HPLC法測定腸蟲清膠囊中阿苯達(dá)唑的含量

游國葉，熊大偉

(信陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院 藥學(xué)院，河南 信陽 464000)

腸蟲清膠囊的主藥成分為阿苯達(dá)唑，阿苯達(dá)唑(Albendazole，ABZ)又名丙硫咪唑，化學(xué)名為5-丙硫基-1H-苯并咪唑-2-氨基甲酸甲酯，為一廣譜高效低毒的驅(qū)蟲藥．該藥由美國Smith Kline公司1977年首次上市，臨床上廣泛用于治療各種蠕蟲感染性疾病，其作用機理主要在于抑制蟲體延胡索酸還原酶，阻止蟲體能量的生成，從而達(dá)到殺滅蟲體的目的。該藥對人體及動物寄生的線蟲、吸蟲、滌蟲均有強大的驅(qū)殺作用，并可顯著抑制蟲卵發(fā)育，在體內(nèi)無積蓄作用，其驅(qū)蟲譜、療效及毒性等均優(yōu)于目前已投產(chǎn)的其他抗蠕蟲藥物，該藥現(xiàn)已被列入醫(yī)保產(chǎn)品，成為臨床上用于治療各種蠕蟲感染性疾病的首選藥物[1]。在阿苯噠唑原料的現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中，其含量測定在美國藥典29版、歐洲藥典5.0版和中國藥典2010年版[2]中均為滴定法，其膠囊劑含量測定在中國藥典2010年版規(guī)定的方法為分光光度法，利用295nm處的吸收系數(shù)計算含量[2]。HPLC法測定阿苯達(dá)唑的含量的報道較為少見[3]，我們通過建立HPLC法測定腸蟲清膠囊中阿苯達(dá)唑的含量，方法快速、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters2695高效液相色譜儀，Waters2996紫外檢測器 (美國Waters公司)；BP211D型半微量電子天平；PHS—2CA數(shù)字式酸度計(上海理達(dá)儀器廠)。

1.2 試藥

腸蟲清膠囊 (新鄉(xiāng)市同心藥業(yè)，批號20080110，20080113，20080117，規(guī)格0.2g)；阿苯達(dá)唑?qū)φ掌?(中國藥品生物制品檢驗所，批號100373-200301)；純化水(新鄉(xiāng)市平安藥業(yè)有限公司)；甲醇為色譜純(江蘇國達(dá)，200704)，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

阿苯達(dá)唑為堿性化合物，和硅膠柱的硅醇基有較強的相互作用，會造成強保留，因此應(yīng)選擇硅醇相互作用弱的色譜柱，Luna C18的硅醇相互作用約為0.2[3]，能夠獲得理想的分析結(jié)果。

流動相之一應(yīng)該選擇緩沖液，以獲得穩(wěn)定的保留時間，同時為了解決阿苯達(dá)唑的溶解性問題，選取0.1 mol/L醋酸銨緩沖液(用醋酸調(diào)節(jié)pH至3.1)。當(dāng)緩沖液和甲醇的比例調(diào)整到40∶60時，阿苯達(dá)唑的保留時間在穩(wěn)定在9.8 min左右。流量為1 mL/min，柱溫20℃。

取阿苯噠唑?qū)φ掌酚么姿崛芙?，流動相稀釋? mg/mL，在200～400 nm的波長范圍內(nèi)掃描，阿苯噠唑在288 nm處有最大吸收，故紫外檢測器的波長為288 nm。

所以色譜條件為：

色譜柱：Luna C18(5μm,(250×4.6)mm)；流動相：甲醇-0.1 mol/L醋酸銨緩沖液(用醋酸調(diào)節(jié)pH至3.1)(60：40)；檢測波長：288 nm；流量：1 mL/min;進(jìn)樣量：20 μL；柱溫：20℃。

在上述色譜條件下，阿苯達(dá)唑的色譜圖見圖1，和雜質(zhì)峰的分離度大于1.5，拖尾因子1.03，理論塔板數(shù)按阿苯達(dá)唑計算大于3 500。

圖1 阿苯達(dá)唑的色譜圖

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取阿苯達(dá)唑?qū)φ掌?0 mg，置50 mL量瓶中，加醋酸10 mL，振搖使溶解，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，準(zhǔn)確量取5.0 mL置10 mL量瓶中，加流動相定容，搖勻，稀釋成0.5 mg/mL對照品液。

