靜注人免疫球蛋白(pH4)的穩(wěn)定性研究

黃軍民 梁小明 何淑琴 張麗鈴 黃璠

靜注人免疫球蛋白(pH4)的穩(wěn)定性研究

黃軍民 梁小明 何淑琴 張麗鈴 黃璠

目的 考察靜注人免疫球蛋白(pH4)的穩(wěn)定性。方法 對(duì)三批靜注人免疫球蛋白(pH4)進(jìn)行2～8℃條件下為期3年的長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn), 對(duì)考察的制品依照《中華人民共和國(guó)藥典》2005年版二部中附錄XIX C藥物穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則及《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版二部中附錄XIX C原料藥及藥物制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果 在長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)過(guò)程中, 可見(jiàn)異物, 純度、pH值、IgG含量、蛋白質(zhì)含量、分子大小分布等均無(wú)明顯的變化趨勢(shì)。結(jié)論 靜注人免疫球蛋白(pH4)穩(wěn)定性良好, 在進(jìn)行3年長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)后, 其質(zhì)量仍符合《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版三部的要求。

靜注人免疫球蛋白(pH4)；質(zhì)量；穩(wěn)定性

以健康人血漿為原料, 采用先進(jìn)的生物工程技術(shù)或分離技術(shù)制備的靜注人免疫球蛋白, 是治療原發(fā)性免疫缺乏癥、繼發(fā)性免疫缺陷病和自身免疫性疾病(如川崎病、特發(fā)性血小板減少性紫癜)的有效藥物, 有著其它藥品不可替代的作用［1］。近年來(lái), 隨著靜注人免疫球蛋白的需求量不斷增加,其穩(wěn)定性也倍受各制藥企業(yè)及廣大用戶的關(guān)注。本公司生產(chǎn)規(guī)格為5% 1.25g/25 ml靜注人免疫球蛋白(pH4)的液體劑型已有多年, 原批準(zhǔn)的有效期為2年。為確定靜注人免疫球蛋白(pH4)的穩(wěn)定性, 保證制品在最有效情況下使用, 實(shí)驗(yàn)中采用長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)對(duì)其進(jìn)行了全面質(zhì)量檢測(cè), 以觀察制品的各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)的變化情況, 為延長(zhǎng)其有效期提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 3批靜注人免疫球蛋白(pH4)制品, 為江西博雅生物制藥股份有限公司于2009年生產(chǎn)。白喉抗體診斷試劑由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供, 抗-HBs標(biāo)準(zhǔn)品由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供, 抗-HBs檢測(cè)試劑盒購(gòu)買于北京北方生物技術(shù)研究所, 其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 主要儀器 智能放免γ測(cè)量?jī)x(SN-695A)購(gòu)自上海核所日環(huán)光電儀器有限公司；高效液相色譜儀購(gòu)自日本島津公司；凱氏定氮儀購(gòu)自 Foss公司；全自動(dòng)電泳儀(Genios)購(gòu)于INTERLAB公司；澄明度檢測(cè)儀購(gòu)于天津大學(xué)精密儀器廠。

1.3 方法

1.3.1 穩(wěn)定性試驗(yàn) 抽取的3批靜注人免疫球蛋白(pH4)制品, 在保存前按照2005版《中國(guó)藥典》三部標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行全面質(zhì)量檢測(cè)。再取足夠量樣品置于2～8℃條件下進(jìn)行為期3年(2009年～2011年)的長(zhǎng)期試驗(yàn)。按長(zhǎng)期試驗(yàn) 0、3、6、9、12、18、24、36個(gè)月試驗(yàn)點(diǎn)對(duì)樣品進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)。其中第0、12、24和36個(gè)月為所有項(xiàng)目全部進(jìn)行質(zhì)量檢查, 其他試驗(yàn)點(diǎn)為重點(diǎn)項(xiàng)目檢測(cè)。第0個(gè)月的首次全檢項(xiàng)目完全參照《中華人民共和國(guó)藥典》2005年版三部《靜注人免疫球蛋白(pH4)》中成品檢定的所有檢測(cè)項(xiàng)目, 第12、24和36個(gè)月全檢項(xiàng)目完全參照《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版三部《靜注人免疫球蛋白(pH4)》中成品檢定的所有檢測(cè)項(xiàng)目。重點(diǎn)檢測(cè)項(xiàng)目包括外觀、可見(jiàn)異物、pH值、IgG含量(因2010版藥典中無(wú)IgG含量檢測(cè)項(xiàng)目, 故第12個(gè)月將此項(xiàng)檢測(cè)項(xiàng)目改為蛋白質(zhì)含量)和無(wú)菌檢查等5項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)。

1.3.2 IgG含量檢測(cè) 采用紫外-可見(jiàn)分光光度法(見(jiàn)2005版《中國(guó)藥典》三部附錄Ⅺ K)。

1.3.3 蛋白質(zhì)含量檢測(cè) 采用凱氏定氮法(見(jiàn)2010版《中國(guó)藥典》三部附錄ⅥB第一法)。結(jié)果計(jì)算：蛋白質(zhì)含量(g/L) =(總氮-非蛋白氮)×6.25×10-1。

