漢中麻鴨腸道定殖菌的生活狀態(tài)和分布

王進+陳文強+鄧百萬+彭浩+解修超+孔亞男+劉兆迪+趙娜娜

摘要：采用梯度稀釋和組織培養(yǎng)方法，分別用LB、玫瑰紅鈉及MRS固體培養(yǎng)基對漢中麻鴨腸道定殖菌進行培養(yǎng)并計數(shù)，結(jié)果表明：漢中麻鴨腸道中定殖有芽孢菌、酵母菌和乳酸菌；芽孢菌在漢中麻鴨小腸后段達到最大值，菌體數(shù)達6.3×104 CFU/mL；酵母菌在盲腸達到最大值，菌體數(shù)達7.6×104 CFU/mL；乳酸菌在十二指腸后段達到最大值，菌體數(shù)達8.6×104 CFU/mL。

關(guān)鍵詞：麻鴨；腸道；定殖菌；芽孢菌；酵母菌；乳酸菌；生活狀態(tài)；分布

中圖分類號： S834+.835文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2014）02-0176-02

收稿日期：2013-06-17

作者簡介：王進（1988—），男，陜西禮泉人，碩士，從事微生物資源開發(fā)利用研究。

通信作者：陳文強（1956—），男，陜西洋縣人，教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事微生物資源保護與利用研究。Email：wenqiangc@126.com。麻鴨為觀賞及肉用兼用型鴨種，在全國各地廣泛分布，紹興麻鴨、高郵麻鴨、吳川麻鴨、微山麻鴨、漢中麻鴨等都是我國麻鴨的優(yōu)良品種。麻鴨體型較小，羽毛緊湊；毛色麻褐色居多，體軀及背部土黃色并有黑褐色斑點[1]；頭清秀，喙呈橙黃色，脛、蹼多為橘紅色，少數(shù)為烏色；初生重為38.7 g，300日齡體重公鴨為1 172 g、母鴨為1 157 g，成年公鴨體重為1 kg、母鴨為1.4 kg；160～180日齡開始產(chǎn)蛋，年產(chǎn)蛋220枚，平均蛋重為68 g/枚，蛋殼顏色以白色為主，還有青色。

芽孢菌（Bacilus）是一種廣泛分布于土壤、水、空氣及動物腸道等處的細菌，對外界有害因子抵抗力強，作為益生菌中的一種，它能分泌高活性胞外產(chǎn)物，其中包含蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等水解酶和一些分解飼料中非淀粉多糖的酶類[2]。酵母菌（Saccharomyces）僅零星存在于動物腸道內(nèi)，是動物腸道內(nèi)寄生的一類正常有益菌。酵母細胞富含蛋白質(zhì)、核酸、維生素和多種酶，具有增加飼料適口性、促進動物對飼料消化吸收能力等功能，并可提高動物對磷的利用率[3]。乳酸菌是動物微生態(tài)制劑中研究報道最多、可以分解糖類產(chǎn)生乳酸的革蘭氏陽性菌，厭氧或兼性厭氧生長。乳酸菌在pH值為3.0～4.5時可生長，對胃中酸性環(huán)境有一定耐受性[4]。研究表明，乳酸菌能夠調(diào)節(jié)機體胃腸道正常菌群，保持微生態(tài)平衡，提高食物消化率和生物價，降低血清膽固醇，控制內(nèi)毒素，抑制腸道內(nèi)腐敗菌生長繁殖和腐敗產(chǎn)物的產(chǎn)生，制造營養(yǎng)物質(zhì)，刺激組織發(fā)育，從而對機體的營養(yǎng)狀態(tài)、生理功能、細胞感染、藥物效應(yīng)、毒性反應(yīng)、免疫反應(yīng)、腫瘤發(fā)生、衰老過程和突然的應(yīng)激反應(yīng)等產(chǎn)生作用；乳酸菌亦可通過調(diào)節(jié)腸道pH值，以激活胃蛋白酶，促進胃腸蠕動，減輕漲氣和促進肝臟功能[5]。

為了使各類芽孢益生菌劑、酵母制劑及乳酸菌劑在我國畜牧養(yǎng)殖業(yè)中得到更好的應(yīng)用[6-7]，全國不同地區(qū)對麻鴨腸道各個部位定殖菌數(shù)量和菌體萌發(fā)數(shù)量進行了檢測分析，以推斷定殖菌在麻鴨腸道中的萌發(fā)和生活狀態(tài)；但是，陜西漢中麻鴨腸道內(nèi)芽孢菌、酵母菌及乳酸菌數(shù)量及分布尚未見研究報道。為此，以陜西漢中麻鴨為試驗材料，通過對其腸道定殖菌生活狀態(tài)和分布進行研究，為各類益生菌在漢中麻鴨養(yǎng)殖中更好的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1試驗麻鴨購自陜西漢中漢臺區(qū)豐輝貿(mào)易市場。

