮在水面上。

1.6 小鼠自發(fā)活動(dòng)[12]

小鼠末次給藥以后，將小鼠放進(jìn)自主活動(dòng)箱的測(cè)定小室里，先適應(yīng)5min，然后紀(jì)錄小鼠在活動(dòng)室的活動(dòng)情況，記錄時(shí)間為10 min。小鼠自發(fā)活動(dòng)的記錄標(biāo)準(zhǔn)：小鼠的爪子接觸或離開底部的不銹鋼橫柵時(shí)產(chǎn)生的與小鼠自主活動(dòng)成比例的電脈沖，這些電脈沖直接轉(zhuǎn)換成小鼠的活動(dòng)次數(shù)顯示在數(shù)據(jù)窗中。

1.7 小鼠腦內(nèi)單胺遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物含量測(cè)定[13]

給藥后（漆黃素， ig；氟西汀或胡椒堿， ip），將小鼠快速斷頭處死，按照小鼠腦圖譜在冰板上迅速分離出雙側(cè)的海馬、額葉皮層和杏仁核，稱重后放入-80℃冰箱中保存。按照每100 mg腦組織中加入200 μL冰冷的 0.4 mol/L HClO4溶液（溶液A），然后在冰上進(jìn)行超聲勻漿，接著4℃暗處靜置60min，低溫快速離心20 min（12，000 rpm，4 ℃），取上清液，加入上清液1/2量體積的B液，混勻，4℃暗處靜置60 min，再次低溫高速離心20 min（12，000 rpm，4℃），丟棄沉淀。樣品上清液經(jīng)過濾器過濾處理后（過濾器的孔徑大小為0.22 μm），取20 μL自動(dòng)進(jìn)樣。本實(shí)驗(yàn)采用的色譜柱為Diamonsilim C18（規(guī)格：150 mm×4.6 mm ID， 5 μm），流動(dòng)相配方：125 mmol/L 枸櫞酸-檸檬酸鈉緩沖液（pH = 4.3）0.1 mmol/L EDTA， 1.2 mmol/L辛烷基磺酸鈉，16%甲醇。流動(dòng)相配置：按照以上的流動(dòng)相配方稱取藥品，放入容器中，溶解均勻后用容量瓶定容，然后用0.22μm濾膜過濾，超聲20 min后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。流動(dòng)相的流速為1.0 mL/min 。采用電化學(xué)檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，腦組織中單胺及其代謝產(chǎn)物的含量以ng/g 濕組織重表示。

1.8 小鼠單胺氧化酶活性的測(cè)定[13]

小鼠末次給藥以后快速斷頭處死，分離出腦組織，然后稱重放入EP管中，將此EP管插入小碎冰里，接著在EP管中加入冰冷的4 mL磷酸緩沖液（pH = 7.8， 0.05 mol/L ），防止組織里單胺氧化酶活性降解，所有的操作都必須在冰上操作。然后在冰上進(jìn)行勻漿制成腦組織勻漿液，接著在2.5mL磷酸緩沖液中加入20%曲通0.4 mL與組織勻漿液0.2 mL，渦旋器混勻，然后在38 ℃孵育箱中預(yù)孵育10 min， 加入30 μL 2.19 mmol/L 底物（終濃度為22 μmol/L），37 ℃孵育箱中孵育30 min，再加入0.2 mL 5 mol/L 高氯酸溶液，冷卻后并離心（1500× g，10 min），取出0.5 mL上清液，然后加入濃度為1 mol/L 氫氧化鈉溶液 2.5 mL，混勻并使用熒光分光光度計(jì)測(cè)定產(chǎn)物4-氫喹啉的熒光強(qiáng)度。單胺氧化酶的活性以nmol/（30min ·mg） protein表示。本實(shí)驗(yàn)中的組織蛋白濃度采用Bradford法來測(cè)定。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法

數(shù)據(jù)采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，藥物作用及其組間差異采用單因素方差（One-way ANOVA）方法分析中的Dunnett t檢驗(yàn)分析，當(dāng)P < 0.05時(shí) 視為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 漆黃素和胡椒堿聯(lián)合用藥在小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)中的作用

結(jié)果圖1顯示，與空白對(duì)照組相比，小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)中漆黃素和胡椒堿聯(lián)合用藥組（Pip + Fisetin 1.25 mg/kg，2.5 mg/kg，5 mg/kg，）可以減少小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)中的不動(dòng)時(shí)間，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[F（4，35）=3.361，P=0.02<0.05 ]。陽性對(duì)照藥氟西汀組能顯著減少不動(dòng)時(shí)間。

