不同醇沉濃度板藍(lán)根浸膏粉中多糖寡糖含量測(cè)定

★ 曾金娣 劉微 謝茵 羅曉健

(1.江西中醫(yī)藥大學(xué) 江西 南昌 330006；2.中藥固體制劑制造技術(shù)國(guó)家工程研究中心 江西 南昌 330006)

板藍(lán)根(Isatidis root),別名靛青根、藍(lán)靛根、靛根[1]，是十字花科植物菘藍(lán)(IsatistinctoriaL.)的干燥根,味苦性寒，具有清熱解毒、涼血利咽的功能,臨床上廣泛用于病毒性疾病及細(xì)菌性感染疾病的治療。板藍(lán)根中含有較多的多糖，它具有多種生物活性,對(duì)特異性免疫和非特異性免疫均有一定的促進(jìn)作用,是一種比較理想的免疫增強(qiáng)劑[2-6]。

本實(shí)驗(yàn)以板藍(lán)根不同醇沉濃度噴霧干燥粉為模型藥物，考察了不同醇沉濃度對(duì)其多糖寡糖含量的影響，為后續(xù)深入研究板藍(lán)根不同醇沉噴霧干燥粉的吸濕性及噴霧干燥工藝研究提供依據(jù)。

1 材料與儀器

苯酚(AR，西隴化工股份有限公司)；硫酸(AR，蘇州市晶協(xié)高薪電子材料有限公司)；葡萄糖(AR，西隴化工股份有限公司)；蒸餾水;自制板藍(lán)根不同醇沉濃度噴霧干燥粉。

UV-2550島津分光光度計(jì)(UVProbe工作站)；MAPADA紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)();BSA2245型分析天平(SARTORIPUS);恒溫震蕩儀(國(guó)華企業(yè)SHZ-82)；無(wú)水乙醇(AR);自制板藍(lán)根不同醇沉濃度噴霧干燥粉。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的葡萄糖對(duì)照品10mg，置100mL容量瓶中，以蒸餾水定容至刻度，搖勻，即得0.1 mg/mL葡萄糖對(duì)照品溶液。

2.2 浸膏粉多糖與寡糖供試液的制備 精密稱取真空干燥12h的中藥水提浸膏粉200mg及不同醇沉濃度浸膏粉60mg，分別置具塞錐形瓶中，加8mL蒸餾水置超聲儀中超聲15min，充分溶解，加入乙醇使含醇量達(dá)到80%，置于55℃恒溫震蕩儀中震蕩1h，冷卻過(guò)濾，濾液備用。濾渣溶于60℃蒸餾水中，震蕩1h，冷卻過(guò)濾，濾液定容至50mL，即為各浸膏粉的多糖供試液；備用濾液置于蒸發(fā)皿中，揮干乙醇，加蒸餾水溶解，60℃水浴中溶解1 h，冷卻過(guò)濾，濾液以蒸餾水定容至250mL為寡糖儲(chǔ)備液。精密量取水提浸膏粉寡糖儲(chǔ)備液5mL，以蒸餾水定容至50mL即為水提浸膏粉寡糖供試液。精密量取不同醇沉浸膏粉寡糖儲(chǔ)備液各5mL，定容至10mL，即為各不同醇沉濃度浸膏粉的寡糖供試液。

2.3 5%苯酚溶液的配制 稱取苯酚100g，加鋁片0.1g和碳酸鈉0.05g，常壓蒸餾，收集182℃餾分。精密稱取該餾分(100%苯酚)5g，置100mL容量瓶中，以蒸餾水定容至刻度，搖勻后，置棕色試劑瓶中，冷藏儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

