種子處理粉劑中吡蟲(chóng)啉、甲霜靈和福美雙的HPLC法快速分析

于曉萍+姜業(yè)朝+拜鈺

摘要：為了建立對(duì)種子處理粉劑中吡蟲(chóng)啉、甲霜靈和福美雙含量的高效液相色譜快速分析方法，使用配備了瑞典Kromasil 100-5-C18不銹鋼色譜柱的美國(guó)Angilent 1260高效液相色譜儀，利用高效液相色譜法測(cè)定種子處理粉劑中吡蟲(chóng)啉、甲霜靈和福美雙的含量，以甲醇-水溶液為流動(dòng)相，采用梯度洗脫；流速控制在1.0 mL/min；柱溫：室溫；213 nm 的檢測(cè)波長(zhǎng)；進(jìn)樣體積20 μL。結(jié)果表明，在10～500 mg/L的范圍內(nèi)，吡蟲(chóng)啉、甲霜靈和福美雙線性關(guān)系良好，平均回收率為100.18%、99.97%和99.94%，吡蟲(chóng)啉的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.0613%，甲霜靈的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.045 1%，福美雙的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.051 5%。此方法可快速測(cè)定種子處理粉劑中吡蟲(chóng)啉、甲霜靈和福美雙的含量，具有方法新穎、快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、精密度好等優(yōu)點(diǎn)。

關(guān)鍵詞：種子處理粉劑；吡蟲(chóng)啉；甲霜靈；福美雙；高效液相色譜法；快速

中圖分類(lèi)號(hào)： O657.7+2文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2014）02-0255-03

收稿日期：2013-09-25

基金項(xiàng)目：2013年江蘇省高等職業(yè)院校國(guó)內(nèi)高級(jí)訪問(wèn)學(xué)者計(jì)劃（編號(hào)：FX001）；江蘇省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃（編號(hào)：201313754002Y）。

作者簡(jiǎn)介：于曉萍（1970—），女，江蘇揚(yáng)州人，副教授，研究方向?yàn)橛袡C(jī)合成、儀器分析。E-mail：jsyzyuxp@163.com。吡蟲(chóng)啉（imidacloprid，CAS：105827-78-9；138261-41-3），是煙堿類(lèi)超高效殺蟲(chóng)劑，由德國(guó)拜耳公司和日本特殊農(nóng)藥株式會(huì)社共同開(kāi)發(fā)。甲霜靈（英文名稱(chēng)：metalaxyl，CAS：57837-19-1）是瑞士汽巴-嘉基公司1977年開(kāi)發(fā)出的一種防治藻菌綱病害的新型、高效、低毒、內(nèi)吸性酰胺類(lèi)殺菌劑[1]。福美雙（英文名稱(chēng)：thiram，CAS：137-26-8）是一種廣譜、低毒、保護(hù)性有機(jī)硫殺菌劑[2]，20世紀(jì)60年代初天津市農(nóng)藥研究所開(kāi)始生產(chǎn)、推廣使用福美雙，現(xiàn)已成為我國(guó)殺菌劑主要品種之一[3]。含有吡蟲(chóng)啉、甲霜靈和福美雙的種子處理粉劑是農(nóng)藥公司新開(kāi)發(fā)的集防病治蟲(chóng)抗旱等功能于一體的新型種子處理粉劑。新型種子處理粉劑的推廣使用，帶來(lái)對(duì)其含量分析的要求，這關(guān)系到控制殺菌殺蟲(chóng)效果、質(zhì)量、生產(chǎn)成本等方面的問(wèn)題[4-5]。吡蟲(chóng)啉目前的測(cè)定方法是以乙腈-水（體積比1 ∶3）為流動(dòng)相的高效液相色譜法[6-7]和以甲醇-02%磷酸水溶液（體積比40 ∶60） 為流動(dòng)相的高效液相色譜法[8-9]；甲霜靈目前的測(cè)定方法有氣相色譜法和高效液相色譜法[10-11]；福美雙有高效液相色譜分析方法的報(bào)道[12-13]。由于含有吡蟲(chóng)啉、甲霜靈和福美雙的種子處理粉劑是新型種子處理粉劑，未有測(cè)定方法的報(bào)道。本方法以甲醇-水為流動(dòng)相，在分離過(guò)程中設(shè)計(jì)合理的梯度洗脫過(guò)程，實(shí)現(xiàn)了高效液相色譜分析法同時(shí)測(cè)定種子處理粉劑中吡蟲(chóng)啉、甲霜靈和福美雙的含量，具有方法新穎、快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、精密度好等優(yōu)點(diǎn)。