2.2 漆黃素和胡椒堿聯(lián)合用藥在小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中的作用

結(jié)果如圖2顯示，在強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中，與空白對(duì)照組相比，漆黃素和胡椒堿聯(lián)合用藥組（Pip+Fisetin 1.25 mg/kg，2.5 mg/kg，5 mg/kg ）可以減少小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中的不動(dòng)時(shí)間，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[F（4，35）=3.794，P=0.011<0.05]。其作用效果與陽性對(duì)照樣氟西汀相似。

2.3漆黃素和胡椒堿聯(lián)合用藥在小鼠自發(fā)活動(dòng)中的作用

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3所示，與空白對(duì)照組相比，在自發(fā)活動(dòng)中，漆黃素和胡椒堿聯(lián)合給藥組（Pip+ Fisetin1.25 mg/kg，2.5 mg/kg，5 mg/kg）沒有明顯差異，從這個(gè)結(jié)果得出可以排除藥物的假陽性結(jié)果。

2.4 小鼠腦內(nèi)單胺遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物含量的變化

如表1所示，在小鼠海馬中，與空白對(duì)照組相比，漆黃素和胡椒堿聯(lián)合用藥組（Pip + Fisetin 2.5 mg/kg， Pip + Fisetin 5 mg/kg，ig）和氟西汀組（10 mg/kg， ip）均增加海馬中5-HT的含量，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[F（4，35）=5.170， P=0.0006<0.01]；去甲腎上腺素水平也增加，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[F（4，35）=4.312，P=0.002<0.01] 。

如表2所示，在額葉皮層中，與空白對(duì)照組相比，漆黃素和胡椒堿聯(lián)合用藥組（Pip + Fisetin 2.5 mg/kg ， Pip + Fisetin 5 mg/kg， ig）和氟西汀組（10 mg/kg， ip）增加5-HT的含量，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[F（4，35）=3.968， P=0.036<0.05]；去甲腎上腺素水平也增加，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[F（4，35）=3.411， P=0.04<0.05）]。

如表3所示，在杏仁核中，與空白對(duì)照組相比，漆黃素和胡椒堿聯(lián)合用藥組（Pip + Fisetin 2.5 mg/kg， Pip + Fisetin 5 mg/kg，ig）和氟西汀組（10 mg/kg，ip）均增加5-HT的含量，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[F（4，35）=4.668， P=0.002<0.01 ]；去甲腎上腺素水平也增加，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[F（4，35）=3.156， P=0.014<0.05] 。

2.5 漆黃素和胡椒堿聯(lián)合用藥對(duì)小鼠單胺氧化酶活性的影響

結(jié)果如表4所示，與空白對(duì)照組相比，漆黃素和胡椒堿聯(lián)合用藥組（Pip + Fisetin1.25 mg/kg，2.5 mg/kg，5 mg/kg）能夠抑制單胺氧化酶A的活性，并且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[F（4，35）=4.199，P=0.0028<0.01] ，但是對(duì)單胺氧化酶B沒有作用。此結(jié)果和單胺氧化酶A抑制劑嗎氯貝胺的作用相似。

3討論

許多研究表明，抑郁癥具有一定的遺傳性，臨床研究顯示大概40%～50%抑郁癥患者來源于基因的遺傳，但是抑郁癥發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，其涉及到機(jī)體交感神經(jīng)、免疫系統(tǒng)和內(nèi)分泌系統(tǒng)等多個(gè)方面。目前研究表明通過藥物的聯(lián)合應(yīng)用來治療抑郁癥具有以下優(yōu)勢(shì)：減少藥物臨床不良反應(yīng)，戒斷綜合征[14，15]以及對(duì)心理的傷害作用，快速地提高藥物療效。本研究從2011年1月～2013年12月份采用漆黃素和胡椒堿的聯(lián)合應(yīng)用，從行為學(xué)、分子生物學(xué)的角度來闡明聯(lián)合用藥的藥理效應(yīng)及其作用靶點(diǎn)。

