紅景天中含紅景天苷量的測定

鄭 玥，凌雪宇，劉文亮，裴福成

(哈藥集團中藥二廠，哈爾濱 150078)

紅景天為景天科植物大花紅景天(Rhodiola crenulata H.Ohba)的干燥根和根莖[1].紅景天的主要藥效成分為紅景天苷及其苷元酪醇、沒食子酸及其苷類、黃酮類、草質(zhì)素及其苷類等.在我國，紅景天主要分布在西藏、四川、云南、新疆、青海、陜西等省份高山地區(qū)[2].紅景天素有“高原人參”，“雪山仙草”等美稱，具有滋補強壯、抗缺氧、抗疲勞、抗輻射、延緩衰老、抗癌等作用[3].紅景天的有效成分為紅景天，本實驗采用梯度洗脫的方法，能準(zhǔn)確測定出紅景天中含紅景天苷的量[4-6]，分離度好.

1 儀器與試藥

Agilent1100系列高效液相色譜儀(UVW檢測器，四元泵，自動進樣)，KQ-1000B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，METTLER AE240電子天平.

紅景天(大花紅景天 產(chǎn)地：西藏)，紅景天苷對照品(批號：110818-201005，中國藥品生物制品檢驗所)；乙腈，磷酸均為色譜純，水為純化水.

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為BDS HYPERSIL-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相為A：乙腈；B：0.03%磷酸；流速1.0 mL/min.梯度程序見表1.檢測波長275 nm；柱溫30 ℃；進樣量為10 μL.

表1 梯度程序

2.2 對照品溶液的制備

取紅景天苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含0.5 mg的溶液，即得.

2.3 供試品溶液的制備

取紅景天藥材粉末0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加50%甲醇10 mL，密塞，精密稱定，超聲處理30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用50%甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得.

對照品和供試品溶液譜圖見圖1.(A為對照品溶液；B為供試品溶液).

圖1 紅景天苷對照品與紅景天供試品溶液色譜圖

2.4 線性關(guān)系的考察

精密吸取對照品溶液2.5、 5.0、7.5、10、12.5、15、17.5、20 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積.以進樣量為橫坐標(biāo)X，峰面積為縱坐標(biāo)Y，作標(biāo)準(zhǔn)曲線(見圖2)，計算回歸方程為Y=351.88X-8.1071，r=0.999 9，結(jié)果顯示進樣量在1.25 ～10 μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系.

圖2 線性關(guān)系曲線

2.5 精密度試驗

精密稱取紅景天藥材粉末，按照供試品溶液制備方法配制，并于上述色譜條件下，連續(xù)進樣6次，記錄色譜峰面積.結(jié)果表明，紅景天苷峰面積RSD值為0.49%，說明此方法精密度良好.

2.6 重復(fù)性試驗

精密稱取紅景天藥材粉末，按照供試品溶液制備方法配制6份供試品溶液，并于上述色譜條件下，分別進行測定，記錄色譜峰面積.結(jié)果表明，紅景天苷峰面積RSD值為1.17%，說明此方法重復(fù)性良好.

2.7 穩(wěn)定性試驗

精密稱取紅景天藥材粉末，按照上述供試品溶液配制方法配制供試品溶液，并于上述色譜條件下，分別于0，2，4，8，12，24 h進行測定，記錄色譜峰面積. 結(jié)果表明，紅景天苷峰面積RSD值為0.96%，說明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好.

2.8 加樣回收率試驗

精密量取已知含量的供試品溶液9份，每份1 mL，分別精密加入3種不同濃度的對照品溶液，按照上述供試品溶液配制方法配制供試品溶液，并于上述色譜條件下，分別進行測定，記錄色譜峰面積，計算平均回收率，結(jié)果見表2.

表2 加樣回收率結(jié)果

2.9 樣品測定

分別稱取紅景天藥材粉末三份，按照上述供試品溶液配制方法配制供試品溶液，并于上述色譜條件下，進行測定，計算紅景天苷含量，結(jié)果見表3.

表3 紅景天中紅景天苷百分含量結(jié)果

3 討 論

3.1 流動相的選擇

試驗考察了甲醇-水，乙腈-水，乙腈-0.03%磷酸溶液系統(tǒng)，前兩種分離效果不好，紅景天苷不能與其他成分完全分離開來，最后選擇乙腈-0.03%磷酸溶液系統(tǒng). 試驗發(fā)現(xiàn)，在乙腈-0.03%磷酸溶液梯度洗脫的情況下，紅景天苷能與其他組分達到基線分離，不受其他雜質(zhì)干擾.

3.2 色譜柱的選擇

試驗考察了YMC-C18、Thermo-C18、BDS-C18色譜柱，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在YMC-C18和Thermo-C18中，紅景天苷與其雜質(zhì)組分不能達到較好的分離效果，無法保證其定量準(zhǔn)確性；只有在BDS-C18上，紅景天苷既能得到對稱的峰形，又能與雜質(zhì)實現(xiàn)較好的分離.

3.3 供試品溶液配制的考察

試驗考察了紅景天苷的提取溶劑，即精密稱取紅景天苷對照品適量共3份，分別以純甲醇、50%甲醇水、水作為提取溶劑，進行溶解并稀釋定容于10 mL容量瓶中，分別超聲30 min后，按上述色譜條件進行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)紅景天苷在50%甲醇中的含量大于在其他兩種提取溶劑時，說明其在50%甲醇中提取的效果最好.

本文采用 HPLC 梯度洗脫的方法測定紅景天中含紅景天苷的量，該法重復(fù)性好，準(zhǔn)確度高，該方法準(zhǔn)確可靠、分離度好，可用于紅景天的質(zhì)量評價.

參考文獻：

[1] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典(一部)[M]. 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2010: 144.

[2] 賈國夫. 紅景天的研究概況及展望[J]. 四川草原, 1997(3): 38-40.

[3] 王家明, 閆繼平, 王盛虔. 紅景天的藥理作用研究進展[J]. 中醫(yī)藥學(xué)報, 2003,31(4):57-59.

[4] 楊曉艷, 蘆啟琴, 婁燈吉, 等. HPLC法同時測定紅景天中紅景天苷、酪醇和沒食子酸[J]. 分析試驗室, 2009, 5(28): 57-60.

[5] 袁 瑜,張 良, 李玉鋒. 紅景天活性成分及藥理作用[J]. 食品與藥品, 2007, 9(05A): 54-57.

[6] 王 昊，季宇彬，汲晨鋒.紅景天苷對運動疲勞大鼠神經(jīng)遞質(zhì)影響研究[J].哈爾濱商業(yè)大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2011，27(1)：1-4.