阮 棟 林映才 張罕星 陳 偉 王 爽
(廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動物科學(xué)研究所,畜禽育種國家重點(diǎn)實驗室,農(nóng)業(yè)部動物營養(yǎng)與飼料(華南)重點(diǎn)開放實驗室,廣東省動物育種與營養(yǎng)公共實驗室,廣東省畜禽育種與營養(yǎng)研究重點(diǎn)實驗室,廣州 510640)
棉籽粕(CSM)作為棉籽榨油后的副產(chǎn)物,粗蛋白質(zhì)含量高達(dá)40% ~45%,是畜禽重要的蛋白質(zhì)飼料原料,但因含有對動物有毒的棉酚,影響了其在畜禽配合飼料中的應(yīng)用。棉酚是一種不溶于水而溶于有機(jī)溶劑的黃褐色聚酚色素,按存在形式可分為結(jié)合棉酚(BG)和游離棉酚(FG)。BG無毒性,在動物消化道內(nèi)大部分不被吸收而排出,小部分則會在體內(nèi)分解成FG。FG的毒性主要與其所含的活性醛基和活性羥基有關(guān),不僅對心臟、肝臟、腎臟等實質(zhì)性器官及神經(jīng)、血管有毒害作用,而且能與棉籽蛋白質(zhì)中賴氨酸的 ε-氨基(ε-NH2)發(fā)生美拉德反應(yīng),降低其營養(yǎng)價值[1]。在當(dāng)前蛋白質(zhì)飼料資源緊缺的環(huán)境下,研究CSM在蛋鴨飼料中的合理應(yīng)用技術(shù)對蛋鴨產(chǎn)業(yè)發(fā)展具有重要意義。Koyacic[2]報道,棉酚藥理劑量具有抗氧化性,而產(chǎn)生致毒劑量時又具有促氧化作用。Basini等[3]研究發(fā)現(xiàn),5~25 μg/mL的棉酚能抑制母豬顆粒細(xì)胞雌二醇和孕酮分泌,抑制超氧化物歧化酶(SOD)活性,導(dǎo)致超氧負(fù)離子產(chǎn)生增多,刺激血管內(nèi)皮生長因子生成。Gamboa等[4-5]研究表明,棉酚在肉仔雞血漿、肝臟、腎臟和肌肉中蓄積量隨飼糧中FG含量增加呈線性升高趨勢;楊茹潔[6]研究發(fā)現(xiàn),在飼糧中添加25%未脫毒 CSM(飼糧中FG含量為179 mg/kg)對28~40周齡海蘭商品蛋雞產(chǎn)蛋率、平均蛋重、日產(chǎn)蛋重、料蛋比、平均采食量及死淘率均無顯著影響。等[7]在飼糧中添加15%的CSM(飼糧中FG含量為186 mg/kg)對1~42日齡羅氏308肉雞血漿血紅素、鐵含量及紅細(xì)胞壓積值無顯著影響。目前我國蛋鴨年存欄量已達(dá)到2億羽,蛋鴨飼料中廣泛使用CSM等非常規(guī)飼料,但用量缺乏科學(xué)依據(jù)。本試驗通過研究飼糧CSM水平對高峰期蛋鴨產(chǎn)蛋性能、血漿生化指標(biāo)、蛋品質(zhì)、卵巢形態(tài)及棉酚殘留的影響,以確定產(chǎn)蛋高峰期蛋鴨飼糧中適宜CSM水平,旨在為中國蛋鴨飼糧中CSM的合理利用提供參考依據(jù)。
試驗在廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動物科學(xué)研究所花都蛋鴨試驗基地進(jìn)行,采用單因子隨機(jī)分組試驗設(shè)計,選用19周齡福建龍巖山麻鴨母鴨720只,隨機(jī)分為6個組,每組4個重復(fù),每個重復(fù)30只鴨。試驗鴨地面平養(yǎng)(水域面積∶陸地面積為1∶3),其他按常規(guī)操作規(guī)程進(jìn)行。蛋鴨產(chǎn)蛋率達(dá)到80%以上時(試驗鴨為19周齡)開始正式試驗,試驗期為3個月。試驗期間日平均氣溫和濕度在18~32℃和45% ~72%變化,天氣狀況良好。
試驗飼糧采用玉米-豆粕型飼糧,各組飼糧CSM 水平分別為0(對照)、4.5%、9.0%、13.5%、18.0%和22.5%,并保持各組試驗鴨飼糧營養(yǎng)水平一致,試驗飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。試驗飼糧的代謝能、粗蛋白質(zhì)和鈣的設(shè)定水平參照本課題組前期研究結(jié)果。