1.1.2培養(yǎng)基LB培養(yǎng)基：胰蛋白胨10.0 g、酵母提取物 5.0 g、瓊脂15.0 g、氯化鈉10.0 g、H2O 1 L；玫瑰紅鈉培養(yǎng)基：蛋白胨5.0 g、瓊脂14.0 g、葡萄糖10.0 g、玫瑰紅鈉0013 3 g、MgSO4·7H2O 0.5 g、K2HPO4 1.0 g、H2O 1 L；MRS改良固體培養(yǎng)基：蛋白胨10.0 g、瓊脂20.0 g、葡萄糖20.0 g、牛肉膏10.0 g、酵母膏5.0 g、檸檬酸二胺2.0 g、乙酸鈉 5.0 g、吐溫80 1.0 mL、MgSO4·7H2O 0.58 g、K2HPO4 2.0 g、MnSO4·4H2O 0.25 g、CaCO3 2.0 g、H2O 1 L，pH值6.8。

1.1.3主要儀器與設(shè)備ZHWY-210 2C型恒溫振蕩器，上海智誠分析儀器制造有限公司生產(chǎn)；SW-CJ-1F型超凈工作臺，蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司生產(chǎn)；BJ100M型電子天平，上海精科天美科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)；LS-B50L型立式圓形壓力蒸氣滅菌器，上海醫(yī)用核子儀器廠生產(chǎn)；LRH-800-GS型人工氣候箱，韶關(guān)市明天環(huán)保儀器有限公司生產(chǎn)；DZKW-S-4型恒溫水浴鍋，惠州市新旭實業(yè)有限公司生產(chǎn)。

1.2試驗方法

1.2.1麻鴨腸道的處理將購買的麻鴨空腹處理3 d，宰殺并解剖，取出腸道，用75%乙醇清洗腸道表面，待用。

1.2.2芽孢菌、酵母菌、乳酸菌的數(shù)量測定將麻鴨待用腸道分為7段，其中包括十二指腸2段、小腸4段、盲腸1段；無菌手術(shù)刀剖開各段腸道，將腸道內(nèi)容物分別溶于100 mL已滅菌的生理鹽水中，攪拌均勻，為待測樣品[8]。取待測樣品 1.0 mL 分別于2支試管中，其中1支試管樣品經(jīng)75 ℃熱處理 20 min，另1支試管樣品不經(jīng)熱處理。用生理鹽水梯度稀釋10、100、1 000倍，各濃度取100 μL涂布于LB培養(yǎng)基、玫瑰紅鈉培養(yǎng)基、MRS固體培養(yǎng)基上，并做3個平行皿。芽孢菌于 37 ℃ 恒溫培養(yǎng)36 h，酵母菌于28 ℃恒溫培養(yǎng)48～ 72 h，乳酸菌于 37 ℃ 恒溫培養(yǎng)48～72 h，分別統(tǒng)計菌落數(shù)和計算菌體總數(shù)[9-10]。

1.2.3樣品活性菌體數(shù)量統(tǒng)計1 mL菌液中活性菌體數(shù)量的計算公式為：樣品活性菌體數(shù)量=（未熱處理樣品菌落數(shù)-熱處理樣品菌落數(shù)）×稀釋倍數(shù)×10。

2結(jié)果與分析endprint

2.1漢中麻鴨不同腸道區(qū)段定殖菌活性菌體數(shù)量

2.1.1芽孢菌在不同腸道區(qū)段活性菌體數(shù)量由表1可見，芽孢菌在漢中麻鴨腸道內(nèi)可以定殖，少數(shù)芽孢菌滯留在麻鴨十二指腸處，進入小腸后開始萌發(fā)，并進行生長繁殖，在小腸后段達到最大值，菌體數(shù)達6.3×104 CFU/mL，而后重新轉(zhuǎn)入休眠體的芽孢狀態(tài)，完成一個生活周期。小腸后段即盲腸附近是芽孢菌主要生長繁殖和滯留的場所。

2.1.2酵母菌在不同腸道區(qū)段活性菌體數(shù)量由表2可見，酵母菌在漢中麻鴨腸道內(nèi)雖可定殖，但菌體數(shù)量較少，分布范圍較窄，在小腸后段才開始萌發(fā)、繁殖；在盲腸處菌體數(shù)量達到最大值，為7.6×104 CFU/mL。盲腸附近是酵母菌生長繁殖和滯留的場所。

