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    決明子茶中游離蒽醌含量及抗氧化能力的研究

    2014-07-26 06:29:08田大年黃宇
    食品研究與開發(fā) 2014年12期
    關鍵詞:決明子蒽醌二氯甲烷

    田大年,黃宇

    (1.寧夏醫(yī)科大學公共衛(wèi)生學院,寧夏銀川750004;2.寧夏醫(yī)科大學藥學院,寧夏銀川750004)

    決明子為豆科植物決明(Cassia obtusifolia L.)或小決明(Cassia tora L.)的干燥成熟種子,為常用中藥。決明子入藥最早記載于《神農本草經》,列為上品,以明目之功而名,性味甘、苦、咸、微寒、無毒,歸肝、腎、大腸經。具有清肝明目、潤腸通便的作用[1],現(xiàn)代藥理學研究表明,決明子有降血壓,降血脂,保肝抑菌等活性[2-3],被廣泛應用。另外,決明子又是可以作為藥食兩用的中藥,是保健飲料的良好原料。近年來又發(fā)現(xiàn)決明子提取物具有清除自由基、抵抗氧化的作用[4-6],因此決明子作為一種保健食品的原料越來越引起重視,極具開發(fā)應用價值。決明子茶是在決明子的基礎上進行炒制后所得的產品,具有潤腸通便功效,也是減肥佳品。蒽醌類為決明子的主要藥效成分,呈游離或與糖結合成苷狀態(tài),苷類所連接的糖主要是葡萄糖。決明子中蒽醌類化合物因其結構的不同,溶解特性差異也不同。因此應根據其極性和水溶性的大小選擇合適的溶劑提取。提取方法有水熱浸提法、有機溶劑提取法、超臨界萃取技術、微波萃取技術。本文以不同比例的醇/水溶液作為溶劑提取決明子茶中的有效成分,采用醋酸鎂-甲醇法顯色[7],再利用紫外可見光度法[8]研究提取物中游離蒽醌的含量,采用FRAP法[9-10]研究提取物抗氧化活性。旨在為決明子的保健食品的研究及資源開發(fā)上提供理論依據及檢測手段。

    1 材料與儀器

    1.1 儀器

    UV-2550紫外分光光度計:日本島津;RE-3000旋轉蒸發(fā)儀:上海亞榮生化儀器廠。

    1.2 試劑及材料

    決明子茶:銀川市雅麗茶食品有限公司,保健型80 g裝;二氯甲烷;1,8-二羥基蒽醌;醋酸鎂甲醇乙醇硫酸亞鐵三水合醋酸鈉;TPTZ (2,4,6-三吡啶基-S-三嗪);鹽酸;冰醋酸;鐵粉;三氯化鐵均為分析純。

    2 方法

    2.1 試劑的配制

    2.1.1 標準液的配制

    精密稱取1,8-二羥基蒽醌0.010 g,量取二氯甲烷100 mL。配制成0.1 mg/mL的1,8-二羥基蒽醌二氯甲烷的標準液置于100 mL量瓶中。

    2.1.2 醋酸鎂-甲醇液的配置

    精密稱取1.25 g醋酸鎂,量取250 mL甲醇。配制成0.5%的醋酸鎂-甲醇液,置于250 mL容量瓶中。

    2.1.3 10 mmol/lTPTZ溶液的配制

    準確稱取0.159 4 g TPTZ于50 mL容量瓶中,加40 mmol/L鹽酸溶液定容。搖勻備用。

    2.1.4 20 mmol/L FeCl3溶液配制

    準確稱取FeCl3粉末0.162 2 g于50 mL容量瓶中,加純化水至刻度,搖勻備用。

    2.1.5 醋酸鹽緩沖溶液(PH3.6)

