香芍疏肝口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

★ 畢曉黎 彭麗詩 李素梅

(1.廣東省中醫(yī)藥工程技術(shù)研究院 廣東 廣州 510095；2.廣州中醫(yī)藥大學(xué) 廣東 廣州 510405)

香芍疏肝口服液由香附、白芍、柴胡等中藥組成，具有疏肝解郁、利膽和胃、理氣健脾、燥濕化痰的功效。在臨床上常用于肝氣不疏、脾胃壅滯導(dǎo)致的慢性胃炎、胃潰瘍、膽囊炎、膽囊結(jié)石等疾病。為了更好地控制其內(nèi)在質(zhì)量，保證臨床用藥安全有效，本文采用薄層色譜法對(duì)處方中的香附、白芍和柴胡進(jìn)行了定性鑒別，采用高效液相色譜法對(duì)處方中所含的芍藥苷進(jìn)行了含量測(cè)定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1200高效液相色譜儀(美國)；DAD檢測(cè)器；CAMAG TLC SAMPLER 4型全自動(dòng)薄層點(diǎn)樣儀(瑞士)；CAMAG Reprostar 3型薄層成像系統(tǒng)(瑞士)；Mettler XS205DU電子分析天平(瑞士)；KQ5200 DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山)；電熱恒溫水浴槽(上海)；DHG-9070A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海)。

1.2 試藥 香附對(duì)照藥材(批號(hào)：121059-200706)、白芍對(duì)照藥材(批號(hào)：120905-200508)、柴胡對(duì)照藥材(批號(hào)：120992-200504)、芍藥苷對(duì)照品(批號(hào)：110736-201035)均購于中國藥品生物制品檢定所；香芍疏肝口服液(批號(hào)：120907、120908、1210909，由廣東省第二中醫(yī)院制劑室提供)。

2 薄層色譜定性鑒別

2.1 香附定性鑒別 取本品10mL，加乙酸乙酯振搖提取2次，每次30mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL溶解作為供試品溶液。另取對(duì)照藥材2g，加水30mL，微沸30min，濾過，同法制成對(duì)照藥材溶液。取缺香附藥材的陰性樣品，同供試品溶液制備法制成香附陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-異丙醇-甲酸(7∶3∶0.1∶0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱約3min，放置5min后置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無干擾，見圖1。

1～3、供試品溶液；4、香附對(duì)照藥材溶液；5、香附陰性對(duì)照溶液

2.2 白芍定性鑒別 取本品5mL，加于大孔樹脂柱(內(nèi)徑1cm，高10cm)，先加水100mL洗脫，棄去洗脫液，后用20%乙醇100mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。另取白芍對(duì)照藥材1g，加水20mL，煮沸30min，濾過，濾液濃縮至5mL，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。取缺白芍藥材的陰性樣品，同供試品溶液制備法制成白芍陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液和對(duì)照藥材溶液各5μL，供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無干擾，見圖2。

2.3 柴胡定性鑒別 取本品20mL，加水飽和正丁醇振搖提取2次，每次30mL，合并正丁醇液，再用氨試液洗滌2次，每次30mL，棄去氨試液，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL溶解即得。另取1g對(duì)照藥材，同法制得對(duì)照藥材溶液。取缺柴胡藥材的陰性樣品，同供試品溶液制備法制成柴胡陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-乙酸乙酯-稀氨水(1→10)(4∶1∶5)上層溶液為展開劑，另槽用氨水飽和，展開，取出，晾干，噴以1%對(duì)二甲氨基苯甲醛的10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無干擾，見圖3。

1、芍藥苷對(duì)照品溶液;2、白芍對(duì)照藥材溶液;3～5、供試品溶液;6、白芍陰性對(duì)照溶液

1～3、供試品溶液；4、柴胡對(duì)照藥材溶液；5、柴胡陰性對(duì)照溶液

3 芍藥苷含量測(cè)定

3.1 色譜條件 色譜柱：Agilent Extend C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動(dòng)相：甲醇-0.2%磷酸水溶液(35∶65)；檢測(cè)波長：230nm；流速：1.0mL/min；柱溫：25℃。理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。

