HPLC法測(cè)定注射用乳糖酸阿奇霉素中的有關(guān)物質(zhì)

譚佳　李鳳鳴　吳群容

[摘要] 目的 建立高效液相色譜法測(cè)定注射用乳糖酸阿奇霉素的有關(guān)物質(zhì)。 方法 采用高效液相色譜法測(cè)定已知雜質(zhì)以及未知單雜。使用BDS HYPERSIL C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），以乙腈∶pH8.2磷酸鹽緩沖液（0.05mol/L磷酸氫二鉀溶液， 用20%磷酸調(diào)節(jié)pH至8.2）（55∶45）為流動(dòng)相。樣品溶液的進(jìn)樣量為200μg，流速：1.5mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：293nm。 結(jié)果 乳糖酸阿奇霉素與其雜質(zhì)能達(dá)到基線分離，且阿奇霉素注射劑中的酸根對(duì)阿奇霉素的有關(guān)物質(zhì)測(cè)定無(wú)影響，供試品溶液的濃度與峰面積線性良好，方法的準(zhǔn)確性以及靈敏度均可滿足要求。 結(jié)論 該方法簡(jiǎn)便、專屬性好、靈敏度高，能較好反映各種乳糖酸阿奇霉素制劑中的有關(guān)物質(zhì)的情況。

[關(guān)鍵詞] 高效液相色譜法；乳糖酸阿奇霉素；有關(guān)物質(zhì)；制劑

[中圖分類號(hào)] R927 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 2095-0616（2014）13-97-03

[Abstract] Objective To establish the determination method of the related substances in azithromycin lactobionate and its injection. Methods High performance liquid chromatography（HPLC）was used for the determination of the known impurity and the unknown impurities. The analysis was performed on a BDS HYPERSIL C18 column （250mm×4.6mm， 5μm）. The mobile phase was composed of acetonitrile∶pH8. 2 phosphate buffer （0.05mol/L K2HPO4 solution， adjust pH to 8.2 with 20% phosphate acid） （ 55∶45） ，the injection amounts of sample solutions were 200μg，with the flow of 1.5mL/min.The detection wavelength was 293nm. Results Azithromycin lactobionate and its related substances can be well separated from each other on the developed system. The co-existence acids in azithromycin for injection did not interfere with the determination of the related substances. The chromatographic peak area and concentration of moxacin hydrochloride showed a good linear relationship。Accuracy and sensitivity of the method could meet the specific analytical requirements. Conclusion The developed method is convenient， a good specificity， high sensitivity. It can be used to determine the related substances in azithromycin lactobionate and its injection.

[Key words] HPLC； Azithromycin lactobionate； Related substances； Drug products

阿奇霉素在水中幾乎不溶解，但在稀酸溶液中易溶，且其對(duì)酸較敏感，在酸溶液中可使其完全降解[1-2]。中國(guó)藥典2005年版中收載有阿奇霉素，目前常用鹽酸、硫酸、乳糖酸、馬來(lái)酸、門冬氨酸阿奇霉素以及阿奇霉素磷酸二氫鈉、阿奇霉素檸檬酸二氫鈉及相應(yīng)的注射劑（粉針，小針劑及大輸液）[3]。有關(guān)物質(zhì)檢查是目前藥品安全性評(píng)價(jià)的一個(gè)重要指標(biāo)。HPLC法是最常用的有關(guān)物質(zhì)檢查方法之一[4]。近年，我國(guó)呼吸系統(tǒng)感染發(fā)病率直線上升，本品需求量穩(wěn)步攀升，已逐漸成為治療呼吸道感染的重要藥物。現(xiàn)參考國(guó)內(nèi)外藥典及有關(guān)文獻(xiàn)，建立控制注射用阿奇霉素有關(guān)物質(zhì)的方法，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

AG-135電子天平（瑞士Mettler Toledo公司），戴安U3000高效液相色譜儀，檢測(cè)器：VWD檢測(cè)器，工作站：變色龍軟件；Milli-Q超純水系統(tǒng)（美國(guó)密理博公司）。

1.2 試藥及溶劑

市售注射用乳糖酸阿奇霉，阿奇霉素系統(tǒng)適用性對(duì)照品、阿奇霉素峰鑒別對(duì)照品（均為歐洲藥典對(duì)照品）；其原料、輔料均由沈陽(yáng)第一制藥有限公司提供。甲醇、乙腈均為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

