HPLC法測定胃健寧膠囊中和厚樸酚及厚樸酚的含量

葉錦雄，劉柳毅

(1.廣州市東升醫(yī)院，廣東 廣州 510140;2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，廣東 廣州 510006)

胃健寧膠囊由厚樸、木香、砂仁、佛手、香附(醋制)、大腹皮等藥組成。厚樸是處方中的君藥，故對厚樸中的和厚樸酚與厚樸酚進(jìn)行含量測定，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下:

1 儀器與試藥

1.1 儀器 日本島津:SPD－10A檢測器、LC－10AT泵、N2000色譜工作站，AUW120D電子天平。

1.2 試劑 乙腈(分析純，批號:20121204，江蘇強(qiáng)盛化工有限公司);甲醇(分析純，批號:20120102，天津市百世化工有限公司)。厚樸酚對照品(批號:110729－201210，中國藥品生物制品檢定所);和厚樸酚對照品(批號:110756－201210，中國藥品生物制品檢定所)。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備 精密稱取和厚樸酚對照品10 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為A液;另精密稱取厚樸酚對照品10 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為B液。分別精密吸取A液和B液各1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2 供試品溶液的制備 取胃健寧膠囊20粒，除去囊殼，研細(xì)，取粉末約4 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入氯仿50 mL，密塞，稱定重量，超聲處理1.5 h，稱定重量，用氯仿補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25 mL，蒸干，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移到5 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 缺厚樸陰性溶液制備 取不含厚樸的全部處方藥材，按胃健寧膠囊工藝及上述供試品溶液的方法制備陰性對照液。

3 測定法

3.1 色譜條件 色譜柱:Kromasil C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動(dòng)相:乙腈 －水 －冰醋酸(60∶40∶1)(V∶V∶V)，流速:1.000 mL·min－1，檢測波長:294 nm，進(jìn)樣量:10 μL。

3.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 分別取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10 μL，注入色譜儀，測定，記錄色譜圖，結(jié)果見圖1～3。由圖可見，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，有相同保留時(shí)間的色譜峰，陰性試驗(yàn)無干擾。保留時(shí)間:厚樸酚峰約17 min，和厚樸酚峰約7 min，分離度大于1.5，陰性對照溶液無干擾。

圖1 對照品色譜圖

圖2 供試品色譜圖

圖3 陰性對照品色譜圖

3.3 線性實(shí)驗(yàn) 精密吸取厚樸酚及和厚樸酚對照品液各 1、2、4、8、16 μL，注入色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積積分值(Y)對對照品量(X)進(jìn)行處理，和厚樸酚回歸方程Y=6.45×105X－4.56×103，r=0.9996(n=5);厚樸酚回歸方程Y=1.40×106X－1.67×103，r=0.9998(n=5)。結(jié)果表明，和厚樸酚在0.02～0.32 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好;厚樸酚在0.0196～0.3136 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.4 精密度試驗(yàn) 精密進(jìn)樣同一對照品溶液20 μL，連續(xù)測定5次，厚樸酚的平均峰面積為62997.93，RSD為1.61%，和厚樸酚的平均峰面積為61100.9024，RSD為1.10%，結(jié)果表明該方法的精密度良好。

3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取樣品適量，照含量測定項(xiàng)下方法測定，于配制后0、2、4、8、12 h，分別取樣測定其含量。和厚樸酚的RSD為0.88% ，厚樸酚的RSD為1.96%，結(jié)果表明被測溶液的穩(wěn)定性良好。

3.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取樣品6份，按含量測定項(xiàng)下方法分別測定，6份樣品實(shí)驗(yàn)和厚樸酚的峰面積平均的RSD為2.6%，厚樸酚的峰面積平均值的RSD為2.1%。結(jié)果表明重復(fù)性良好。

3.7 加樣回收率試驗(yàn) 取重復(fù)性試驗(yàn)的同一批號(120406)樣品20粒，除去外殼，研細(xì)，取粉末約2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入一定量的和厚樸酚對照品及厚樸酚對照品，按供試品溶液的制備方法共制備3份，每份測定3次，計(jì)算回收率。和厚樸酚的平均回收率為96.58%，RSD為1.78%，厚樸酚的平均回收率為97.29%，RSD為1.39%，結(jié)果表明，含量回收率良好，見表1。

表1 胃健寧膠囊中和厚樸酚及厚樸酚的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

續(xù)表1:

3.8 樣品含量測定 取3批樣品(批號:120406、120408、120410)，照“2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀測定，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果(n=3)

由3批樣品含量測定的結(jié)果可知，和厚樸酚及厚樸酚的重量平均值為每粒3.49 μg，考慮到生產(chǎn)中藥材質(zhì)量、制劑生產(chǎn)、貯藏等因素影響，暫定其制劑中和厚樸酚及厚樸酚含量不得低于每粒3 μg。

4 討論

參照《中國藥典》2010年版(一部)厚樸的含量測定方法［1］選擇流動(dòng)相甲醇 － 水(78∶22)進(jìn)樣，結(jié)果陰性對照有干擾。參考相關(guān)文獻(xiàn)［2～6］采用流動(dòng)相為乙腈－水－冰醋酸(60∶40∶1)進(jìn)樣，試驗(yàn)結(jié)果表明，在此條件下和厚樸酚、厚樸酚的保留時(shí)間適宜，與相鄰的色譜峰可保持良好的分離度，適合對和厚樸酚、厚樸酚的含量測定。

制備供試品溶液采用甲醇提取樣品時(shí)干擾較多，最后確定用三氯甲烷提取蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，分離效果較好。該方法結(jié)果準(zhǔn)確可靠，重現(xiàn)性好，可用于胃健寧膠囊中和厚樸酚及厚樸酚的含量測定。本研究的不足之處就是待測成分含量較低，所得結(jié)果相對誤差偏大。由于處方組成藥材較多，各種成分含量均較低，且干擾成分多，但該方法對本復(fù)方中藥制劑的質(zhì)量控制仍具有重要意義。

［1］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典2010年版(一部)［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:235.

［2］孟蕾蕾，李夢，王國平.HPLC法測定藿香正氣膠囊中厚樸酚與和厚樸酚的含量［J］.齊魯藥事，2007，26(8):466－467.

［3］魏剛.高效液相色譜法測定藿香正氣丸中厚樸酚與和厚樸酚的含量［J］.湖北中醫(yī)雜志，2011，33(2):70－71.

［4］魏蓉，項(xiàng)菲.高效液相色譜法測定舒肝快胃丸中厚樸酚與和厚樸酚的含量［J］.中南藥學(xué)，2011，9(11):847.850.

［5］高輝，王雪萍.厚樸溫中丸中厚樸酚與和厚樸酚含量測定的研究［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2008，26(2):425－426.

［6］趙彩霞，閆輝.麻仁丸中厚樸酚與和厚樸酚測定方法的研究［J］.湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，32(6):15－17.