1材料與方法

1.1儀器

采用配備了瑞典AKZO NOBEL公司Kromasil 100-5-C18不銹鋼色譜柱，150 mm×4.6 mm，具有可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器的Angilent 1260高效液相色譜儀；美國(guó)Angilent液相色譜工作站；20 μL的自動(dòng)進(jìn)樣器；孔徑為0.45 μm的過(guò)濾器；賽多利斯cp225D型十萬(wàn)分之一電子分析天平。

1.2試劑

吡蟲(chóng)啉標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品（98.6%，上海市農(nóng)藥研究所檢測(cè)中心）；甲霜靈標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品（99.2%，上海市農(nóng)藥研究所檢測(cè)中心）；福美雙標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品（98.3%，上海市農(nóng)藥研究所檢測(cè)中心）；甲醇：色譜純；新制二次蒸餾水；其余試劑均為分析純。

種子處理粉劑樣品（有效成分：含吡蟲(chóng)啉、甲霜靈和福美雙均在10%左右）由江蘇糧滿倉(cāng)農(nóng)化有限公司提供。

1.3色譜條件

流動(dòng)相：甲醇-水溶液在不同時(shí)間的體積比為40 ∶60（0 min）、40 ∶60（5 min）、80 ∶20（15 min）、80 ∶20（25 min）、40 ∶60（平衡5 min）；流速控制在1.0 mL/min；柱溫：室溫（要求試驗(yàn)過(guò)程中溫差變化小于2 ℃）；檢測(cè)波長(zhǎng)：213 nm；進(jìn)樣體積20 μL。在此條件下樣品與干擾物質(zhì)完全分離，吡蟲(chóng)啉保留時(shí)間約為2.5 min，甲霜靈保留時(shí)間約為10.3 min，福美雙保留時(shí)間約為4.3 min，色譜圖見(jiàn)圖1、2、3。種子處理粉劑中吡蟲(chóng)啉、甲霜靈和福美雙在此色譜條件下能夠完全分離，色譜圖見(jiàn)圖4。

1.4溶液的配制

1.4.1吡蟲(chóng)啉、甲霜靈和福美雙標(biāo)準(zhǔn)混合溶液的制備稱(chēng)取吡蟲(chóng)啉、甲霜靈、福美雙各0.05 g（精確至0.000 02 g），依次放入 50 mL 容量瓶中，加入約40 mL流動(dòng)相，用超聲波振蕩10 min使其溶解，取出冷卻至室溫后，加入流動(dòng)相定容至刻度，搖勻備用，其中含吡蟲(chóng)啉、甲霜靈和福美雙質(zhì)量濃度均為1 000.0 mg/L。

1.4.2試樣溶液的制備稱(chēng)取相當(dāng)于0.025 g吡蟲(chóng)啉，或0025 g甲霜靈，或0.025 g福美雙（精確至0.000 02 g），放入25 mL容量瓶中，加入約20 mL流動(dòng)相，用超聲波振蕩10 min使其溶解，取出冷卻至室溫后，加入流動(dòng)相定容至刻度，搖勻備用。

2結(jié)果與分析

2.1檢測(cè)波長(zhǎng)的確定

由于吡蟲(chóng)啉、甲霜靈和福美雙在213 nm處均有較好的吸收，且雜質(zhì)干擾較少，經(jīng)過(guò)試驗(yàn)可以得知，在此波長(zhǎng)下同時(shí)檢測(cè)吡蟲(chóng)啉、甲霜靈和福美雙3個(gè)樣品，3個(gè)樣品的檢測(cè)線性范圍、檢測(cè)精密度及回收率都可滿足要求，故選擇此波長(zhǎng)處進(jìn)行檢測(cè)。

2.2線性關(guān)系考察endprint

利用1 000.0 mg/L的吡蟲(chóng)啉、甲霜靈和福美雙標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，配制含吡蟲(chóng)啉、甲霜靈和福美雙的質(zhì)量濃度由低到高依次均為10.0、20.0、50.0、100.0、200.0、500.0 mg/L，依次吸取各質(zhì)量濃度溶液進(jìn)樣，記錄色譜圖。以吡蟲(chóng)啉、甲霜靈和福美雙標(biāo)準(zhǔn)品溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)作出對(duì)應(yīng)的關(guān)系曲線，吡蟲(chóng)啉的線性回歸方程為y=36 030x-21198，相關(guān)系數(shù)r=0.999 99；甲霜靈的線性回歸方程為y=34 501x+40.576，相關(guān)系數(shù)r=0.999 96；福美雙的線性回歸方程為y=59 879x+14.923，相關(guān)系數(shù)r=1.000 00。由此可見(jiàn)：該方法對(duì)于吡蟲(chóng)啉、甲霜靈和福美雙的含量在10～500 mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3方法精密度、重現(xiàn)性試驗(yàn)