當(dāng)人類處于無法改變的惡劣環(huán)境條件下，抑郁癥患者更加傾向于表現(xiàn)出消極狀態(tài)。在抗抑郁樣作用的研究中，行為學(xué)實(shí)驗(yàn)具有重要的作用，小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)和小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)是評(píng)價(jià)抑郁樣行為的經(jīng)典模型，通過觀察其不動(dòng)時(shí)間可以確定藥物的抗抑郁樣效應(yīng)并且確定其作用靶標(biāo)[16，17]。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明，漆黃素與胡椒堿聯(lián)合應(yīng)用能顯著減少小鼠在懸尾實(shí)驗(yàn)（TST）和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)（FST）的不動(dòng)時(shí)間，說明漆黃素和胡椒堿聯(lián)合應(yīng)用具有抗抑郁樣作用。并且本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)與單用各個(gè)劑量的漆黃素相比，本研究中結(jié)果未顯示，Pip 2.5 mg/kg+Fisetin 5 mg/kg的聯(lián)合應(yīng)用與單用Fisetin（20 mg/kg）的抗抑郁樣行為效果相當(dāng)，說明閾下劑量的胡椒堿能增強(qiáng)漆黃素的抗抑郁活性。同時(shí)，為排除藥物中樞興奮作用造成的假陽性結(jié)果，本研究觀察了漆黃素和胡椒堿的聯(lián)合應(yīng)用對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響。結(jié)果顯示，在產(chǎn)生抗抑郁樣作用的劑量范圍內(nèi)，該聯(lián)合用藥對(duì)小鼠自主活動(dòng)次數(shù)沒有明顯影響，可排除假陽性的結(jié)果，進(jìn)一步證實(shí)漆黃素和胡椒堿聯(lián)合用藥的抗抑郁作用。

大量研究表明，抑郁癥患者體內(nèi)5-羥色胺和兒茶酚胺類神經(jīng)遞質(zhì)的降解增加，從而在體內(nèi)的表達(dá)減少?，F(xiàn)代神經(jīng)生物學(xué)的近期研究發(fā)現(xiàn)，應(yīng)激誘導(dǎo)的大鼠抑郁模型中額葉皮層體積的縮小和突觸相關(guān)蛋白表達(dá)的減少與腦區(qū)中5-HT及5-HT受體的異常密切相關(guān)[18]。另外，一些抑郁癥的表現(xiàn)如對(duì)于主動(dòng)或者積極應(yīng)對(duì)的行為減少以及被動(dòng)或者消極應(yīng)對(duì)的行為增加，這些表現(xiàn)與去甲腎上腺素（NE）和5-羥色胺（5-HT）的含量密切相關(guān)。5-HT是人體內(nèi)的神經(jīng)遞質(zhì)，其在生理和病理過程中具有重要的作用，如調(diào)節(jié)情緒、學(xué)習(xí)、睡眠和性行為等，這些在重型的抑郁癥患者中都能表現(xiàn)出異常特征。另外，慢性應(yīng)激引起的抑郁樣行為學(xué)的改變（認(rèn)知和行為發(fā)生障礙）與腦內(nèi)5-HT神經(jīng)遞質(zhì)的變化密切相關(guān)[19]。文獻(xiàn)報(bào)道通過減少腦區(qū)內(nèi)5-HT的降解，激動(dòng)5-HT受體，提高胞內(nèi)AC-cAMP的活性和CREB活性具有改善抑郁樣的作用[20]，因此5-HT在發(fā)揮抗抑郁樣作用中具有重要的作用。前期研究表明漆黃素可以通過抑制單胺氧化酶活性來增加腦內(nèi)的單胺遞質(zhì)水平，從而來改善抑郁樣行為學(xué)的改變[21]。但是漆黃素的生物活性比較低，同時(shí)胡椒堿是一種生物活性增強(qiáng)劑，能提高其他藥物的生物利用度。因此本實(shí)驗(yàn)通過觀察腦區(qū)的單胺遞質(zhì)水平的變化來尋找其聯(lián)合用藥的作用靶標(biāo)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，低劑量漆黃素（2.5 mg/kg和5 mg/kg）與閾下劑量胡椒堿合用能劑量依賴性提高小鼠海馬、額葉皮層和杏仁核的5-HT水平，這與陽性對(duì)照藥氟西汀的結(jié)果相似；漆黃素（5 mg/kg）與閾下劑量胡椒堿合用后可增加該三個(gè)腦區(qū)中去甲腎上腺素（NE）的含量。研究表明，海馬、額葉皮層和杏仁核中單胺遞質(zhì)的變化與動(dòng)物的情感、動(dòng)機(jī)、學(xué)習(xí)和記憶行為有密切關(guān)系[22]。如今采用的傳統(tǒng)的抗抑郁藥是通過抑制神經(jīng)遞質(zhì)再攝取或減少其降解從而增加去甲腎上腺素的含量?；谛袨閷W(xué)和單胺遞質(zhì)的結(jié)果，漆黃素與胡椒堿的協(xié)同作用可能是通過腦內(nèi)單胺遞質(zhì)（去甲腎上腺素和5-羥色胺）代謝的調(diào)節(jié)，從而來拮抗抑郁癥的發(fā)生。這個(gè)與目前研究較多的5-羥色胺和去甲腎上腺素重吸收抑制劑或者選擇性5-羥色胺或去甲腎上腺素重吸收抑制劑的機(jī)制相似，都是通過增加腦內(nèi)的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)水平來改善抑郁癥狀。

