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    HSG/Mfn2和PCNA在人腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)及意義

    2014-09-13 05:50:16劉曉燕方永軍張統(tǒng)帥胡珍淵王更新
    實(shí)用癌癥雜志 2014年3期
    關(guān)鍵詞:膠質(zhì)瘤腦組織惡性

    羅 衛(wèi) 劉曉燕 方永軍 張統(tǒng)帥 胡珍淵 張 毅 王更新

    膠質(zhì)瘤是常見的原發(fā)性腦腫瘤,5年生存率僅為35%~50%[1],手術(shù)全切率低,術(shù)后復(fù)發(fā)率高,是神經(jīng)外科的難題之一[2],近年來,有關(guān)神經(jīng)膠質(zhì)瘤的基因治療是研究的熱點(diǎn)。增殖抑制基因(hyperplasia suppressor gene,HSG)是1種新近發(fā)現(xiàn)的與細(xì)胞增殖相關(guān)的信息傳遞分子,它對(duì)血管平滑肌細(xì)胞的增殖有抑制作用[3]。Santel等在肺組織中克隆出的線粒體融合蛋白2(mitochondrial fusion,Mfn2)基因核苷酸序列與HSG完全相同[4],兩者實(shí)為同1種基因。研究表明,HSG/Mfn2對(duì)多種腫瘤傳代細(xì)胞系具有抗增殖和誘導(dǎo)凋亡的作用,而且該基因抗增殖作用明顯大于腫瘤抑制基因p53[3],提示HSG/Mfn2有可能是1種新的抑癌基因。目前該基因在乳腺癌、直腸癌、肝癌、肺癌等惡性腫瘤中均有相關(guān)研究,但在人腦膠質(zhì)瘤中尚未見相關(guān)報(bào)道,本研究旨在探討HSG/Mfn2與膠質(zhì)瘤病理級(jí)別的關(guān)系。

    1 材料與方法

    1.1 標(biāo)本來源

    收集陜西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院神經(jīng)外科、2007年1月至2012年12月手術(shù)切除的、55例腦膠質(zhì)瘤石蠟標(biāo)本。其中男性39例,女性16例,年齡22~75歲,平均(48±3.7)歲。以同期腦出血行減壓術(shù)的10例正常腦組織標(biāo)本作為對(duì)照。入選標(biāo)準(zhǔn):①均以4%的多聚甲醛中性溶液固定,常規(guī)石蠟包埋;②均經(jīng)HE染色或免疫組織化學(xué)染色明確診斷。按照2007年WHO中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn):Ⅰ級(jí)14例(均為毛細(xì)胞型星形細(xì)胞瘤);Ⅱ級(jí)13例(少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤4例、彌漫性星形細(xì)胞瘤9例);Ⅲ級(jí)14例(間變性少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤3例、間變性星形細(xì)胞瘤5例、間變性少突星形細(xì)胞瘤6例);Ⅵ級(jí)14例(髓母細(xì)胞瘤6例,膠質(zhì)母細(xì)胞瘤8例)?;颊咝g(shù)前均未行放療、化療或激素治療。

    1.2 試劑

    兔抗人Mfn2多克隆抗體、羊抗兔IgG、鼠抗人PCNA單克隆抗體、山羊抗鼠IgG、SABC試劑盒、DAB顯色試劑盒均來自武漢博士德公司。

    1.3 免疫組織化學(xué)染色

    采用鏈酶親和素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物(streptavidin-biotin-complex,SABC)法進(jìn)行免疫組化染色,分別檢測(cè)腫瘤組織中PCNA和HSG/Mfn2蛋白的表達(dá)。一抗選用兔抗人Mfn2多克隆抗體和鼠抗人PCNA單克隆抗體,0.1%mmol/L的PBS溶液代替一抗作為陰性對(duì)照,以已知陽性片作為陽性對(duì)照,DAB顯色,鏡下控制反應(yīng)時(shí)間,蘇木精復(fù)染。