在前述色譜操作條件下，分別對(duì)吡蟲(chóng)啉、甲霜靈和福美雙的3批試樣進(jìn)行5次平行測(cè)定，結(jié)果吡蟲(chóng)啉含量的RSD為0061 3%，甲霜靈含量的RSD為0.045 1%，福美雙含量的RSD為0.051 5%（表1）。結(jié)果表明：在此條件下進(jìn)行分析，標(biāo)準(zhǔn)偏差小，精密度高，而且重現(xiàn)性良好。

2.4方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn)

精密稱(chēng)取5份已知含量的樣品，分別精密加入吡蟲(chóng)啉、甲霜靈和福美雙標(biāo)準(zhǔn)品，制成供試品溶液，進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表2。

3結(jié)論

參考文獻(xiàn)：

[1]Urrea K，Rupe J C，Rothrock C S. Effect of fungicide seed treatments，cultivars，and soils on soybean stand establishment[J]. Plant Disease，2013，97（6）：807-812.

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[13]董廣新，周良佳，杜薇. 40%啶菌唑·福美雙懸乳劑高效液相色譜分析[J]. 農(nóng)藥，2005，44（12）：551-552.endprint

利用1 000.0 mg/L的吡蟲(chóng)啉、甲霜靈和福美雙標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，配制含吡蟲(chóng)啉、甲霜靈和福美雙的質(zhì)量濃度由低到高依次均為10.0、20.0、50.0、100.0、200.0、500.0 mg/L，依次吸取各質(zhì)量濃度溶液進(jìn)樣，記錄色譜圖。以吡蟲(chóng)啉、甲霜靈和福美雙標(biāo)準(zhǔn)品溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)作出對(duì)應(yīng)的關(guān)系曲線，吡蟲(chóng)啉的線性回歸方程為y=36 030x-21198，相關(guān)系數(shù)r=0.999 99；甲霜靈的線性回歸方程為y=34 501x+40.576，相關(guān)系數(shù)r=0.999 96；福美雙的線性回歸方程為y=59 879x+14.923，相關(guān)系數(shù)r=1.000 00。由此可見(jiàn)：該方法對(duì)于吡蟲(chóng)啉、甲霜靈和福美雙的含量在10～500 mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3方法精密度、重現(xiàn)性試驗(yàn)

在前述色譜操作條件下，分別對(duì)吡蟲(chóng)啉、甲霜靈和福美雙的3批試樣進(jìn)行5次平行測(cè)定，結(jié)果吡蟲(chóng)啉含量的RSD為0061 3%，甲霜靈含量的RSD為0.045 1%，福美雙含量的RSD為0.051 5%（表1）。結(jié)果表明：在此條件下進(jìn)行分析，標(biāo)準(zhǔn)偏差小，精密度高，而且重現(xiàn)性良好。

2.4方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn)

精密稱(chēng)取5份已知含量的樣品，分別精密加入吡蟲(chóng)啉、甲霜靈和福美雙標(biāo)準(zhǔn)品，制成供試品溶液，進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表2。

3結(jié)論

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利用1 000.0 mg/L的吡蟲(chóng)啉、甲霜靈和福美雙標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，配制含吡蟲(chóng)啉、甲霜靈和福美雙的質(zhì)量濃度由低到高依次均為10.0、20.0、50.0、100.0、200.0、500.0 mg/L，依次吸取各質(zhì)量濃度溶液進(jìn)樣，記錄色譜圖。以吡蟲(chóng)啉、甲霜靈和福美雙標(biāo)準(zhǔn)品溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)作出對(duì)應(yīng)的關(guān)系曲線，吡蟲(chóng)啉的線性回歸方程為y=36 030x-21198，相關(guān)系數(shù)r=0.999 99；甲霜靈的線性回歸方程為y=34 501x+40.576，相關(guān)系數(shù)r=0.999 96；福美雙的線性回歸方程為y=59 879x+14.923，相關(guān)系數(shù)r=1.000 00。由此可見(jiàn)：該方法對(duì)于吡蟲(chóng)啉、甲霜靈和福美雙的含量在10～500 mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3方法精密度、重現(xiàn)性試驗(yàn)

在前述色譜操作條件下，分別對(duì)吡蟲(chóng)啉、甲霜靈和福美雙的3批試樣進(jìn)行5次平行測(cè)定，結(jié)果吡蟲(chóng)啉含量的RSD為0061 3%，甲霜靈含量的RSD為0.045 1%，福美雙含量的RSD為0.051 5%（表1）。結(jié)果表明：在此條件下進(jìn)行分析，標(biāo)準(zhǔn)偏差小，精密度高，而且重現(xiàn)性良好。

2.4方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn)

精密稱(chēng)取5份已知含量的樣品，分別精密加入吡蟲(chóng)啉、甲霜靈和福美雙標(biāo)準(zhǔn)品，制成供試品溶液，進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表2。

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