電針對家兔易損斑塊模型單核細胞趨化因子－1和斑塊內巨噬細胞浸潤的影響*

張洪俠，周桂桐，郭茂娟，張 敏，胡先同，姜希娟△

(1.天津中醫(yī)藥大學，天津300193;2.泰安市婦幼保健院，山東泰安271000)

大量研究表明，動脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)的發(fā)生發(fā)展是一個損傷與抗損傷的慢性炎癥過程，從脂質條紋到纖維斑塊和粥樣斑塊，再到不穩(wěn)定斑塊的破裂和血栓形成，都有各種炎癥細胞和炎癥因子的參與［1－2］。AS斑塊炎癥的急性發(fā)作是導致斑塊易損、破裂、促進急性冠脈綜合征發(fā)生的重要因素［3－4］。在研究中發(fā)現(xiàn)，易損斑塊內有大量炎細胞浸潤，其中以巨噬細胞數(shù)量增多明顯，因此，斑塊內大量巨噬細胞浸潤是易損斑塊的重要標志［5－6］。單核細胞趨化因子－1(MCP－1)是趨化單核細胞的重要細胞因子，它促進血液循環(huán)中的單核細胞向斑塊內遷移而轉化為巨噬細胞［7－8］。巨噬細胞被激活并產(chǎn)生大量 MCP－1，促使更多的單核細胞進入動脈壁，并吞噬脂蛋白形成泡沫細胞，參與粥樣斑塊的形成［9－10］。另外，激活的巨噬細胞還通過蛋白基質降解酶，促進基質降解，導致斑塊的不穩(wěn)定、破裂甚至血栓形成，導致病情急劇惡化，甚至危及生命［11－12］。針灸防治動脈粥樣硬化相關缺血性疾病，臨床上已有較多應用，療效顯著。研究發(fā)現(xiàn)，針灸對動脈粥樣硬化斑塊發(fā)生、發(fā)展有防治作用［13－14］。結合臨床應用針刺治療冠心病獲得療效，本研究將從炎癥角度探討電針對AS的干預作用。

1 材料與方法

1.1 主要實驗儀器及試劑

電針治療儀(G6805－Ⅱ型，青島鑫升實業(yè)有限公司);全自動生化儀(7080型，日立)。小鼠抗兔RAM11單克隆抗體(Dako Cytomation);抗小鼠二抗(美國vector公司);兔MCP－1ELISA試劑盒(美國R＆D公司)

1.2 實驗動物分組、模型制備及治療

選用健康雄性日本純系大耳白兔27只，體重(2.0±0.2)kg，由北京華阜康動物實驗中心提供。隨機分為正常對照組、模型組和針灸組。適應性喂養(yǎng)1周后，對照組飼以普通料，不做任何處理;模型組、高脂飼料喂養(yǎng)2周，參照文獻［15］行股動脈球囊拉傷術復制腹主動脈易損斑塊模型，造模后繼續(xù)高脂飼養(yǎng)10周;針灸治療組:高脂飼養(yǎng)2周后行球囊拉傷術，造模后繼續(xù)高脂飼養(yǎng)8周，之后再給予2周的電針治療。

選穴:參照《實驗針灸學》常用實驗動物針灸穴位選?。?6］。簡述如下:家兔仰臥于兔臺上四肢綁縛固定。局部常規(guī)消毒，足三里直刺1.5～2.5 cm，內關穴直刺0.5～1 cm。針刺得氣后接通電針治療儀，輸出電路一組接左側足三里和內關穴，一組接右側足三里和內關穴。電針波形為疏密波，輸出電流強度以兔能耐受及局部肌肉微微抽動為宜，每日 1次，每次20 min，持續(xù)14 天。

1.3 形態(tài)學觀察

腹主動脈標本行HE染色，在光學顯微鏡下觀察斑塊的形態(tài)學改變。

1.4 免疫組織化學檢測

利用RAM11單克隆抗體行免疫組織化學檢測，計數(shù)RAM11陽性細胞。每組切片隨機選取5個視野，每個視野數(shù)100個總細胞，計算陽性細胞所占總細胞百分比。