2.4 最大吸收波長(zhǎng)的確定 精密量取1mL標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液，精密加入5%苯酚溶液1mL，搖勻，精密加入硫酸5mL，搖勻，置沸水浴中加熱20min，置冰浴中冷卻5min，放置至室溫，以相應(yīng)試劑為空白，在UV-2550島津分光光度計(jì)上掃描400～600nm之間的吸光度，檢測(cè)其最大吸收波長(zhǎng)為486nm，以此波長(zhǎng)吸收作為本法的吸收波長(zhǎng)。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別精密量取對(duì)照品溶液0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.8，0.9，1.0mL，分別置10mL具塞試管中，加水補(bǔ)至1.0mL，精密加入5%苯酚溶液1mL，搖勻，精密加入硫酸5mL，搖勻，置沸水浴中加熱20min，置冰浴中冷卻5min，室溫放置20min，以相應(yīng)試劑為空白，于486nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，無(wú)水葡萄糖含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以吸光度A對(duì)無(wú)水葡萄糖含量進(jìn)行線性回歸，得葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：Y=0.0098X-0.0409(r=0.9997),表明無(wú)水葡萄糖在19.44～97.20μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗(yàn) 分別精密稱取標(biāo)準(zhǔn)品0.5mL各6份，依次添加水使終體積為1.0mL分別按2.6項(xiàng)下測(cè)定含量，連續(xù)測(cè)定6次，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)，RSD=0.677%<2%，說(shuō)明該方法精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 按2.2項(xiàng)下"浸膏粉多糖和寡糖供試液的制備"平行制備同一浸膏粉多糖樣品6份，測(cè)定其吸光度，并計(jì)算多糖含量，測(cè)得樣品中多糖含量分別為：3.52%，3.54%，3.49%，3.70%，3.54%和3.57%，平均含量為3.56%，RSD為3.3%，說(shuō)明該含量測(cè)定方法重復(fù)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取供試品1.0mL，按照2.5項(xiàng)下方法，分別在0，10，20，30，50，60min時(shí)進(jìn)行測(cè)定，記錄吸光度，得到葡萄糖的吸光度值分別為：0.664，0.663，0.659，0.657，0.658，0.657和0.658，RSD為0.29%。表明供試品溶液在60min內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 加樣回收率試驗(yàn) 按照2.2項(xiàng)下制備多糖儲(chǔ)備液及寡糖儲(chǔ)備液，分別加入3個(gè)濃度水平標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖適量,加蒸餾水稀釋至刻度,搖勻,按多糖含量測(cè)定方法計(jì)算多糖寡糖含量，測(cè)得多糖平均回收率為100.75%,RSD為1.74%，寡糖平均回收率為100.24%,RSD為1.89%(n=6)。

2.10 樣品含量測(cè)定 精密量取同批1mL供試品溶液，精密加入5%苯酚溶液1mL，搖勻，精密加入硫酸5mL，搖勻，置沸水浴中加熱20min，置冰浴中冷卻5min，室溫放置20min，以相應(yīng)試劑為空白，測(cè)定其吸光度，計(jì)算中藥浸膏粉中多糖和寡糖的含量，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 板藍(lán)根不同醇沉濃度下多糖寡糖含量

多糖是一類大分子物質(zhì)，更易被沉淀出來(lái)，隨著醇沉濃度的增大，多糖所占含量比重減少，而寡糖多是小分子類物質(zhì)，不會(huì)被醇沉淀出來(lái)，其成分含量所占比重增大。

3 結(jié)論

通過(guò)測(cè)定板藍(lán)根不同醇沉濃度浸膏粉多糖寡糖含量的結(jié)果看,用本文所確定的苯酚-硫酸法于490nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度，其標(biāo)準(zhǔn)曲線好,回收率高,多糖含量測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定,重復(fù)性高,可以作為多糖含量測(cè)定方法。隨著醇沉濃度的增大，多糖含量減小，寡糖含量增大。

[1]張?bào)w祥,李艷福,劉捷,等.板藍(lán)根多糖的分離純化及其單糖組成的研究[J].河南工程學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2009,21(3):13.

[2]儲(chǔ)岳峰.九種中藥成分的免疫增強(qiáng)活性及其作用機(jī)理研究[D].南京:南京農(nóng)業(yè)大學(xué),2003.

[3]王元梁.南、北板藍(lán)根的異同[J].海峽藥學(xué),2003,15(5):86.

[4]肖珊珊,金郁,孫毓慶.板藍(lán)根化學(xué)成分、藥理及質(zhì)量控制研究進(jìn)展[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2003,20(6):455-459.

[5]徐晗,方建國(guó),劉云海.板藍(lán)根最新研究進(jìn)展[J].中草藥,2003,34(4):10-11.

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