    0.775 g三水合醋酸鈉+4 mL冰醋酸,然后用純化水定容至250 mL。搖勻備用

    2.2 最大波長的選擇

    以1,8-二羥基蒽醌為標準品,于105℃烘2 h后置干燥器內使用。精密量取1,8-二羥基蒽醌二氯甲烷的標準液(0.1 mg/mL)1.0 mL,置于10 mL容量瓶中,水浴蒸發(fā)二氯甲烷至干。殘渣加入0.5%醋酸鎂-甲醇液溶解并稀釋至刻度,搖勻,測定其吸收特征。

    2.3 標準曲線的繪制

    分別精密量取1,8-二羥基蒽醌二氯甲烷的標準液(0.1 mg/mL)0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL,分別置 10 mL量瓶中,在水浴上揮去二氯甲烷,殘渣加0.5%醋酸鎂-甲醇液溶解并稀釋至刻度,搖勻,于511 nm處測定其吸收度,以0.5%醋酸鎂-甲醇液作空白對照。

    2.4 樣品的提取

    取樣品決明子茶10 g,粉碎后,過40目篩,裝瓶標號待用。

    2.4.1 樣品的超聲提取

    稱取粉碎后的茶1 g,分別置于100 mL錐形瓶中,加入55%(乙醇/水為95%)乙醇各40 mL,置于超聲波清洗器中,溫度為45℃,功率為80 W,超聲處理30 min,靜置冷卻至室溫后抽濾到100 mL容量瓶中,重復提取兩次,合并濾液,用55%的乙醇定容至100mL,既得提取液。

    2.4.2 樣品的回流提取

    稱取粉碎后的茶1 g,于100 mL圓底燒瓶中加入55%(乙醇/水為95%)乙醇各30 mL分別回流1 h,再各加入25 mL溶劑重復兩次,抽濾,洗滌濾渣后合并溶液,于100 mL容量瓶中定容至刻度備用。

    2.5 樣品的含量測定

    精密稱取樣品適量,在水浴上揮去溶劑,用適量0.5%醋酸鎂-甲醇液溶解,并轉移至10 mL量瓶中,稀釋至刻度,搖勻,于511 nm處測定吸收度。以0.5%醋酸鎂-甲醇液作空白對照。

    2.6 鐵還原抗氧化能力分析

    2.6.1 配制FRAP試劑(現(xiàn)配現(xiàn)用)

    10 mmol/L TPTZ 溶液:20 mmol/L FeCl3溶液:醋酸鹽緩沖溶液(pH3.6)=1∶1∶10的體積比混勻現(xiàn)用。

    2.6.2 標準曲線的繪制

    稱取硫酸亞鐵結晶0.695 g置于50 mL容量瓶中,加少許鐵粉防止氧化,作為母液,取此母液2.5 mL稀釋至25 mL,此稀釋液作為硫酸亞鐵標準液。分別取硫酸亞鐵標準液 0、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、120 μL于5 mL容量瓶中,用FRAP試劑定容,混勻后在37℃下反應10 min,在593 nm處測吸光度。以硫酸亞鐵的摩爾濃度為橫坐標,吸光值為縱坐標,繪制標準的曲線。

    2.6.3 樣品的分析

    分別取樣品提取液20 μL,置于5 mL容量瓶中,用FRAP試劑定容,混勻后在37℃下反應10 min,在593 nm處測吸光度。平行測3次。樣品中總抗氧化能力在標準曲線中查出相應的值,樣品的抗氧化能力以(mmol/L)/g表示。

    3 結果分析

    3.1 最大吸收波長測定

    按照實驗2.2的方法處理,在紫外分光光度計下測定器最大吸收波長結果見圖1。

    圖1 最大吸收波長Fig.1 The maximum absorption wavelength

    可以發(fā)現(xiàn)醋酸鎂-甲醇法的最大吸收波長為511 nm。

    3.2 標準曲線

    在511nm處以1,8-二羥基蒽醌二氯甲烷標準液質量濃度為橫坐標,吸光值為縱坐標,繪制標準其曲線,曲線如圖2。

    圖2 1,8-二羥基蒽醌二氯甲烷液標準曲線Fig.2 1,8-two hydroxyanthraquinone methylene chloride solution standard curve