試驗鴨飼養(yǎng)3個月后,每重復(fù)選接近平均體重試驗鴨2只,稱活重后,每只翅靜脈采血10 mL進(jìn)行抗凝處理,3 000 r/min離心15 min,制備血漿,分裝于Ep管中,-20℃凍存,待測血漿生化指標(biāo)。采血后試驗鴨頸部放血致死,用手術(shù)刀割取左葉肝和左腎前半端,切成2~3 mm厚,放入10%甲醛溶液中浸泡固定,用于組織病理切片分析。另各取2份肝、腎及胸肌裝入樣品袋,于-80℃凍存,備測FG含量。在高峰期第3個月初,從每個重復(fù)欄選取5枚未破損蛋(接近平均蛋重)共計120枚,做好標(biāo)記,其中3枚用于測定蛋品質(zhì)指標(biāo),另2枚蛋黃、蛋清分別合并制成1個樣,待測蛋黃和蛋清中FG含量。
1.4.1 產(chǎn)蛋性能
試驗期間,各組間在正常采食量前提下所有欄試驗鴨的采食量每天都保持一致,定量飼喂,準(zhǔn)確記錄給料量和剩料量,統(tǒng)計試驗期間的平均日采食量。準(zhǔn)確記錄試驗鴨每天的蛋重、產(chǎn)蛋數(shù)量及破蛋、畸形蛋數(shù)量和重量,統(tǒng)計產(chǎn)蛋率、平均蛋重、日產(chǎn)蛋重、料蛋比、破蛋率、畸形蛋率。
1.4.2 蛋品質(zhì)指標(biāo)
蛋殼厚度用數(shù)顯千分尺測定蛋鈍端、中部和銳端,計算平均值;蛋殼強(qiáng)度、哈氏單位和蛋黃顏色采用強(qiáng)度儀和全自動蛋品分析儀(ORKA,北京天翔飛域儀器設(shè)備有限公司)測定,測定過程在48 h內(nèi)完成。
1.4.3 血漿生化指標(biāo)
試驗鴨血漿中丙二醛(MDA)含量采用硫代巴比妥酸比色法;血漿還原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量采用二硫代二硝基甲酸比色法;血漿總抗氧化能力(T-AOC)采用Fe2+與菲啉類形成穩(wěn)固絡(luò)合物比色法;血漿堿性磷酸酶(ALP)活性采用比色法,1 000 mL血漿37℃與基質(zhì)作用15 min產(chǎn)生1 mg酚為1個金氏單位;血漿谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)活性采用賴氏法,均在紫外可見光分光光度儀(北京瑞利分析儀器公司,UV-1601)上用南京建成生物工程研究所提供的相應(yīng)試劑盒測定。
1.4.4 組織病理切片分析
將固定好的組織樣品石蠟包埋,常規(guī)采用蘇木精-伊紅染色法,制作好的切片于反置顯微鏡下觀察組織的病理變化,并記錄和拍照。肝臟脂肪變性程度判定:隨機(jī)選擇10個低倍視野(100×),確定肝小葉內(nèi)含脂滴數(shù)/總細(xì)胞數(shù)百分比。
1.4.5 FG含量測定
飼料、組織、蛋黃、蛋清中FG含量參照Kim等[8]方法,采用高效液相色譜儀(Waters 2695,美國)測定。采用Waters XBridge C18柱(4.6 mm×250 mm×5μm),柱溫25℃,流動相為甲醇-水,每100 mL溶液含0.1 mL磷酸,流速0.8 mL/min,Waters 2489紫外檢測器,檢測波長為236 nm,檢測限為1.0 mg/kg。棉酚對照品(批號111517-200001,規(guī)格20 mg)購自廣州藥品檢驗所。另外送1份組織、直腸內(nèi)容物及蛋黃、蛋清至中國廣州分析測試中心,采用SN 0535—1996所述方法檢測FG含量。
表1 試驗飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets(air-dry basis) %
試驗數(shù)據(jù)采用SAS 8.1軟件進(jìn)行單因子方差分析(one-way ANOVA),Duncan氏法進(jìn)行多重比較。結(jié)果以平均值表示,顯著性水平為P<0.05。
