新疆維吾爾族肺腺癌患者表皮生長因子受體基因的多態(tài)性研究

王秀麗,顧國民,袁 靜,劉春玲

(新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院 肺內(nèi)科二病區(qū),新疆 烏魯木齊,830000)

在世界范圍內(nèi)，肺癌已成為癌癥死亡的主要原因。以吉非替尼、厄洛替尼為代表的表皮生長因子受體(EGFR)酪氨酸激酶抑制劑在晚期肺癌的治療中突破了化療的平臺效應(yīng)，取得了較好的療效。研究[1]表明，酪氨酸激酶抑制劑(TKI)的療效與EGFR基因突變狀態(tài)顯著相關(guān)，而不同地域、種族的EGFR突變率差異較大。近年來，新疆維吾爾族肺癌患者發(fā)病率逐年增高，但維吾爾族患者的EGFR突變情況尚不清楚。本研究旨在了解新疆地區(qū)肺癌患者EGFR突變的特點(diǎn)，以便為維吾爾族肺腺癌患者的個體化治療提供基因?qū)W方面的證據(jù)，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2011年1月—2013年4月在新疆腫瘤醫(yī)院確診的維吾爾族及漢族肺腺癌患者181例，其中維吾爾族肺腺癌患者76例，男49例，女27例，年齡46～78歲，中位年齡57歲；漢族肺腺癌患者105例，男56例，女49例，年齡25～85歲，中位年齡53歲。手術(shù)或活檢后，將病理標(biāo)本進(jìn)行石蠟包埋，并盡快行EGFR基因檢測。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集與DNA提取：所有患者標(biāo)本的石蠟切片均經(jīng)病理診斷確定含有腫瘤組織，厚度5～8 m,不少于8片，室溫保存。采用QIAGEN公司核酸提取試劑盒(QIAamp DNA FFPE Tissue Kit,商品號: 564074)提取石蠟標(biāo)本切片內(nèi)的EGFR基因DNA,所提DNA溶于Tris-HCL(10 mmol/L,pH8.0),經(jīng)紫外分光光度計檢測提取質(zhì)量，并確定濃度。用Tris-HCl溶液(10 mmol/L,pH8.0)調(diào)整DNA濃度到10 ng/L和2 ng/L備用。

1.2.2 實時熒光聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增：采用ARMS方法檢測EGFR基因18-21號外顯子突變。試劑盒購自廈門艾德生物醫(yī)藥科技公司，按試劑盒說明書中的流程進(jìn)行操作。

采用Strata Gene MX3000P實時PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增，每次檢測均設(shè)立陽性及陰性對照。如果Ct值為0，或Ct值>30，則實驗結(jié)果判定為野生型。

1.2.3 熒光PCR反應(yīng)條件: 95 ℃預(yù)變性5 min,1個循環(huán); 95 ℃變性25 s,64 ℃退火20 s,72 ℃延伸20 s,15個循環(huán); 93 ℃變性25 s,60 ℃退火35 s,72 ℃延伸20 s,31個循環(huán)。

2 結(jié) 果

2.1 EGFR突變情況

本研究共檢測肺腺癌標(biāo)本181例，其中59例發(fā)生EGFR突變，突變率為32.6%。維吾爾族患者EGFR突變率為15.8%,漢族患者突變率為44.8%,2者突變率比較差異顯著(P<0.01)。

所有患者均以19、21號外顯子突變?yōu)橹?。漢族患者除以上2種突變外，尚有19、21號外顯子共突變1例，20號外顯子T790突變1例。19號外顯子均為缺失突變；21號外顯子均為L858R(第858號密碼子堿基替換)突變。維吾爾族患者19號外顯子所占比率(66.7%)高于21號外顯子(33.3%),而漢族患者19號外顯子所占比率(44.7%)略低于21號外顯子(51.1%)。

2.2 臨床特征與EGFR突變的關(guān)系

漢族患者EGFR基因突變與性別、吸煙史、腫瘤分化程度有關(guān)，女性、不吸煙、腫瘤分化程度較高的患者EGFR基因突變率較高。維吾爾族患者EGFR基因突變與吸煙史有關(guān)，而與其他因素關(guān)系不確定。見表1。

表1 維、漢兩族臨床特征與EGFR突變的關(guān)系

3 討 論

在腫瘤細(xì)胞中,EGFR基因突變、基因擴(kuò)增及其蛋白的過度表達(dá)等多種致癌機(jī)制均可使EGFR酪氨酸激酶活性失調(diào)，而EGFR酪氨酸激酶的不恰當(dāng)激活可促使腫瘤血管生成，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、黏附、侵襲和轉(zhuǎn)移。理論上而言，通過特異性阻斷該受體，能夠達(dá)到抑制腫瘤生長及血管生成的作用，這也在臨床上得到證實[1-2]。然而，在本院進(jìn)行的小樣本調(diào)查中發(fā)現(xiàn),15例EGFR基因突變不明的維吾爾族非小細(xì)胞肺癌患者在化療失敗服用分子靶向藥物后，僅2例病情穩(wěn)定，其余13例均為疾病進(jìn)展，這與靶向藥物在中國肺癌臨床研究[2-5]中取得良好的療效形成鮮明對比，可能與種族差異導(dǎo)致維吾爾族肺癌患者基因突變的發(fā)生率及突變類型、特征不同于一般亞裔人群有關(guān)[6-7]。