1.3.4 pH值檢測(cè) 將待檢品蛋白質(zhì)用生理氯化鈉溶液稀釋至質(zhì)量濃度為10 g/L, 第0個(gè)月至第9個(gè)月檢測(cè)按2005版《中國(guó)藥典》三部附錄VA方法測(cè)定其pH值；第12個(gè)月至第36個(gè)月檢測(cè)按2010版《中國(guó)藥典》三部附錄VA方法測(cè)定其pH值。

1.3.5 其他項(xiàng)目的檢測(cè) 外觀、可見(jiàn)異物、無(wú)菌檢查、分子大小分布、PKA、抗-HBs、白喉抗體、抗補(bǔ)體活性、異常毒性檢查、熱穩(wěn)定性試驗(yàn)、熱原檢查等質(zhì)量指標(biāo)均采用《中國(guó)藥典》三部收錄的標(biāo)準(zhǔn)分析方法。

2 結(jié)果與分析

2.1 重點(diǎn)檢測(cè)項(xiàng)目的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果 3批靜注人免疫球蛋白(pH4)制品在2～8℃條件下保存3年, 重點(diǎn)考察項(xiàng)目中的外觀檢查、無(wú)菌檢查、可見(jiàn)異物在長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)期間無(wú)任何變化, 且均符合《中國(guó)藥典》的規(guī)定要求。用t檢驗(yàn)對(duì)保存前及保存第36個(gè)月檢測(cè)的pH值、蛋白質(zhì)含量、IgG含量進(jìn)行分析, 三批產(chǎn)品的pH值從0個(gè)月～36個(gè)月保持在4.0～4.2；蛋白質(zhì)含量保持在55g/L～59g/L；從0個(gè)月～9個(gè)月3批產(chǎn)品的IgG含量維持在4.9%～5.3%, 3項(xiàng)指標(biāo)的數(shù)據(jù)變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。因2010版藥典中無(wú)IgG含量檢測(cè)項(xiàng)目, 故第12個(gè)月將IgG含量檢測(cè)項(xiàng)目改為蛋白質(zhì)含量檢測(cè),蛋白質(zhì)含量一般情況下會(huì)高于IgG含量0.5%左右。

2.2 首檢與末檢的結(jié)果對(duì)比 將0個(gè)月時(shí)全項(xiàng)檢定(首檢)結(jié)果與2～8℃條件下保存36個(gè)月后的檢測(cè)(末檢)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比, 外觀、可見(jiàn)異物、裝量、熱穩(wěn)定性、無(wú)菌檢查、異常毒性檢查、熱原檢查等檢測(cè)項(xiàng)目無(wú)任何變化, 且均符合《中國(guó)藥典》的規(guī)定要求。從表1可知：pH值、PKA含量、抗補(bǔ)體活性這3項(xiàng)指標(biāo)的數(shù)據(jù)變化差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義, 3批制品的純度、分子大小分布、每瓶抗-HBs的總效價(jià)均有下降的趨勢(shì), 而糖含量有微小的上升, 每瓶白喉抗體總效價(jià)卻有明顯的增加, 但仍符合《中國(guó)藥典》的要求標(biāo)準(zhǔn)。

表1 首次檢測(cè)與末次檢測(cè)的結(jié)果對(duì)比

3 討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示, 靜注人免疫球蛋白(pH4) 具有良好的穩(wěn)定性, 在進(jìn)行3年長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)后, 其各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)仍符合《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版三部的要求。3批制品的分子大小分布在2～8℃條件下保存3年后均有緩慢的下降趨勢(shì), 分析圖譜發(fā)現(xiàn), 該下降趨勢(shì)主要是因?yàn)椴糠謫误w裂解成小分子雜蛋白所致。第36個(gè)月, 制品中的IgG單體及二聚體含量之和為98.2%, 優(yōu)于藥典標(biāo)準(zhǔn)的IgG單體及二聚體含量之和 96%［2］, 因此, 產(chǎn)品在運(yùn)輸及貯存過(guò)程符合 2～8℃冷鏈保藏的要求時(shí), 36個(gè)月內(nèi)制品是安全、有效。

［1］ 周海云.靜注人免疫球蛋白的研究與應(yīng)用.微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展.2009,37(4):70-73.

［2］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典.三部.2010版.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:233.

Study on the stability of the human immunoglobulin(pH4) for intravenous injection

HUANG Jun-min, LIANG Xiao-ming, HE Shu-qin, et al. Jiangxi Boya Biopharmaceutical Limited by Share Ltd, Fuzhou, 344000, China

Objective Investigate the stability of human immunoglobulin (pH4) for intravenous injection.Methods The three batch of human immunoglobulin(pH4) for intravenous injection were carried on the long term stability test of 3 years in 2～8℃.Tested the inspection product in accordance with the “drug stability test guiding principle” of the Chinese Pharmacopeia(VolumeⅡ, 2005 edition)in appendix XIX C and “stability principle of raw material medicine and drug " of the Chinese Pharmacopeia(VolumeⅡ, 2010 edition)in appendix XIX C.Results In the long term stability of the test process, visible foreign matter, purity, pH value, IgG content, protein content, molecular size distribution have no obvious variation trend.Conclusion Human immunoglobulin (pH4) for intravenous injection has good stability, after 3 years of long term stability test, the quality is still in accordance with the requirements of Chinese Pharmacopeia(VolumeⅢ, 2010 edition).

Human immunoglobulin (pH4) for intravenous injection; Quality; Stability

344000 撫州, 江西博雅生物制藥股份有限公司