    1.4 結(jié)果判定

    以胞核或胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色為陽性信號(hào)。每個(gè)標(biāo)本至少切片6張,HSG/Mfn2及PCNA各染色3張,染色后在高倍鏡下(×400)拍片,圖片導(dǎo)入Image-Pro Plus6.0圖像分析系統(tǒng),計(jì)算每張切片陽性區(qū)域的平均光密度(Mean density,D)值和積分光密度(integrated optical density,IOD)值,作為評(píng)價(jià)陽性信號(hào)強(qiáng)弱的指標(biāo)。

    1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    2 結(jié)果

    PCNA陽性染色位于細(xì)胞核,為棕黃色或棕褐色顆粒狀分布。正常腦組織中未見PCNA表達(dá),55例膠質(zhì)瘤組織中PCNA表達(dá)水平均較高,膠質(zhì)瘤惡性程度越高,其陽性細(xì)胞比例越高,染色越深。HSG/Mfn2出現(xiàn)陽性染色時(shí)可見細(xì)胞核周圍的胞質(zhì)中有棕黃色或棕褐色顆粒。正常腦組織和膠質(zhì)瘤組織中均可見HSG/Mfn2蛋白表達(dá),不同病理級(jí)別的膠質(zhì)瘤組織中HSG/Mfn2蛋白表達(dá)水平均明顯低于正常腦組織,增殖活躍區(qū)域其陽性染色較弱,增殖相對(duì)不活躍區(qū)域染色較強(qiáng),正常腦組織染色最強(qiáng)。定量分析結(jié)果顯示,HSG/Mfn2蛋白表達(dá)陽性區(qū)域D值和IOD值隨腫瘤惡性程度的增高逐漸減小,各組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05) (表1)。

    表1 兩組中PCNA和HSG的表達(dá)情況

    ▽為與腫瘤組不同病理級(jí)別間比較,P<0.05;▲為與腫瘤組Ⅰ級(jí)與Ⅱ級(jí)比較,P<0.01。

    3 討論

    PCNA位于細(xì)胞核內(nèi),是周期蛋白的1種,在細(xì)胞增殖的啟動(dòng)上起重要作用[5],檢測(cè)PCNA可客觀反映細(xì)胞增殖特性,對(duì)判斷腫瘤的分化和預(yù)后有重要的價(jià)值[6-7]。膠質(zhì)瘤作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的神經(jīng)上皮性腫瘤,具有極強(qiáng)的侵襲性和增殖活性,PCNA是作為腫瘤增殖相關(guān)研究中可靠的增殖性標(biāo)志物之一,被認(rèn)為與膠質(zhì)瘤惡性進(jìn)展密切相關(guān)[8],也是預(yù)測(cè)腦膠質(zhì)瘤是否復(fù)發(fā)的重要參考因素[9]。本研究表明,PCNA在膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)水平明顯增高,且隨腫瘤病理級(jí)別的增高而增高,這說明PCNA與腫瘤惡性程度有一定相關(guān)。

    Chen等[3]研究認(rèn)為,過表達(dá)HSG/Mfn2可以抑制血管平滑肌細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞系的增殖。夏耘等[10]研究顯示,HSG/Mfn2能抑制血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子,從而抑制內(nèi)皮細(xì)胞的增殖與遷移,最終引起血管生成抑制而抑制腫瘤生長(zhǎng)。郝文炯等[11]在SD大鼠尾狀核注射C6細(xì)胞建立腦膠質(zhì)瘤模型,檢測(cè)膠質(zhì)瘤中HSG的表達(dá),結(jié)果發(fā)現(xiàn)膠質(zhì)瘤中HSG的表達(dá)明顯低于對(duì)照組,且隨腫瘤生長(zhǎng)時(shí)間的增加而降低。另有研究表明,HSG/Mfn2是1種新型的p53基因的誘導(dǎo)基因,具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用[12]。目前,HSG/Mfn2和人腦膠質(zhì)瘤關(guān)系的研究尚未見相關(guān)報(bào)道,本研究結(jié)果表明,膠質(zhì)瘤組織中HSG/Mfn2蛋白的表達(dá)水平低于正常腦組織,且隨著腫瘤病理級(jí)別的增高逐漸下降,正好與PCNA相反。該研究也間接提示,過表達(dá)HSG/Mfn2可能會(huì)抑制膠質(zhì)瘤的發(fā)展,為惡性腫瘤的臨床診治提供一個(gè)新的參考指標(biāo)。

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