Delta-catenin和Rac1蛋白在肺癌組織中共表達(dá)的臨床意義

張俊毅，董彩鳳

（1.赤峰學(xué)院醫(yī)學(xué)院病理教研室；2.赤峰學(xué)院附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科，內(nèi)蒙古 赤峰 024000）

Delta-catenin和Rac1蛋白在肺癌組織中共表達(dá)的臨床意義

張俊毅1，董彩鳳2

（1.赤峰學(xué)院醫(yī)學(xué)院病理教研室；2.赤峰學(xué)院附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科，內(nèi)蒙古 赤峰 024000）

張俊毅，男，漢族，1977年3月出生于內(nèi)蒙古烏蘭察布市商都縣。2000年畢業(yè)于內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)，2003-2006年于河北醫(yī)科大學(xué)攻讀病理學(xué)碩士學(xué)位，2007-2010年于中國醫(yī)科大學(xué)攻讀病理學(xué)博士學(xué)位，2012年9月進(jìn)入汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)博士后流動站從事博士后科研工作?，F(xiàn)任赤峰學(xué)院醫(yī)學(xué)院副教授，呼吸內(nèi)科副主任醫(yī)師。

目的：探討Delta-catenin和Racl蛋白在肺癌組織中是否存在共表達(dá)及其臨床意義.方法：用免疫組化方法檢測60例非小細(xì)胞肺癌標(biāo)本中Delta-catenin和Racl蛋白的表達(dá)，并分析它們表達(dá)的相關(guān)性及其與患者臨床病理因素之間的關(guān)系.結(jié)果：Delta-catenin在肺癌組織中的陽性表達(dá)率為65.0%(39/60)，明顯高于正常肺組織的表達(dá)（0%，0/20）；而Racl的陽性表達(dá)率為61.7%(37/60)，也顯著高于正常肺組織的表達(dá)（0%，0/20）.此外，Delta-catenin的陽性表達(dá)和Racl的陽性表達(dá)具有明顯的相關(guān)性（P＜0.05）.與高分化、低pTNM分期和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例相比，Delta-catenin和Racl的共表達(dá)率在低分化、高pTNM分期和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例中顯著增高（P＜0.05或0.01）.Delta-catenin和Racl共表達(dá)患者的術(shù)后生存時間也明顯短于非共表達(dá)的患者（P＜0.05）.結(jié)論：Delta-catenin和Racl在肺癌組織中的共表達(dá)與患者的不良預(yù)后顯著相關(guān).

Delta-catenin；Racl；非小細(xì)胞肺癌

有報(bào)道揭示Delta-catenin的高表達(dá)與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移等惡性行為密切相關(guān)[1]，而細(xì)胞突起的形成和數(shù)量是腫瘤細(xì)胞具備侵襲轉(zhuǎn)移能力的重要形態(tài)學(xué)標(biāo)志，且研究也發(fā)現(xiàn)Delta-catenin的表達(dá)能夠促進(jìn)細(xì)胞突起的形成[2-3]，而細(xì)胞突起的形成常常與細(xì)胞骨架的裝配有關(guān)，并且小GTP酶（如Racl）是細(xì)胞骨架裝配的重要調(diào)節(jié)因子[4-5]，因此筆者推測Delta-catenin促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移很可能是通過調(diào)節(jié)小GTP酶的活性、進(jìn)而影響細(xì)胞骨架的裝配而實(shí)現(xiàn)的.新近的報(bào)道雖然也揭示了在肺癌細(xì)胞系中Delta-catenin通過調(diào)節(jié)小GTP酶的活性而促進(jìn)瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移[6]，然而在肺癌組織中Delta -catenin與小GTP酶是否存在共表達(dá)及其與患者的臨床病理因素及預(yù)后是否相關(guān)并不清楚.

本研究應(yīng)用免疫組化方法對60例非小細(xì)胞肺癌標(biāo)本中Delta-catenin和Racl蛋白的表達(dá)情況進(jìn)行了檢測，并分析了它們的共表達(dá)與患者臨床病理因素及預(yù)后的關(guān)系.