由表2可見,與對照組相比,13.5%、18.0%和22.5%組顯著降低了平均蛋重(P<0.05),22.5%組顯著降低了平均蛋重和日產(chǎn)蛋重并顯著提高了料蛋比(P<0.05);飼糧CSM水平對高峰期蛋鴨產(chǎn)蛋率、破蛋率、畸形蛋率無顯著影響(P>0.05)。
表2 飼糧CSM水平對高峰期蛋鴨產(chǎn)蛋性能的影響Table 2 Effects of dietary CSM level on laying performance of laying ducks at peak production
由表3可見,與對照組相比,9.0%、13.5%、18.0%和22.5%組顯著降低了血漿GSH含量和GSH/GSSG值;9.0%、18.0%和22.5%組顯著提高了血漿MDA含量(P<0.05),各組血漿GSSG含量、T-AOC及GOT、GPT和ALP活性均差異不顯著(P>0.05)。
表3 飼糧CSM水平對高峰期蛋鴨血漿生化指標(biāo)的影響Table 3 Effects of dietary CSM level on plasma biochemical parameters of laying ducks at peak production
由表4可見,飼糧CSM水平對高峰期蛋鴨蛋殼厚度、蛋殼強(qiáng)度、蛋形指數(shù)、哈氏單位、蛋黃顏色及蛋黃比均無顯著影響(P>0.05)。
試驗進(jìn)行3個月后,屠宰試驗鴨,取肝臟和腎臟做切片分析。圖1顯示,對照組、4.5%和9.0%組肝臟組織小葉完整、肝細(xì)胞形態(tài)規(guī)則,肝臟匯管區(qū)、中央靜脈周圍僅可見少量肝細(xì)胞脂肪變性(1% ~5%),未見壞死現(xiàn)象。13.5%、18.0%和22.5%組肝臟脂肪變性明顯增加(10% ~70%),肝竇間隙增大,匯管區(qū)出現(xiàn)組織纖維增生,并出現(xiàn)淤血,隨著飼糧CSM水平遞增趨于嚴(yán)重。
表4 飼糧CSM水平對高峰期蛋鴨蛋品質(zhì)的影響Table 4 Effects of dietary CSM level on egg quality of laying ducks at peak production
圖1 蛋鴨肝臟切片顯微結(jié)構(gòu)Fig.1 Microstructure of liver section of laying ducks(400×)
圖2 顯示,對照組試驗鴨腎臟腎小管形態(tài)規(guī)則,無明顯壞死脫落現(xiàn)象;4.5%組局部腎小管上皮細(xì)胞空泡變性約1%~5%;9.0%組局部可見腎小管上皮細(xì)胞壞死灶,腎小管上皮細(xì)胞脫落嚴(yán)重,局部出現(xiàn)纖維組織增生;13.5%組腎小球出現(xiàn)萎縮,腎間質(zhì)有淤血;18.0%和22.5%組腎小管細(xì)胞出現(xiàn)大面積壞死脫落,并形成鈣化灶。
圖3顯示,對照組和4.5%組卵巢中優(yōu)勢卵泡形態(tài)規(guī)則,無明顯異常病變。9.0%、13.5%、18.0%和22.5%組可明顯觀察到優(yōu)勢卵泡變形破裂、褶皺,卵泡血管壁有出血點(diǎn),局部呈融溶狀。
檢測結(jié)果表明,在22.5%組試驗鴨肝臟、腎臟、胸肌及蛋清、蛋黃中并未檢測出FG殘留,僅在試驗鴨直腸內(nèi)容物中檢測到FG含量為4.55 mg/kg。
本試驗結(jié)果表明,飼糧CSM水平≥13.5%時可顯著降低平均蛋重,達(dá)到22.5%時可顯著降低平均蛋重和日產(chǎn)蛋重并顯著提高料蛋比。李建國等[9]選用43周齡海蘭蛋雞飼喂 FG含量為0、20、70、120 mg/kg的試驗飼糧,結(jié)果表明,飼糧FG含量對產(chǎn)蛋率、蛋重影響不顯著;當(dāng)FG含量達(dá)到120 mg/kg時,采食量較對照組顯著降低。Lordelo等[10]研究發(fā)現(xiàn),飼糧含200 mg/kg的右旋異構(gòu)體FG可顯著降低34周齡海蘭蛋雞和44周齡科比快羽肉種雞產(chǎn)蛋率,達(dá)到400 mg/kg時會降低采食量,而左旋異構(gòu)體對試驗雞產(chǎn)蛋率無顯著影響,僅降低快羽肉種雞采食量。這說明高含量的FG會影響飼糧適口性,降低產(chǎn)蛋率和蛋重,不同異構(gòu)體對禽產(chǎn)蛋性能有不同影響,且不同種屬間對棉酚表現(xiàn)出耐受差異,相比蛋雞,蛋鴨對棉酚的耐受性更差。