3.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL含115.4μg的溶液，即得。

3.3 供試品溶液的制備 精密量取本品5mL，水浴蒸干，殘?jiān)眉状级ㄈ葜?0mL，微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

3.4 陰性對(duì)照溶液制備 按處方比例，取缺白芍的其他各味藥，按制備工藝制成白芍陰性樣品，再按“3.3”項(xiàng)下方法制成白芍陰性對(duì)照溶液。

3.5 測(cè)定 分別精密吸取上述對(duì)照品溶液、供試品溶液、白芍陰性對(duì)照溶液各10μL，注入液相色譜儀，在上述色譜條件下測(cè)定，見圖4。結(jié)果顯示，在上述色譜條件下，芍藥苷與其他峰分離度較好，陰性對(duì)照無干擾。

A.白芍陰性對(duì)照溶液；B.供試品溶液；C.芍藥苷對(duì)照品溶液

3.6 線性關(guān)系考察 精密吸取芍藥苷對(duì)照品溶液(115.4μg/mL)2，4，6，8，10μL進(jìn)行測(cè)定，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，并以峰面積(Y)對(duì)芍藥苷含量(X)進(jìn)行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線：Y=23.5629X+1.0045，r=0.9999，表明芍藥苷在0.2308～1.1540μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.7 精密度試驗(yàn) 精密吸取芍藥苷對(duì)照品溶液(115.4μg/ml)10μL注入液相色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)得其峰面積RSD值為0.35%，表明儀器精密度良好。

3.8 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取供試品(批號(hào)：120907)5份，分別按照“3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并按照上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果芍藥苷平均含量為0.2051mg/mL，RSD=0.87%，表明該方法重現(xiàn)性好。

3.9 穩(wěn)定性試驗(yàn) 分別精密吸取同一份供試品溶液(批號(hào)：120907)，分別于0,2,4,8,12h進(jìn)樣10μL，按“3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果芍藥苷峰面積RSD=0.69%，表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3.10 加樣回收試驗(yàn) 精密稱取9份已知含量的樣品(批號(hào)：120907)，分別精密加入一定量的芍藥苷對(duì)照品，按“3.3”項(xiàng)下供試品制備方法處理，按“3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

3.11 供試品測(cè)定結(jié)果 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測(cè)得三批樣品中芍藥苷的含量，結(jié)果見表2。

4 討論

表1 芍藥苷加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

4.1 對(duì)方中香附進(jìn)行薄層鑒別時(shí)，按照藥典中香附的TLC鑒別方法[1]，但由于香芍疏肝口服液的制備工藝為水提，而α-香附酮為脂溶性物質(zhì)，難以提取出來，故供試品色譜中與對(duì)照品色譜無對(duì)應(yīng)斑點(diǎn)。在參考文獻(xiàn)中多種鑒別方法后[2,3]，采用上述方法進(jìn)行鑒別，且結(jié)果斑點(diǎn)清晰，分離效果好，且陰性無干擾。

4.2 對(duì)方中白芍進(jìn)行薄層鑒別時(shí)，按照藥典中白芍的鑒別方法[1]，結(jié)果背景較深，拖尾嚴(yán)重，無法清晰鑒別，故參考了文獻(xiàn)中多種方法[4,5]，對(duì)供試品進(jìn)行進(jìn)一步的純化處理，結(jié)果斑點(diǎn)清晰，分離度高，且陰性無干擾。

4.3 對(duì)方中柴胡進(jìn)行薄層鑒別時(shí)，按照藥典中柴胡的鑒別方法[1]，發(fā)現(xiàn)陰性有干擾，在參考文獻(xiàn)中多種鑒別方法后[6]，采用上述方法進(jìn)行鑒別，結(jié)果方法可行，且陰性無干擾。

4.4 芍藥苷的含量測(cè)定方法，是在參考文獻(xiàn)中芍藥苷的多種含量測(cè)定方法之后[7]，再對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行調(diào)整而建立的，通過方法學(xué)驗(yàn)證，該法準(zhǔn)確、可靠，可作為香芍疏肝口服液中苦芍藥苷的含量測(cè)定方法。

4.5 本文所建立的方法操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、準(zhǔn)確可靠、重現(xiàn)性好，可作為香芍疏肝口服液的質(zhì)量控制方法。

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