1 材料與方法

1.1 組織標(biāo)本與病人資料

60例非小細(xì)胞肺癌及20例癌旁正常肺組織標(biāo)本選自赤峰學(xué)院附屬醫(yī)院病理科2004～2009年的存檔蠟塊.患者術(shù)前未接受放化療.其中男性38例，女性22例，平均年齡56歲.根據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）2004年肺腫瘤組織學(xué)分類標(biāo)準(zhǔn)[7]：鱗癌26例，腺癌34例.高分化19例，中分化26例，低分化15例.按照國際抗癌聯(lián)盟（UICC）的腫瘤pTNM分期標(biāo)準(zhǔn)[8]：Ⅰ期16例，Ⅱ期28例，Ⅲ期13例，Ⅳ期3例.我們對所有患者進(jìn)行了術(shù)后隨訪，生存時間是從手術(shù)日期到死亡（由于復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移所引起）或末次隨訪日期為止.以上所有標(biāo)本的使用均征得了赤峰學(xué)院附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會的同意且患者本人或家屬知情.

1.2 免疫組織化學(xué)染色與結(jié)果判定

標(biāo)本制成4μm連續(xù)切片，采用SP免疫組織化學(xué)方法進(jìn)行染色.小鼠抗人單克隆抗體Deltacatenin(美國Santa Cruz公司)、Racl(美國pierce公司)的稀釋度均為l:100.SP染色試劑盒和DAB顯色劑均購自福州邁新生物技術(shù)公司.PBS代替一抗做陰性對照.

計(jì)數(shù)400個腫瘤細(xì)胞并統(tǒng)計(jì)陽性染色細(xì)胞所占的百分?jǐn)?shù).參照文獻(xiàn)描述的Delta-catenin評分標(biāo)準(zhǔn)[1]：免疫染色的強(qiáng)度（0=negative,1=weak,2= moderate,3=strong），免疫染色的陽性細(xì)胞數(shù)（0=absent,1=1～25%，2=26～50%，3=51～75%，4=≥76%），標(biāo)本的最終評分為兩項(xiàng)評分的乘積.為了便于統(tǒng)計(jì)，將評分結(jié)果分為兩組：陰性表達(dá)定義為＜2，陽性表達(dá)定義為≥2.Rac1的評分標(biāo)準(zhǔn)參照文獻(xiàn)[9]：陽性細(xì)胞數(shù)≤25%為(+)，26-75%為(++)，≥76%為(+++).(-)～(+)定義為正常表達(dá)，(++)～(+++)為過表達(dá).Delta-catenin陽性表達(dá)和Rac1過表達(dá)被定義為共表達(dá).

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

應(yīng)用SPSS for Windows 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析.免疫組化結(jié)果采用Pearson's Chi-Square檢驗(yàn).患者生存分析采用Kaplan-Meier法，Log-Rank檢驗(yàn)患者生存率的差別.P＜0.05被認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異.

2 結(jié)果

2.1 Delta-catenin和Racl蛋白的表達(dá)在肺癌組織中顯著增高，且它們的表達(dá)具有明顯相關(guān)性

表1 Delta-catenin和Racl在肺癌組織中表達(dá)的相關(guān)性

圖1 Delta-catenin在正常氣道上皮細(xì)胞(A)中呈陰性表達(dá)，而在肺鱗癌（B）和肺腺癌（C）中呈陽性表達(dá)；相似地，Racl在正常氣道上皮細(xì)胞(D)中也呈陰性表達(dá)，而在肺鱗癌（B）和肺腺癌（C）中呈陽性表達(dá).SP免疫組化法

Delta-catenin在正常肺組織中為陰性表達(dá)（0/20，圖1），在60例肺癌病例中有39例陽性表達(dá)，陽性率為65.0%(39/60).Racl在肺癌組織中的過表達(dá)率為61.7%(37/60)，而它們在正常肺組織中均為陰性表達(dá)(0/20).Delta-catenin和Racl均為陽性表達(dá)（共表達(dá)）的病例有26例，占病例總數(shù)的43.3%（26/60），而非共表達(dá)的患者占總數(shù)的56.7%（34/60）.此外，Delta-catenin的陽性表達(dá)和Racl的過表達(dá)存在明顯的相關(guān)性(p<0.05；表1).