圖2 蛋鴨腎臟切片顯微結(jié)構(gòu)Fig.2 Microstructure of kidney section of laying ducks(400×)
圖3 蛋鴨卵巢形態(tài)Fig.3 Ovarian morphology of laying ducks
GOT、GPT是氨基酸降解過程中的重要轉(zhuǎn)氨酶,其中GPT主要存在于肝細(xì)胞胞漿內(nèi),以心臟和肝臟中的活性最高,而血清中活性很低,是反映肝細(xì)胞受損程度最敏感的指標(biāo),GPT活性增高主要由病毒性肝炎引起,而心臟功能不全或肝壞死則主要導(dǎo)致 GOT 活性增高[11]。Braham 等[12]指出,給斷奶仔豬飼喂含228~440 mg/kg棉酚的CSM飼糧15周可以引起肝臟的損傷,導(dǎo)致血清GOT活性上升,但對血清GPT活性無顯著影響;尹遜慧[13]試驗表明,使用15%的CSM(飼糧FG含量為73.25 mg/kg)對1~20日齡櫻桃谷肉鴨血清GOT、GPT及ALP活性無顯著影響。曾秋鳳等[14]采用棉籽餅粕等蛋白質(zhì)飼料替代玉米-豆粕型基礎(chǔ)飼糧中0、25%、50%、75%和100%豆粕(100%替代組CSM用量為23.27%,飼糧FG含量為156 mg/kg)飼喂14日齡櫻桃谷肉鴨至35日齡,結(jié)果表明,各組間血漿GOT和GPT活性無顯著差異。Ali等[15]給小鼠每日注射5 mg/kg的醋酸棉酚2周,除顯著降低小鼠體重、肝臟 GSH含量和DNA酶,提高α-葡萄糖苷酶和RNA酶外,對血清GOT和GPT活性無顯著影響。本試驗結(jié)果表明,使用 22.5%的 CSM(飼糧 FG含量為50.16 mg/kg)對高峰期蛋鴨血漿GOT和GPT活性無顯著影響,結(jié)合肝臟切片結(jié)果,說明除高飼糧CSM水平組蛋鴨肝臟肝細(xì)胞出現(xiàn)明顯脂肪變性外,未對其肝功能造成明顯破壞作用,這與曾秋鳳等[14]推測肉鴨對飼料棉酚的敏感性高于肉雞,且病理表現(xiàn)形式或靶器官可能不一致結(jié)果相符。但關(guān)于鴨對飼料棉酚的耐受性及殘留和消除規(guī)律目前并未見報道研究,且研究深度不夠,僅停留在CSM對鴨生長性能的影響。GSH是一種含量豐富的非蛋白巰基抗氧化物,能破壞過氧化氫、脂質(zhì)過氧化物及氧自由基,保護(hù)機(jī)體免受氧化應(yīng)激。MDA是由自由基引發(fā)一種高活性的脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物,組織內(nèi)產(chǎn)生的自由基若不及時清除,會導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)MDA含量升高。T-AOC是用于衡量機(jī)體抗氧化系統(tǒng)功能狀況的綜合性指標(biāo),它的大小可以代表和反映機(jī)體抗氧化酶系統(tǒng)和非酶系統(tǒng)對外來刺激的代償能力以及機(jī)體自由基代謝的狀態(tài)。Koyacic[2]報道棉酚藥理劑量具有抗氧化性,而產(chǎn)生至毒劑量時又具有促氧化作用。倪鳴等[16]探討了醋酸棉酚對小鼠黃體細(xì)胞凋亡的影響,結(jié)果表明醋酸棉酚可以直接損傷小鼠黃體細(xì)胞,產(chǎn)生明顯的細(xì)胞毒性,且這種毒性作用與棉酚劑量呈正相關(guān);SOD活性與孕激素含量隨著棉酚劑量的增高而降低,而MDA含量變化趨勢與此相反。趙萍[17]報道,給雄性細(xì)毛羊飼喂含棉籽殼的飼糧8個月能顯著提高血清、肝臟中MDA含量,降低GSH含量、T-AOC和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性。認(rèn)為棉酚造成了雄性細(xì)毛羊血清和肝臟的氧化損傷。本試驗中,飼糧CSM水平≥9.0%時顯著降低了血漿GSH含量和GSH/GSSG值,并提高了MDA含量,但對T-AOC無顯著影響。這說明飼糧CSM水平過高會對蛋鴨機(jī)體的氧化還原平衡體系有不利影響。