本研究結(jié)果顯示，維吾爾族患者EGFR突變率為15.8%,明顯低于漢族患者的44.8%及中亞裔人群的突變率(35.2%～75.3%)[8-10],而略高于中西方人群的突變率(3%～13%)[11-13],進(jìn)一步證實種族決定著腫瘤遺傳學(xué)背景的差異，進(jìn)而影響腫瘤患者的預(yù)后及對治療的反應(yīng)；維吾爾族肺癌患者靶向治療效果欠佳與突變率較低有關(guān)。EGFR基因中,19號外顯子缺失突變的腫瘤較21號外顯子突變的腫瘤對厄洛替尼的反應(yīng)更為敏感[14]。本研究發(fā)現(xiàn)，維吾爾族患者19號外顯子突變多于21號外顯子突變(66.7%∶33.3%),這與西方人群相似[14],而漢族患者2種突變所占比率差別不大。維吾爾族患者中未發(fā)現(xiàn)20號外顯子的插入突變，提示對存在EGFR基因突變的維吾爾族患者，靶向治療的整體療效可能優(yōu)于漢族人群。

研究[12-15]報道,EGFR突變水平與年齡、性別、吸煙史、腫瘤分化程度密切關(guān)系，年齡較大、女性、不吸煙、腫瘤分化程度較高(尤其是支氣管肺泡癌成分較多)的患者EGFR突變更為常見，這與本研究結(jié)果一致，即漢族人群EGFR突變與性別、吸煙史、腫瘤分化程度有關(guān)，維吾爾族人群EGFR突變與吸煙史相關(guān)，而與性別、分化程度關(guān)系不明確，這可能與維吾爾族入組患者男性居多，且與樣本量有限相關(guān)。

[1]Fukuoka M,Wu Y L,Thongprasert S,et al.Biomarker analyses and final overall survival results from a phase Ⅲ,randomized,open-label,first-line study of gefitinib versus carboplatin/paclitaxel in clinically selected patients with advanced non-small-cell lung cancer in Asia (IPASS)[J].J Clin Oncol,2011,29(21): 2866.

[2]蔡微菁,粟波.非小細(xì)胞肺癌的全新靶點(diǎn)ROS1融合基因[J].中華腫瘤雜志,2013,35(1): 1.

[3]張恒,徐亮.閔生萍.液基薄層細(xì)胞學(xué)檢測技術(shù)在肺癌診斷中的應(yīng)用[J].中華全科醫(yī)學(xué),2011,9(8): 1296.

[4]肖何,王閣,楊鎮(zhèn)洲.非小細(xì)胞肺癌ERCC1 C118T多態(tài)性與EGFR突變的相關(guān)性[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報,2014,36(2): 184.

[5]張翼,麥力,昊曉彬,等.MCPHl在肺組織的表達(dá)及其對人肺癌細(xì)胞株H1299凋亡的影響[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報,2014,36(6): 574.

[6]張穎,劉雙梅,宮巧俐,等.肺癌與肺部感染患者自身抗體譜的特點(diǎn)比較[J].中華全科醫(yī)學(xué),2011,9(9): 1384.

[7]胡若蘭 周向東.肺癌耐藥相關(guān)基因CA916798核心啟動子區(qū)域的初步鑒定[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報,2014,36(7): 674.

[8]Kim Y T,Kim T Y,Lee D S,et al.Molecular changes of epidermal growth factor receptor (EGFR) and KRAS and their impact on the clinical outcomes in surgically resected adenocarcinoma of the lung[J].Lung Cancer,2008,59(1): 111.

[9]Li C,Fang R,Sun Y,et al.Spectrum of oncogenic driver mutations in lung adenocarcinomas from East Asian never smokers[J].PLoS One,2011,6(11): e28204.

[10]董強(qiáng)剛,韓寶惠,黃進(jìn)肅,等.176例非小細(xì)胞肺癌的EGFR基因突變分析[J].中華腫瘤雜志,2006,28(9): 686.

[11]Paez J G,Janne P A,Lee J C,et al.EGFR mutations in lung cancer: correlation with clinical response to gefitinib therapy[J].Science,2004,304(5676): 1497.

[12]Lynch T J,Bell D W,Sordella R,et al.Activating mutations in the epidermal growth factor receptor underlying responsiveness of non-small-cell lung cancer to gefitinib[J].N Engl J Med,2004,350(21): 2129.

[13]Pao W,Miller V,Zakowski M,et al.EGF receptor gene mutations are common in lung cancers from “never smokers” and are associated with sensitivity of tumors to gefitinib and erlotinib[J].Proc Natl Acad Sci USA,2004,101(36): 13306.

[14]Mulloy R,Ferrand A,Kim Y,et al.Anderson KS and Settleman J: Epidermal growth factor receptor mutants from human lung cancers exhibit enhanced catalytic activity and increased sensitivity to gefitinib[J].Cancer Res,2007,67(5): 2325.

[15]張靜,梁智勇,高潔,等.非小細(xì)胞肺癌表皮生長因子受體基因及k-ras基因突變與臨床病理特征的關(guān)系[J].協(xié)和醫(yī)學(xué)雜志,2010,1(01): 59.