改善抑郁癥除了可以通過增加突觸內(nèi)的神經(jīng)遞質(zhì)水平，也可以通過抑制單胺氧化酶來增加突觸間隙中的神經(jīng)遞質(zhì)含量。單胺氧化酶是一類可以催化降解單胺神經(jīng)遞質(zhì)如5-羥色胺，去甲腎上腺素和多巴胺的線粒體結(jié)合同工酶[23]。根據(jù)底物的特異性和對(duì)抑制劑的敏感性單胺氧化酶可以分為MAO-A和MAO-B兩類。其中單胺氧化酶-A主要是代謝腦區(qū)內(nèi)與抑郁密切相關(guān)的去甲腎上腺素和5-羥色胺，單胺氧化酶-B主要是代謝多巴胺和去甲腎上腺素[24]。目前臨床上抗抑郁藥物基本上是通過抑制單胺氧化酶的活性（如嗎氯貝胺）和增加中樞神經(jīng)遞質(zhì)水平（如丙咪嗪）來達(dá)到抗抑郁作用的[25]。然而單胺氧化酶抑制劑比三環(huán)類抗抑郁藥（丙咪嗪）的效果更好。為了證實(shí)漆黃素和胡椒堿的聯(lián)合用藥是否通過抑制單胺氧化酶的活性來增加中樞突觸內(nèi)的單胺遞質(zhì)水平，本實(shí)驗(yàn)測(cè)定了用藥后腦組織的單胺氧化酶活性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，漆黃素與閾下劑量胡椒堿聯(lián)合用藥能夠抑制單胺氧化酶-A的活性，這與各個(gè)腦區(qū)中單胺遞質(zhì)水平的變化一致。與單胺氧化酶A不同，漆黃素與胡椒堿的聯(lián)合應(yīng)用對(duì)MAO-B的活性沒有太大的影響。以上對(duì)單胺氧化酶活性的作用與陽性對(duì)照藥嗎氯貝胺的作用結(jié)果相似。進(jìn)一步說明了漆黃素與胡椒堿聯(lián)合應(yīng)用可能是通過抑制腦內(nèi)單胺氧酶的活性來增加腦內(nèi)突觸中單胺遞質(zhì)的水平來改善抑郁樣行為學(xué)。此外，新型的選擇性MAO-AB抑制劑如TV-3326具有抗抑郁樣作用，但是不會(huì)產(chǎn)生“奶酪”反應(yīng)（例如，急性高血壓和頭痛）。說明單胺氧化酶抑制劑為治療抑郁癥提供了良好的作用效果。

在小鼠強(qiáng)迫游泳和小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)漆黃素和閾下劑量的胡椒堿聯(lián)合應(yīng)用具有明顯的抗抑郁樣作用，該作用可能與中樞單胺能神經(jīng)系統(tǒng)有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)漆黃素和胡椒堿的聯(lián)合使用可能是通過抑制MAO-A活性來調(diào)節(jié)腦內(nèi)5-羥色胺和去甲腎上腺素的遞質(zhì)代謝來發(fā)揮抗抑郁樣作用。由此，通過聯(lián)合使用胡椒堿增加漆黃素的藥理效果，為減少藥物的毒副作用，開發(fā)新型高效的天然抗抑郁藥提供了新的思路，后續(xù)的研究將進(jìn)一步從機(jī)制通路來表明其抗抑郁樣作用，并尋找新的藥物作用靶點(diǎn)。

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（收稿日期：2014-05-07）

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（收稿日期：2014-05-07）