本試驗中高達(dá)22.5%的飼糧CSM水平(飼糧FG含量為50.16 mg/kg)對高峰期蛋鴨蛋品質(zhì)無顯著影響。楊茹潔[6]研究發(fā)現(xiàn),當(dāng)飼糧中FG含量高于100 mg/kg后蛋雞蛋黃出現(xiàn)綠黃,蛋白顏色渾濁,煮熟后蛋黃變硬。劉錦湖[18]試驗表明,蛋雞飼糧FG含量達(dá)到55.85 mg/kg時,雞蛋常溫保存3周蛋黃出現(xiàn)斑點(diǎn)微雜色,隨著時間延長出現(xiàn)紅棕色,這可能是棉酚與鐵離子結(jié)合,形成螯合物導(dǎo)致。高布潛等[19]研究證實,蛋雞飼喂CSM 引起雞蛋變色主要是由于CSM和棉油中不飽和脂肪酸易被氧氣氧化變?yōu)榄h(huán)丙烯脂肪酸所致。環(huán)丙烯脂肪酸可以使卵黃膜通透性增高,卵黃中的鐵離子可以滲透到蛋清中并與蛋清中的蛋白質(zhì)形成紅色復(fù)合物,使蛋清變紅。同時,環(huán)丙烯脂肪酸可以使蛋黃變硬,加熱產(chǎn)生“橡皮蛋”。關(guān)于影響蛋品質(zhì)的FG的限量,國外學(xué)者推薦蛋雞飼糧中最高允許量為20 mg/kg。因此,添加適量的CSM對蛋形指數(shù)、蛋殼厚度、蛋殼強(qiáng)度等蛋的外在品質(zhì)無顯著影響,但其抗?fàn)I養(yǎng)因子對儲存期或腌制期的蛋黃、蛋清品質(zhì)的影響仍需進(jìn)一步深入系統(tǒng)研究。
FG對畜禽有毒害作用,吸收入血后能損害心臟、肝臟、腎臟、生殖器官等實質(zhì)器官,可導(dǎo)致心力衰竭,引起肺水腫和全身缺氧性變化,還能增強(qiáng)血管壁通透性,使受害組織發(fā)生漿液性浸潤和出血性炎癥以及體腔積液[20]。棉酚主要代謝場所是肝臟,主要隨同糞便排出體外,其次經(jīng)尿液排出。由于排泄緩慢,因此在體內(nèi)有明顯的蓄積作用。Abou-Donia等[21]利用14C放射追蹤的方法研究了狗、鼠和豬體內(nèi)棉酚排出情況,發(fā)現(xiàn)大部分棉酚都可以通過糞便排出體外。Gamboa等[4]采用不同榨油工藝的CSM(FG含量為0.033%~0.180%,總棉酚含量為0.974% ~1.459%),添加水平為28%,研究棉酚在1~21日齡肉仔雞組織中的沉積規(guī)律發(fā)現(xiàn),棉酚異構(gòu)體(左旋和右旋)在試驗雞血漿、肝臟、腎臟和肌肉中蓄積量隨飼糧中FG含量增加呈線性升高趨勢。肝臟中TG含量為71.4~313.6μg/g DM,顯著高于腎臟的9.2~36.3μg/g DM、血漿中的3.0~14.6μg/mL和肌肉中的 2.1 ~9.8 mg/kg DM。Lordelo 等[10,22]研究表明,3~21日齡肉仔雞飼糧 FG含量達(dá)到100 mg/kg時,試驗雞肝臟、腎臟和肌肉中FG含量分別為61、9和2 mg/kg DM;同時對36周齡海蘭蛋雞飼喂含200、400 mg/kg FG的飼糧至第3周時發(fā)現(xiàn)其蛋黃中FG含量分別達(dá)到235、386 mg/kg DM,肝臟、腎臟和雞肉中FG含量分別為243、43和6 mg/kg DM。這說明,棉酚在動物體內(nèi)各組織器官中殘留是不均勻的,肝臟最多,其次是蛋、腎臟和血液,肉中最低。近年來,食品安全正逐漸成為人們?nèi)找骊P(guān)注和重視的問題。美國食品及藥品管理局規(guī)定食品中FG殘留不超過0.045%,前蘇聯(lián)國家標(biāo)準(zhǔn)為不超過0.01%[23],我國《國家衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》(GB 2716—88)規(guī)定棉籽油FG含量不超過0.02%。