高效液相色譜－蒸發(fā)光散射檢測(cè)法測(cè)定腦絡(luò)通膠囊中黃芪甲苷含量

岳 莉

（安徽省淮北市食品藥品檢驗(yàn)所，安徽 淮北 235000）

腦絡(luò)通膠囊是由丹參浸膏、鹽酸托哌酮、川芎浸膏、甲基橙皮 苷、黃芪浸膏、維生素B6制成的膠囊劑，具有擴(kuò)張血管、增加腦血流量作用，主要用于腦血栓、腦動(dòng)脈硬化、中風(fēng)后遺癥等。本制劑收載于國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)YBZ00702009、藥典業(yè)發(fā)（2000）第 319號(hào)、國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)（試行）YBZ11852004[1]。該制劑執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)多，但均未對(duì)黃芪的主成分黃芪甲苷進(jìn)行含量測(cè)定。為更好控制該產(chǎn)品質(zhì)量，采用高效液相色譜－蒸發(fā)光散射檢測(cè)(ELSD－HPLC)法測(cè)定腦絡(luò)通膠囊中黃芪甲苷的含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Waters e2695 HPLC色譜系統(tǒng)；Empower Waters工作站；Waters 2424蒸發(fā)光散射檢測(cè)器；超聲波處理器（濟(jì)寧奧波超聲電氣有限公司，批號(hào)為 JAC－300）；Mettler AE－240型電子分析天平（0.1 mg，0.01 mg）；YP202N 型電子分析天平（0.01 g）。黃芪甲苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110781－200613，供含量測(cè)定用）；腦絡(luò)通膠囊（廣東羅定制藥有限公司，批號(hào)分別為110404，110502；四川泰華堂制藥有限公司，批號(hào)為120104；煙臺(tái)益生堂藥業(yè)有限公司，批號(hào)為111002）；乙腈為色譜純，正丁醇、氨水、乙醇為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Hypersil ODS2柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈 － 水（30 ∶70）[2]；流速：1.0 mL ／min；柱溫：25 ℃ ；進(jìn)樣量：20 μL。檢測(cè)器條件：漂移管溫度 50℃，檢測(cè)器的增益為 135，噴霧器加熱功率設(shè)置為60%。在此條件下，色譜圖見圖1。

2.2 溶液制備

精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品16.67 mg，置25 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得每1 mL中含0.666 8 mg的黃芪甲苷對(duì)照品溶液，作為對(duì)照品貯備液[3]。取裝量差異項(xiàng)下內(nèi)容物，混勻，精密稱定 5 g，加甲醇 100 mL，置水浴上加熱回流1 h，濾過，濾液蒸干[4]，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，用水飽和的正丁醇提取4次，每次40 mL，合并正丁醇提取液，用氨試液充分洗滌2次，每次40 mL，棄去氨液，正丁醇蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，用D101型大孔吸附樹脂柱（內(nèi)徑 1.5 cm，長(zhǎng) 12 cm）以水 50 mL洗脫，棄去水液，再用40%乙醇30 mL洗脫，棄去洗脫液，繼用70%乙醇80 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液。按膠囊處方，稱取除黃芪處的其他藥材粉末5 g，按供試品制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

干擾試驗(yàn)：取2.2項(xiàng)下3種溶液，按擬訂的色譜條件進(jìn)樣。在供試品溶液色譜中，與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)的位置上有相同保留時(shí)間的色譜峰，而陰性對(duì)照品溶液在此保留時(shí)間無色譜峰出現(xiàn)，表明沒有其他成分干擾峰（見圖1）。

線性關(guān)系考察：分別精密量取對(duì)照品貯備液 1.0，2.0，3.0，5.0，7.0 mL，置 10 mL 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，按上述色譜條件，精密量取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積的自然對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)[5]，以黃芪甲苷對(duì)照品質(zhì)量溶液濃度自然對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)（g／L），進(jìn)行線性回歸分析，得回歸方程 lnY＝1.437 9 lnX＋18.347 2，r＝0.999 9(n＝5)。結(jié)果表明，黃芪甲苷質(zhì)量濃度在0.066 7～0.466 8 g／L范圍內(nèi)與峰面積具有良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：精密量取20 μL對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次。結(jié)果黃芪甲苷對(duì)照品峰面積的自然對(duì)數(shù)分別為16.706 4，16.790 5，16.7510，16.8052，16.7268，RSD 為 0.25%，表明儀器精密度良好。

圖1 高效液相色譜圖

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液（批號(hào)為 110404），于 2，4，8，22，24 h時(shí)分別進(jìn)樣測(cè)試，記錄色譜圖。結(jié)果黃芪甲苷峰面積自然對(duì)數(shù)的 RSD為0.44%，表明供試品溶液在24 h時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批號(hào)的樣品（批號(hào)為110404）6份，各測(cè)定2次，照樣品測(cè)定項(xiàng)下方法測(cè)定，計(jì)算含量。結(jié)果黃芪甲苷的平均含量為0.496 3 mg／g，RSD為 1.73%，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：稱取已知含量的樣品（批號(hào)為110404）9份，分別精密加入對(duì)照品，按2.2項(xiàng)下制備方法得加樣回收率試驗(yàn)溶液，精密量取20 μL注入液相色譜儀，依法測(cè)定。結(jié)果見表1。

表1 黃芪甲苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n＝9)

2.4 樣品含量測(cè)定

取本品 3批，各取2份，稱取細(xì)粉 5 g，按2.2項(xiàng)下制備方法得樣品溶液，精密量取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，用回歸方程計(jì)算含量。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

ELSD是近幾年應(yīng)用在色譜方面的新型檢測(cè)器，為質(zhì)量通用型檢測(cè)器，其響應(yīng)值取決于被測(cè)物質(zhì)顆粒的數(shù)量和大小，特別是對(duì)無紫外吸收或紫外末端吸收物質(zhì)具有較高的檢測(cè)靈敏度，已成為中藥分離分析的重要有效方法。

在色譜條件選擇的過程中，經(jīng)試驗(yàn)，乙腈 －水（30∶70）為流動(dòng)相時(shí)分離效果好，峰形對(duì)稱，保留時(shí)間適宜，雜質(zhì)峰達(dá)到基線分離，陰性無干擾。

對(duì)樣品提取時(shí)正丁醇用量進(jìn)行了考察，分別比較了用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次50 mL，每次40 mL，每次30 mL，結(jié)果提取4次、每次40 mL的提取效果最高。

[1]YBZ11852004，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)（試行）[S].

[2]唐麗香.ELSD－HPLC法測(cè)定前列通膠囊中黃芪甲苷的含量[J].海峽藥學(xué)，2010，22（8）：105 －106.

[3]涂興明，李賜恩，吳康郁.高效液相色譜－蒸發(fā)光檢測(cè)法測(cè)定傷骨健膠囊中黃芪甲苷的含量[J].中藥材，2010，33（6）：999 －1 000.

[4]劉浩文，劉嘉儀，楊妙榮等.黃芪藥材中黃芪甲苷含量測(cè)定的兩種方法的比較研究[J].中藥新藥與臨床藥理，2011，22（6）：659 －662.

[5]朱曉威，姜啟娟.高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方三七口服液中黃芪甲苷含量[J].中國(guó)藥業(yè)，2009，18（2）：28.