2.2.2 供試品溶液的制備

取本品內(nèi)容物，研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于阿苯達(dá)唑50 mg)，置50 mL量瓶中，加醋酸10 mL，振搖使溶解，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液5.0 mL置10 mL量瓶中，加流動相定容，搖勻，即得。

2.3 線性關(guān)系考察

精密稱取干燥至恒重的阿苯達(dá)唑?qū)φ掌?0 mg，置50 mL量瓶中，加醋酸10 mL，振搖使溶解，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得阿苯達(dá)唑?qū)φ掌穬湟?。分別準(zhǔn)確量取1.0，2.0，4.0，5.0，6.0，8.0和10.0 mL阿苯達(dá)唑?qū)φ掌穬湟褐?0 mL量瓶中，加流動相定容，搖均，即成0.1，0.2，0.4，0.5，0.6，0.8，1.0 mg/mL系列溶液，按2.1項下色譜條件測定峰面積，以峰面積對濃度作線性回歸，結(jié)果見圖2。結(jié)果表明，阿苯達(dá)唑在0.1～1.0 mg/mL濃度范圍內(nèi)A=2.85×106C+6.5×104，r=0.999 5,線性關(guān)系良好。

圖2 阿苯達(dá)唑的線性關(guān)系

2.4 精密度試驗

取0.5 mg/mL阿苯達(dá)唑?qū)φ掌啡芤海?.1項下色譜條件進(jìn)樣6次，測定峰面積，精密度試驗RSD為0.40%，精密度良好。

2.5 重復(fù)性試驗

取同一批號20080113樣品，按2.3項下方法制備6份供試液，按2.1項下色譜條件進(jìn)樣，測定峰面積，重復(fù)性試驗RSD為0.66%，重復(fù)性良好。

2.6 加樣回收率試驗

精密稱取已知含量的樣品(20080113)細(xì)粉約50 mg，分別加入高、中、低(20 mg、40 mg、60 mg)不同量干燥至恒重的阿苯達(dá)唑?qū)φ掌?，?份，按含量測定方法進(jìn)行測定，計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗結(jié)果

2.7 穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液在放置時間為0、2、4、6、10 h時進(jìn)樣，測定峰面積，穩(wěn)定性試驗RSD為0.52%，穩(wěn)定性良好。

2.8 定量限

按信噪比為3(S/N=3)對最低檢測限進(jìn)行測定，結(jié)果表明，當(dāng)進(jìn)樣濃度為0.25μg/mL時，阿苯噠唑峰信號約為基線噪音的3倍，即最低檢測濃度為0.25μg/mL。

3 樣品含量測定

取3批樣品各20粒膠囊，傾出內(nèi)容物，囊殼用小刷拭凈，精密稱定，精密稱取適量(約相當(dāng)于阿苯達(dá)唑50 mg)，按2.2.2項下方法制備供品溶液。分別取供試液和2.2.1項下對照品液，在2.1項下色譜條件進(jìn)樣，用峰面積外標(biāo)法計算含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果

注：樣品含量計算方法為

4 討論

阿苯達(dá)唑微溶于丙酮、乙酸，不溶于乙醇、水，溶于乙酸[3]，制約了流動相的選擇，采用甲醇-醋酸銨緩沖液為流動相，通過調(diào)整流動相比例和PH值,既解決了溶解性問題,也獲得了較好的系統(tǒng)適用性。

雖然藥典規(guī)定的分光光度法在295 nm波長處測定吸收值，但在我們實驗的色譜條件下，阿苯達(dá)唑的最大吸收在288 nm處，這是因為在pH3.1時，阿苯達(dá)唑以離子狀態(tài)存在，共軛結(jié)構(gòu)減少，最大吸收向短波方向移動。

與中國藥典規(guī)定的分光光度法相比，本法能夠排除雜質(zhì)干擾，準(zhǔn)確度高，重復(fù)性、穩(wěn)定性好。

參考文獻(xiàn)：

[1] 萬啟惠．廣譜驅(qū)蠕蟲新藥—— 丙硫咪唑[J].遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報，1988，11(1)：73-74.

[2] 國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(二部)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2005:290.

[3] 邵超.HPLC法測定阿苯達(dá)唑顆粒的含量[J].黑龍江醫(yī)藥，2011，3(5)：31.