這些標(biāo)準(zhǔn)說明了FG在食品中限量缺乏一致標(biāo)準(zhǔn),而我國除了對棉籽油FG含量有規(guī)定外,并沒有對其他食品中FG含量作出規(guī)定,對于市場上畜產(chǎn)品中FG殘留量并不清楚。本試驗中飼糧CSM水平達(dá)到22.5%時(飼糧FG含量為50.16 mg/kg),在蛋鴨肝臟、腎臟、胸肌、蛋黃、蛋清中未檢測出FG殘留,僅在直腸內(nèi)容物中檢出FG含量為4.55 mg/kg。但肝臟已出現(xiàn)明顯脂肪變性,腎臟腎小管大面積壞死脫落,并形成鈣化灶。這說明FG攝入量在機(jī)體的耐受范圍內(nèi)可被機(jī)體代謝掉,但仍可對器官造成病理性損傷,并且飼糧CSM水平達(dá)到9.0%(飼糧FG含量為28.03 mg/kg)即可明顯破壞優(yōu)勢卵泡的完整性,卵泡變形破裂,局部呈融溶狀,卵泡血管壁出現(xiàn)出血點(diǎn);而棉酚作為血管毒素,可與血紅蛋白結(jié)合。龍安梅[24]試驗證實,醋酸棉酚在低劑量下能抑制豬原代培養(yǎng)黃體細(xì)胞的增殖和誘導(dǎo)其凋亡,高劑量下除誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡外,主要對細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞毒性。Oliver等[25]、Xu 等[26]試驗證實,左旋棉酚可以通過線粒體依賴性細(xì)胞凋亡通路和配體-受體激活的Caspase依賴性細(xì)胞凋亡通路誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡抑制腫瘤生長。陳文飛等[27]研究表明,醋酸棉酚可通過降低抑癌基因甲基化誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,介導(dǎo)抗腫瘤作用。因此,推斷棉酚在低劑量(FG含量為28.03 mg/kg)時可能誘導(dǎo)了蛋鴨卵巢黃體細(xì)胞的凋亡,故在制定蛋鴨畜產(chǎn)品安全限量時需充分考慮其影響。
在本試驗條件下,綜合產(chǎn)蛋性能、抗氧化性能、組織病理分析及棉酚殘留結(jié)果,產(chǎn)蛋高峰期蛋鴨飼糧CSM適宜水平需低于9.0%。
[1]王利,汪開毓.動物棉酚中毒的研究進(jìn)展[J].畜禽業(yè),2002(5):26-28.
[2]KOYACIC P.Mechanism of drug and toxic actions of gossypol:focus on reactive oxygen species and electron transfer[J].Current Medicinal Chemistry,2003,10(24):2711-2718.
[3]BASINI G,BUSSOLATI S,BAIONI L,et al.Gossypol,a polyphenolic aldehyde from cotton plant,interferes with swine granulose cell function[J].Domestic Animal Endocrinology,2009,37(1):30-36.
[4]GAMBOA D A,CALHOUN M C,KUHLMANN S W,et al.Tissue distribution of gossypol enantiomers in broilers fed various cottonseed meals[J].Poultry Science,2001,80(7):920-925.
[5]GAMBOA D A,CALHOUN M C,KUHLMANN S W,et al.Use of expander cottonseed meal in broiler diets formulated on a digestible amino acid basis[J].Poultry Science,2001,80(6):789-794.