1.5 血清MCP－1的檢測

采用ELISA法測定MCP－1含量。實驗步驟按照說明書操作步驟進行。

1.6 統(tǒng)計學分析

2 實驗結果

2.1 病理學檢查結果

HE染色觀察，高倍鏡下可見:對照組主動脈管壁薄厚均勻，內膜完整，中膜、外膜分界清楚，無AS病灶。模型組，AS各期病變均可見，但以粥樣斑塊期多見，多表現(xiàn)為偏心斑塊，具有較大的脂質核心薄的纖維帽，有豐富的泡沫細胞和明顯的炎細胞浸潤。與模型組相比，針灸組病變明顯減輕，見封三彩圖1。

2.2 免疫組織化學結果

RAM11抗體標記的巨噬細胞陽性表達為胞漿內棕黃色顆粒。模型組和針灸組均可見染成棕黃色的RAM11陽性表達信號，對照組胸主動脈未檢測到RAM11的表達，針灸組RAM11陽性表達標記的巨噬細胞與總細胞的比值降低，與模型組相比差異有顯著性，P＜0.05。見封三彩圖2和表1。

2.3 血清MCP－1表達結果

模型組血清MCP－1水平升高，與對照組相比，差異有顯著性，P＜0.01;電針可有效降低血清MCP－1水平，與模型組相比有顯著性差異(P＜0.01)。見表2。

表1 電針對鼠抗兔巨噬細胞抗體11的影響(±s)

表1 電針對鼠抗兔巨噬細胞抗體11的影響(±s)

注:與模型組相比，*P ＜0.05。

組別 n MCP－1陽性細胞所占百分比(%)54.57 ±12.20針灸組 9 26.79 ±11.58模型組9*

表2 電針對血清MCP－1的影響(±s)

表2 電針對血清MCP－1的影響(±s)

注:與正常對照組相比，*P ＜0.01;與針灸組相比，※P ＜0.01。

組別 n MCP－1濃度(ng/L)正常對照組943.25 ±7.8022.85 ±6.41模型組 9 57.73 ±5.22＊※針灸組9

3 討論

中醫(yī)學把AS歸屬于“痰凝血瘀”范疇，其病機為本虛標實。治療采用化痰軟堅行氣散結及活血化瘀之法。內關穴為手厥陰心包經(jīng)，具有行氣活血之功;足三里為足陽明胃經(jīng)，具有濁降、除痰濕之功。

針刺對AS斑塊發(fā)生發(fā)展有改善作用，可縮小斑塊的厚度和面積［13］。針刺內關穴可以減少大鼠主動脈內膜脂質的沉積及泡沫細胞的形成，同時降低致炎因子的表達［17］。由此推測，針刺通過抑制炎癥反應達到穩(wěn)定效應。研究發(fā)現(xiàn)，動脈粥樣硬化斑塊中MCP－1表達增高，與斑塊的穩(wěn)定密切相關［18］。

本研究結果提示，電針處理可以有效降低MCP－1的表達，減少巨噬細胞的浸潤，表明電針干預可有效預防AS的進展，對 AS有一定的治療作用，電針對MCP－1蛋白表達及巨噬細胞調節(jié)作用可能是防治AS機制之一。因此可以推測，電針對AS斑塊的防治效應與抑制MCP－1和巨噬細胞循環(huán)通路有關:電針通過抑制MCP－1表達，減少巨噬細胞的入侵，進而減少由巨噬細胞分泌的MCP－1和其它多種致炎因子以及蛋白基質降解酶表達，降低斑塊內炎癥反應，抑制斑塊不穩(wěn)定性、斑塊內出血和斑塊破裂的發(fā)生，達到降低急性缺血綜合征發(fā)生效應。

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