2.2 Delta-catenin和Racl蛋白在肺癌組織中的共表達(dá)與患者的不良預(yù)后顯著相關(guān)

在Delta-catenin和Racl共表達(dá)的26例病例中（表2）：低分化有10例，占低分化病例總數(shù)的66.7%（10/15），明顯高于高-中分化的35.6%（16/45，p＜0.05）；III-IV期的共表達(dá)病例為11例，占68.8%（11/16），顯著高于I-II期的34.1%（15/44，p＜0.01）；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的共表達(dá)病例為17例，占60.7%（17/28），也明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病例的28.1%（9/32，p＜0.01）.然而，共表達(dá)與患者的年齡、性別和組織類型沒有明顯關(guān)聯(lián)（p＞0.05）.此外，Kaplan-Meier生存曲線顯示Delta-catenin和Racl共表達(dá)患者的生存時間顯著短于非共表達(dá)的患者（Log-Rank檢驗(yàn)p＜0.05，圖2）.

表2 Delta-catenin和Racl的共表達(dá)與患者臨床病理因素的關(guān)系

圖2 Kaplan-Meier生存曲線顯示Delta-catenin和Racl共表達(dá)（co-expression）患者的生存時間顯著短于非共表達(dá)（Non co-expression）的患者（Log-Rank檢驗(yàn)，p<0.05）

3 討論

新近的文獻(xiàn)報(bào)道Delta-catenin可通過調(diào)節(jié)小GTP酶活性而促進(jìn)肺癌細(xì)胞的惡性表型[6]，但在肺癌組織中Delta-catenin和小GTP酶的表達(dá)是否具有相關(guān)性，以及它們的共表達(dá)與患者的預(yù)后是否有關(guān)等問題并不清楚.本研究運(yùn)用免疫組化方法發(fā)現(xiàn)Delta-catenin和Racl在肺癌組織中的表達(dá)均比正常肺組織明顯增高，并且Delta-catenin的陽性表達(dá)和Racl的過表達(dá)具有顯著的相關(guān)性.此外，Delta-catenin和Racl的共表達(dá)與肺癌組織的低分化、高pTNM分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，而且生存分析顯示Delta-catenin和Racl共表達(dá)的肺癌患者的術(shù)后平均生存時間也顯著縮短.

眾所周知，小GTP酶家族蛋白是細(xì)胞骨架重構(gòu)、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和基因表達(dá)通路的重要調(diào)節(jié)因子[4-5].目前研究最為深入的有Rac1、Cdc42和RhoA這三個成員，其中Rac1的活性增高可以促進(jìn)細(xì)胞偽足的形成，有利于細(xì)胞的運(yùn)動和游走[10-11].本研究顯示Delta-catenin和Racl在肺癌組織中存在共表達(dá)并與患者的不良預(yù)后密切相關(guān)，這與Delta-catenin與包括Racl在內(nèi)的小GTP酶相互作用而促進(jìn)肺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相輔相成，進(jìn)一步完善了Delta-catenin與小GTP酶家族成員在促進(jìn)肺癌侵襲轉(zhuǎn)移中的相互作用關(guān)系，也為下一步深入探討Delta-catenin在肺癌中的表達(dá)調(diào)控機(jī)制奠定了基礎(chǔ).

總之，肺癌組織中不僅存在著Delta-catenin的高表達(dá)，而且它的表達(dá)與Racl的過表達(dá)存在著顯著的相關(guān)性.Delta-catenin和Racl的共表達(dá)不僅與肺癌組織的低分化、高分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，還與患者術(shù)后顯著降低的生存時間密切相關(guān)，因此把Delta-catenin和Racl的表達(dá)作為判斷肺癌患者預(yù)后的因子具有重要的臨床意義.

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R361+.3

A

1673-260X（2014）07-0016-03

國家自然科學(xué)基金（81201844）；內(nèi)蒙古自然科學(xué)基金（2012MS1109）