使用BDSHYPERSILC18色譜柱（250mm× 4.6mm，5μm），以乙腈∶pH8.2磷酸鹽緩沖液（0.05mol/L磷酸氫二鉀溶液液，用20%磷酸調(diào)節(jié)pH至8.2）（55∶45）為流動(dòng)相。樣品溶液的進(jìn)樣量為200μg，流速：1.5mL/min，進(jìn)樣量：20μL，理論板數(shù)不低于3500，檢測(cè)波長(zhǎng)：293nm，柱溫：40℃。

2.2 供試品溶液和對(duì)照溶液的制備

精密稱取供試品3mL，置于10mL棕色容量瓶中，加溶劑至刻度，搖勻，作為供試品溶液；精密稱取1mL，置于10mL棕色容量瓶中，加溶劑至刻度，搖勻，精密稱取1mL，置于100mL棕色容量瓶中，加溶劑至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液。

2.3 檢測(cè)方法

精密量取供試品溶液和對(duì)照溶液各50?L，分別注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，記錄色譜圖。取系統(tǒng)適用性對(duì)照品溶液及峰鑒別對(duì)照品溶液50?L注入液相色譜儀，根據(jù)峰鑒別溶液色譜圖確定雜質(zhì)峰位，錄色譜圖至主峰保留時(shí)間的2.5倍。

2.4 線性

稱取供試品適量，置于50mL棕色容量瓶中，加溶劑稀釋至每毫升含0.1mg的溶液，搖勻，量取1mL，置于100mL棕色容量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，作為線性儲(chǔ)備液；精密稱取上述儲(chǔ)備液2、5、10、20、30mL，分置于100mL棕色容量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，作為線性測(cè)試溶液1、2、3、4、5；精密量取上述線性測(cè)試溶液1、2、3、4、5線性儲(chǔ)備液各20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果見(jiàn)表1，表明在2.017～30.255范圍內(nèi)，線性關(guān)系較好。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密取供試品50mg，置于100mL棕色容量瓶中，加溶劑至刻度，搖勻，精密量取1mL，置于10mL棕色容量瓶中，加溶劑至刻度，搖勻，精密量取1mL，置于100mL棕色容量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；精密量取上述供試品溶液50?L連續(xù)進(jìn)樣5次。見(jiàn)表2。

3 討論

阿奇霉素為半合成的十五大環(huán)內(nèi)酯類藥物，其屬于廣譜抗生素，其抗菌譜與紅霉素相近，但其作用較強(qiáng)，對(duì)淋球菌、流感嗜血桿菌的作用比紅霉素強(qiáng)4倍；不僅對(duì)革蘭陽(yáng)性菌有較強(qiáng)的抗菌活性，且對(duì)嗜肺軍團(tuán)菌、肺炎衣原體及沙眼衣原體等作用也較強(qiáng)，對(duì)抗梭狀芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌感染也比紅霉素有效；該藥物口服吸收迅速，口服生物利用度為40%，消除半衰期可長(zhǎng)達(dá)32～45h臨床廣泛用于控制呼吸系統(tǒng)感染，泌尿系統(tǒng)感染及其他感染[5-10]。

本研究對(duì)乳糖酸阿奇霉素中有關(guān)物質(zhì)測(cè)定的HPLC法進(jìn)行了系統(tǒng)的方法學(xué)驗(yàn)證。結(jié)果顯示，乳糖酸阿奇霉素進(jìn)樣質(zhì)量在2.017～30.255μg/mL（r=0.9999）范圍內(nèi)，供試品溶液的濃度與峰面積線性良好。最小檢出限：供試品的最小檢測(cè)限為0.11μg/mL。最小定量限為4.03ng，精密度：RSD為0.92%。溶液穩(wěn)定性：RSD為0.87%，試品溶液及其對(duì)照溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

本研究對(duì)樣品和市售品進(jìn)行了檢測(cè)，對(duì)已知雜質(zhì)進(jìn)行了檢測(cè)及定量分析，結(jié)果顯示，乳糖酸阿奇霉素中單個(gè)已知雜質(zhì)均達(dá)到檢測(cè)限，且未知雜質(zhì)未檢出。綜上所述，本研究建立的易在國(guó)內(nèi)普及、專屬性較好的阿奇霉素有關(guān)物質(zhì)HPLC分析方法，較好地解決了阿奇霉素有關(guān)物質(zhì)分析的難題，為阿奇霉素注射劑質(zhì)量控制提供了良好的分析手段。但阿奇霉素對(duì)酸敏感、對(duì)熱不穩(wěn)定，因此，阿奇霉素輸液劑型應(yīng)注重其合理性。

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（收稿日期：2014-04-21）