森林腦炎滅活疫苗穩(wěn)定性檢定

費剛 郭新

森林腦炎是我國東北林區(qū)的一種自然疫源性疾病, 傳播媒介為一種寄生于林中野生脊椎動物, 特別是嚙齒類動物的嗜血昆蟲——森林硬蜱, 在春夏季蜱活動高峰期受到蜱叮咬而感染森林腦炎病毒導(dǎo)致患病, 稱森林腦炎病。我國森林腦炎屬于遠東型, 患病以中樞神經(jīng)系統(tǒng)為主要特征, 有頭痛、惡心、羞明、驚厥、輕癱為主, 死亡率約為30%, 康復(fù)者中約30%～60%有后遺癥。森林腦炎滅活疫苗系用森林腦炎(簡稱森腦)病毒“森張”株接種于地鼠腎單層細胞培養(yǎng)后收獲病毒液, 加入甲醛溶液將病毒滅活后制成, 用于預(yù)防森林腦炎。目前, 國家規(guī)定森林腦炎滅活疫苗有效期限為21個月,儲存條件為2～8℃避光保存和運輸。作者檢測了森林腦炎滅活疫苗在規(guī)定儲存條件下超過有效期12個月效價穩(wěn)定性和其它檢定項目。結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 森林腦炎滅活疫苗 生產(chǎn)日期2007年09月11日,有效期2009月08月27日(超過有效期12個月)。

1.1.2 稀釋液 為pH(7.8±0.2)的種子液。

1.1.3 攻擊檢品毒 毒力為lgLD50/1.0 ml≥9.0的森林腦炎毒種P10代。

1.1.4 試驗動物 體重為10～12 g清潔級小白鼠。

1.2 方法效價測定［1］：將供試品腹腔免疫體重10～12 g小鼠30只, 免疫2次, 間隔7 d, 每只小鼠每次腹腔注射0.3 ml, 另取同批小鼠30只作為空白對照。初次免疫后第14 d以適宜稀釋度的“森張”株病毒懸液分別進行小鼠腹腔攻擊, 每個病毒稀釋度分別攻擊6只, 每只0.3 ml。攻擊后3 d內(nèi)死亡者不計(動物死亡數(shù)量應(yīng)不超過試驗動物總數(shù)的20%), 觀察21 d判定結(jié)果。對照組病毒滴度應(yīng)不低于7.51 g LD50/0.3 ml, 免疫保護指數(shù)應(yīng)>5.0×105。

2 結(jié)果

2.1 超過規(guī)定有效期12個月疫苗效價的穩(wěn)定性 森林疫苗免疫小白鼠后就可使小白鼠產(chǎn)生免疫力, 從而抑制森林腦炎病毒對小白鼠的感染, 通過計算免疫疫苗組(試驗組)和未免疫組(對照組)在森林腦炎病毒液攻擊下的半數(shù)致死劑量,依Reed-Muech氏法計算效力保護指數(shù), 以判定疫苗是否合格和有效性, 亦可判定該疫苗是否為森林腦炎滅活疫苗［2］。超過規(guī)定有效期12個月疫苗效價的穩(wěn)定性仍保持在國家藥品標(biāo)準(zhǔn)的合格水平之上, 表明森腦的穩(wěn)定性良好。

2.2 試驗組具體數(shù)據(jù)見表1。

表1 超過規(guī)定有效期12個月試驗組疫苗效價的穩(wěn)定性

表1可見, 由此病毒能致半數(shù)動物死亡的稀釋度介于10-2～10-3之間, 計算方法如下

{高于50%的死亡百分數(shù)-(50%)}/{高于50%的死亡百分數(shù)-低于50%的死亡百分數(shù)}=距離比例 {75%-50%}/{75%-25%}=0.50；低稀釋度的反對數(shù)(高于50%死亡率)=-2；距離比例(0.5)×稀釋因數(shù)(對數(shù)10)=-0.5；LD50滴度(試)=-2.5 LD50(試)=2.5

2.3 對照組具體數(shù)據(jù)見表2。

表2 超過規(guī)定有效期12個月對照組疫苗效價的穩(wěn)定性

表2可見, 由此病毒能致半數(shù)動物死亡的稀釋度介于10-8～10-9之間, 計算方法如下

{高于50%的死亡百分數(shù)-(50%)}/{高于50%的死亡百分數(shù)-低于50%的死亡百分數(shù)}=距離比例 {100%-50%}/{100%-17%}=0.60；低稀釋度的反對數(shù)(高于50%死亡率)=-8；距離比例(0.6)×稀釋因數(shù)(對數(shù)10)=-0.60；LD50滴度(對)=-8.60 LD50(對)=8.60；對照組lgLD50/0.3 ml=8.60>7.5, 試驗成立。

2.4 保護指數(shù)計算方法 對照組lgLD50/0.3ml=8.60, 試驗組lgLD50/0.3ml=2.5 對照組lgLD50/0.3ml-試驗組lgLD50/0.3ml=6.10 免疫保護指數(shù)106.10=12.6×105>5×105, 試驗成立。

3 其他檢定項目

按照中國藥典(2010版)的檢定程序分別對藥品鑒別試驗、外觀、裝量、pH值、游離甲醛含量、硫柳汞含量、氫氧化鋁含量、熱穩(wěn)定性試驗、異常毒性檢查、細菌內(nèi)毒素檢查等項目進行檢定, 結(jié)果均合格。

4 討論

森腦疫苗已被臨床使用多年, 但關(guān)于其保存期限與穩(wěn)定性之間的關(guān)系鮮有報道。本試驗的目的在于檢驗森腦疫苗在規(guī)定儲存期限之外的穩(wěn)定性, 為生產(chǎn)運輸和使用該制劑提供試驗依據(jù)。森腦疫苗是一種預(yù)防性制品, 因生產(chǎn)周期長, 國家規(guī)定的有效期較短(21個月), 是必造成市場供需方面的矛盾。造成供求不暢和制品報廢增加, 造成一定經(jīng)濟損失。若將制品有效期限延長12個月, 定為33個月, 可有利于解決上述問題。作者連續(xù)三批試驗, 其結(jié)果相同。為支持森腦疫苗制品有效期限延長提供一定的參考價值。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(三部).北京:中國醫(yī)藥科技出版社, 2010: 95.

［2］森林腦炎滅活疫苗企業(yè)注冊標(biāo)準(zhǔn)(WS4-(S-003)-2008Z).