    可知在0.005 mg/mL~0.03 mg/mL的濃度范圍內線性良好,相關祥光系數(shù)R2=0.999 8,所得回歸方程為y=44.67x+0.027 2。

    3.3 不同提取物中游離蒽醌的含量

    不同提取物中游離蒽醌的含量,見表1。

    表1 決明子中游離蒽醌的含量Table 1 The content of free anthraquinone in semen cassiae

    由表1可看出樣品游離蒽醌百分含量:水回流0.08%;55%乙醇回流0.64%;95%醇回流0.35%;水超聲0.18%;55%醇超聲0.67%;95%醇超聲0.24%。55%醇提取游離蒽醌效果較好。

    3.4 FRAP標準曲線

    以硫酸亞鐵的摩爾濃度為橫坐標,吸光值為縱坐標,繪制出標準曲線,如圖3。

    圖3 FRAP標準曲線Fig.3 FRAP standard curve

    在10 μmol/L~120 μmol/L 線性范圍良好,相關系數(shù)為R2=0.999 7,所得回歸方程為y=0.020 6x+0.040。

    3.5 樣品鐵還原抗氧化力

    樣品鐵還原抗氧化力見表2。

    表2 樣品鐵還原抗氧化力測定Table 2 Samples ferric reducing antioxidant power

    由表2可看出樣品的鐵還原抗氧化力為:水回流1.63 mmol/g;55%醇回流 2.14 mmol/g;95%醇回流1.51mmol/g;水超聲1.08mmol/g;55%醇超聲2.14mmol/g;95%醇超聲1.16 mmol/g。

    4 討論

    本實驗提取決明子茶中有效成分,對游離蒽醌進行了含量測定,并對提取物的抗氧化活性進行了研究。由實驗結果可知,決明子茶提取物中均含有一定量的游離蒽醌,因此決明子茶不管是用水或者是酒沖泡飲用,均有一定的潤腸通便功效??赡苡捎跐櫮c通便作用較緩和,蒽醌含量較為適中,含量過多則易導致腹瀉等癥狀。本實驗結果為決明子茶具潤腸通便功效提供了理論依據。

    決明子茶提取物能夠有效還原Fe3+,從抗氧化能力來看,用55%乙醇提取樣品明顯強于用95%乙醇和水提取的樣品,但因提取液的成分復雜,抗氧化作用的發(fā)揮并不是單靠某一種成分的作用,其具體原因有待進一步深入研究。

    [1]韓昌志.決明子煎劑對家兔和狗睫狀肌中乳酸脫氫酶活性的影響[J].同濟醫(yī)科大學學報,1994,23(6):246-248

    [2]陳衛(wèi)星,刁國俊,蔣文娟,等.決明子對高膽固醇血癥小鼠模型的影響[J].中草藥,1991,22(2):72-73

    [3]Wong S.M.Anthraquinone Geycosides from the seeds of cassia tora[J].Phytochemistry,1989,28(1):211-213

    [4]賈振寶,丁霄霖.決明子提取物的體外抗氧化實驗研究[J].食品與機械,2005,21(6):44-45

    [5]徐建國,胡青平.決明子水提物體外清除自由基活性的研究[J].食品科學,2006,27(6):73-76

    [6]陳秋東,徐蓉,徐志南,等.決明子中蒽醌類化學成分及其生物活性研究進展[J].中國現(xiàn)代應用藥學雜志,2003,20(2):120-124

    [7]吳銀生,陳堅.望江南中蔥醒成分的比色測定[J].基層中藥雜志,1996,10(2):39-40

    [8]張小梅,楊榮平,勵娜,等.決明子中蒽醌類成分的含量測定[J].時珍國醫(yī)國藥,2007,18(1):97-98

    [9]劉小兵,樸建華,田園.幾種生物活性物質體外抗氧化能力評價技術的研究[J].衛(wèi)生研究,2009,38(3),280-282

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