[6]楊茹潔.可消化AA平衡的高棉粕飼糧對蛋雞的生產(chǎn)性能、健康狀況及蛋品質(zhì)的影響[D].碩士學(xué)位論文.太谷:山西農(nóng)業(yè)大學(xué),2003.
[8]KIM H L,CALHOUN M C.Determination of gossypol in plasma and tissues of animals[J].Inform,1995,6:486.
[9]李建國,王建華.游離棉酚水平對海蘭蛋雞生產(chǎn)性能的影響[J].家畜生態(tài)學(xué)報,2007,28(6):31-33.
[10]LORDELO M M,CALHOUN M C,DALE N M,et al.Relative toxicity of gossypol enantiomers in laying and broiler breeder hens[J].Poultry Science,2007,86(3):582-590.
[11]周順伍.動物生物化學(xué)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,1999.
[12]BRAHAM JE,JARQUíN R,ELíASL G,et al.Effect of calcium and gossypol on the performance of swine and on certain enzymes and other blood constituents[J].The Journal of Nutrition,1967,91(1):47-54.
[13]尹遜慧.棉籽粕在櫻桃谷肉鴨飼糧中應(yīng)用技術(shù)研究[D].碩士學(xué)位論文.廣州:華南農(nóng)業(yè)大學(xué),2009.
[14]曾秋鳳,柏鵬.棉酚在肉禽體內(nèi)的毒性和殘留及其營養(yǎng)對策的研究進(jìn)展[J].動物營養(yǎng)學(xué)報,2013,25(5):917-922.
[15]ALI SF,El SEWEDY SM.Effect of gossypol on liver metabolic enzymes in male rats[J].Toxicology Letters,1984,23(3):299-306.
[16]倪鳴,袁慧.醋酸棉酚對小鼠黃體細(xì)胞凋亡的影響[C]//中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜內(nèi)科學(xué)分會2009年學(xué)術(shù)研討會論文集.北京:中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會,2009:506-512.
[17]趙萍.棉籽殼對雄性細(xì)毛羊血清、肝臟抗氧化指標(biāo)的影響[J].草食家畜,2011(4):44-47.
[18]劉錦湖.日糧中的游離棉酚對蛋雞生產(chǎn)性能及雞蛋儲存品質(zhì)的影響[D].碩士學(xué)位論文.北京:中國農(nóng)業(yè)大學(xué),2006.
[19]高布潛,姜洪,尹進(jìn).防止雞蛋變色和失重的保藏方法——蛋雞飼喂棉籽餅粕引起雞蛋變色是氧氣在起主導(dǎo)作用[J].中國糧油學(xué)報,1988(2):62-64.
[20]王冬梅,郭書賢,梁運(yùn)祥.棉子餅粕中棉酚的危害與脫毒方法研究進(jìn)展[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,48(2):487-493.
[21]ABOU-DONIA M B.Physiological effects and metabolism of gossypol[J].Residue reviews,1976,61:125-160.
[22]LORDELO M M,DAVIS A J,CALHOUN M C,et al.Relative toxicity of gossypol enantiomers in broilers[J].Poultry Science,2005,84(9):1376-1382.
[23]呂云峰,王修啟,趙青余,等.棉酚在飼料中安全限量及畜產(chǎn)品中殘留研究進(jìn)展[J].中國農(nóng)學(xué)通報,2010,26(24):1-5.
[24]龍安梅.醋酸棉酚對豬原代培養(yǎng)黃體細(xì)胞凋亡影響的研究[D].碩士學(xué)位論文.長沙:湖南農(nóng)業(yè)大學(xué),2006.
[25]OLIVER C L,MIRANDA M B,SHANGARY S,et al.(-)-Gossypol acts directly on the mitochondria to overcome Bcl-2-and Bcl-XL-mediated apoptosis resistance[J].Molecular Cancer Therapeutics,2005,4(1):23-31.
[26]XU L,YANG D J,WANG S M,et al.Gossypol enhances response to radiation therapy and results in tumor regression of human prostate cancer[J].Molecular Cancer Therapeutics,2005,4(2):197-205.
[27]陳文飛,付帥,岳萬遠(yuǎn),等.醋酸棉酚對人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞凋亡及DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1表達(dá)的影響[J].腫瘤,2013,33(5):404-408.