HPLC法測(cè)參附丹強(qiáng)心顆粒中丹參素鈉質(zhì)量濃度

凌雪宇，劉文亮，鄭 玥，高世勇

(1. 哈藥集團(tuán)世一堂制藥廠(chǎng)，哈爾濱 150078；2. 哈爾濱商業(yè)大學(xué)，哈爾濱 150078 )

參附丹強(qiáng)心顆粒由紅參、附子、丹參三味藥組成，具有活血化瘀，通脈舒絡(luò)等功效[1-4].為了控制產(chǎn)品質(zhì)量，本文用HPLC法對(duì)本品中所含丹參素鈉進(jìn)行了質(zhì)量濃度測(cè)定.

1 儀器與試藥

Agilent1100高效液相色譜儀，包括G1379A脫氣機(jī)，G1311A四元泵，G1316A柱溫箱，G1316A可變波長(zhǎng)檢測(cè)器， G2170AA色譜工作站，UV-2450型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(日本島津).

丹參素鈉對(duì)照品(中國(guó)生物制品檢定所，110855-200405)，甲醇為色譜純，水為蒸餾水，參附丹強(qiáng)心顆粒(自制).

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Alltima-C18(5 μm，4.6 mm×250 mm)；甲醇-0.5%磷酸(10∶90)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm；流速1.0 mL/min；理論板數(shù)按丹參素鈉峰計(jì)不低于3 000.

2.2 對(duì)照品溶液的制備

取丹參素鈉標(biāo)準(zhǔn)品適量，精密稱(chēng)定，加50%甲醇制成每1 mL含0.1 mg的丹參素鈉對(duì)照品溶液，過(guò)0.45 μm微孔濾膜即得[5-7].

2.3 供試品溶液的制備

取供試品1.0 g ，分別置100 mL具塞錐形瓶中，精密加入水50 mL，稱(chēng)定質(zhì)量，超聲30 min，放至室溫，再補(bǔ)足至質(zhì)量，過(guò)0.45 μm微孔濾膜即得.

2.4 陰性溶液的制備

取相當(dāng)于供試品量的藥材(除丹參藥材)，粉碎成細(xì)粉，按供試品溶液制備方法制備陰性液.

2.5 測(cè)定方法與結(jié)果

分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性液各10 μL，注入高效液相色譜儀，如法測(cè)定.(見(jiàn)圖1～3).

圖1 丹參素鈉對(duì)照品色譜圖

圖2 參附丹強(qiáng)心顆粒樣品色譜圖

圖3 缺少丹參的陰性樣品色譜圖

2.6 方法考察

2.6.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

精密稱(chēng)取丹參素鈉對(duì)照品11.80 mg置于25 mL容量瓶中，加入50%甲醇定容，分別精密吸取該溶液0.2、1.0、1.8、2.6、3.4、4.2 mL置10mL量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，配成質(zhì)量濃度為9.44、47.20、84.96、122.72、160.48、198.24 μg/mL的溶液，各精密吸取10 μL注入高效液相色譜儀，測(cè)得峰面積值.以進(jìn)樣質(zhì)量濃度和峰面積進(jìn)行線(xiàn)性回歸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，結(jié)果表明丹參素鈉在9.44～198.24 μg/mL范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程為y=5.404x-6.034 7，相關(guān)性r=0.999 8.見(jiàn)圖4.

圖4 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

2.6.2 加樣回收試驗(yàn)

精密稱(chēng)取丹參素鈉對(duì)照品23.6 mg置50 mL量瓶中，加50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得，質(zhì)量濃度為472 μg/mL.取供試品0.5 g，精密稱(chēng)定，置100 mL具塞錐形瓶中，精密加入質(zhì)量濃度為472 μg/mL的丹參素鈉對(duì)照品溶液6 mL，加水定容至刻度，稱(chēng)定質(zhì)量，超聲30 min，放至室溫后補(bǔ)足至質(zhì)量.過(guò)0.45 μm微孔濾膜即得加樣回收溶液.進(jìn)行測(cè)定.結(jié)果表明本方法回收率良好，RSD值為0.54%.計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表1.

2.6.3 精密度試驗(yàn)

精密稱(chēng)定供試品1.0 g，置100 mL具塞錐形瓶中，加水50 mL，稱(chēng)定質(zhì)量，超聲30 min，放置室溫，再補(bǔ)足至質(zhì)量，過(guò)0.45 μm微孔濾膜即得，取10 μL，注入液相色譜儀6次，記錄峰面積，計(jì)算RSD值.結(jié)果見(jiàn)表2.

2.6.4 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)的參附丹強(qiáng)心顆粒，精密稱(chēng)定供試品1.0 g，共6份，分別置100 mL具塞錐形瓶中，加水50 mL，稱(chēng)定質(zhì)量，超聲30 min，放至室溫，再補(bǔ)足至質(zhì)量，過(guò)0.45 μm微孔濾膜即得，色譜條件如上所述，結(jié)果6次測(cè)定的平均質(zhì)量比為5.25 mg/g，RSD值為1.59%，說(shuō)明重復(fù)性較好.試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3.

表1 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表2 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表3 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.6.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液10 μL注入液相色譜儀，每隔2 h測(cè)定1次，共測(cè)定5次，考察峰面積積分值在8 h內(nèi)變化，結(jié)果表明在8 h內(nèi)基本穩(wěn)定，RSD值為0.15%.試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4.

表4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.6.6 樣品測(cè)定

供試品溶液制備：取供試品1.0 g，精密稱(chēng)定，置100 mL具塞錐形瓶中，精密加入水50 mL，稱(chēng)定質(zhì)量，超聲30 min，放至室溫，再補(bǔ)足至質(zhì)量，過(guò)0.45 μm微孔濾膜即得.實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表5.根據(jù)質(zhì)量濃度測(cè)定結(jié)果確定樣品中丹參素鈉質(zhì)量比不低于4.0 mg/g.試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表5.

表5 三批樣品測(cè)定結(jié)果

3 結(jié) 語(yǔ)

丹參素鈉對(duì)照品溶液在190～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)，最大吸收波長(zhǎng)為280 nm，故本試驗(yàn)選擇280 mn作為檢測(cè)波長(zhǎng).本試驗(yàn)分別采用了流動(dòng)相比例為N，N-二甲基甲酰胺-甲醇-水-冰醋酸=4∶4∶150∶2，水相過(guò)多，對(duì)色譜柱傷害太大，故重新考察流動(dòng)相，增加甲醇的量.預(yù)實(shí)驗(yàn)考察發(fā)現(xiàn)對(duì)于本品甲醇-0.5%磷酸=10∶90可以使其中丹參素得到較好分離，所以選定此流動(dòng)相系統(tǒng).

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