2.1.3乳酸菌在不同腸道區(qū)段活性菌體數(shù)量由表3可見，乳酸菌在漢中麻鴨腸道內(nèi)可以定殖，十二指腸前段即可見乳酸菌菌落；十二指腸后段乳酸菌菌體數(shù)達到最大，為 8.6×104 CFU/mL；至小腸中段時乳酸菌落幾乎不能檢出。十二指腸后段及小腸前段附近是乳酸菌主要生長繁殖和滯留的場所。

2.2漢中麻鴨腸道中定殖菌的分布

以漢中麻鴨腸道中芽孢菌、酵母菌、乳酸菌菌體數(shù)量為縱坐標，以活性菌體在不同腸道區(qū)段的分布部位為橫坐標作圖（圖1）。芽孢菌耐酸堿，生長最適pH值為6.0左右，能分泌高活性的胞外產(chǎn)物，在胃液中仍保持活性，以孢子狀態(tài)進入消化道，在小腸內(nèi)開始萌發(fā)，故芽孢菌主要分布和定殖在遠離胃端的小腸中、后段。酵母菌多分布在土壤、水和動植物體表面，僅零星分布在動物腸道內(nèi)，因其富含蛋白質(zhì)、核酸、維生素和多種酶，具有促進對飼料的消化吸收功能，在漢中麻鴨中雖有酵母菌菌落檢出，但分布和定殖在小腸后段和盲腸。乳酸菌生長的最適pH值為4.0左右，在動物腸道內(nèi)能通過生物拮抗，阻止和抑制致病菌侵入腸道，還可提高食物消化率，因此，在與胃部相連的十二指腸即能檢出乳酸菌菌落，乳酸菌主要分布和定殖在十二指腸后段和小腸前段。

3小結(jié)與討論

采用梯度稀釋和組織培養(yǎng)方法研究陜西漢中麻鴨腸道中定殖菌的生活狀態(tài)和分布，研究結(jié)果表明，小腸后段芽孢菌數(shù)量達最大值6.3×104 CFU/mL，盲腸酵母菌數(shù)量達最大值 7.6×104 CFU/mL，十二指腸后段乳酸菌數(shù)量達最大值 8.6×104 CFU/mL。

芽孢菌劑、酵母菌劑及乳酸菌劑作為動物益生菌或腸道競爭抑制劑，除了可以改善、調(diào)整腸道菌群外，還可抑制有害細菌在腸道內(nèi)膜的吸附和定殖，飼喂動物日糧中添加一定比例，可明顯降低料肉比。

芽孢菌、酵母菌及乳酸菌產(chǎn)生多種消化酶，是提高動物生產(chǎn)性能的一個重要體現(xiàn)，它可以幫助動物消化吸收營養(yǎng)物質(zhì)，具有較強的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性，同時，還具有降解飼料中復(fù)雜碳水化合物的酶，如果膠酶、葡聚糖酶、纖維素酶等，這些酶能夠破壞植物飼料細胞的細胞壁，促使細胞的營養(yǎng)物質(zhì)釋放出來，并能消除飼料中的抗營養(yǎng)因子，減少抗營養(yǎng)因子對動物消化利用的障礙。

參考文獻：

[1]辭海編輯委員會. 辭海：生物分冊[M]. 上海：上海辭書出版社，1999：524.

[2]姚茹，王智勇，王廣軍，等. 飼料中添加芽孢桿菌對草魚生長和水質(zhì)的影響[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（4）：214-216.

[3]Sekirov I. Gut microbiota in health and disease[J]. Physiological Reviews，2010，90（3）：859-904.

[4]Wong S，Rawls J F. Intestinal microbiota composition in fishes is influenced by host ecology and environment[J]. Molecular Ecology，2012，21（13）：3100-3102.

[5]Tam N K，Uyen N Q，Hong H A，et al. The intestinal life cycle of Bacillus subtilis and close relatives[J]. Journal of Bacteriology，2006，188（7）：2692-2700.

[6]陳瓊. 雞源益生菌的分離、篩選、鑒定與特性研究[D]. 廣州：華南理工大學(xué)，2004：1-64.

[7]蔡雁，郝勃，喻子牛. 抗動物病原菌芽孢桿菌的篩選、初步鑒定和抗菌活性[J]. 微生物學(xué)雜志，2005，25（5）：19-22.

[8]方祥，胡文鋒，張輝華，等. 乳酸菌的分離、鑒定及其生長特性[J]. 中國微生態(tài)學(xué)雜志，2000，12（5）：262-264.

[9]史懷平. 朱鹮消化道正常菌群的分離鑒定及微生態(tài)制劑的研究[D]. 楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2005：1-54.

[10]賴國旗，韋克，張德純，等. 健康動物腸道正常菌群的分離與鑒定[J]. 中國微生態(tài)學(xué)雜志，1997，9（2）：23-25.endprint

2.1漢中麻鴨不同腸道區(qū)段定殖菌活性菌體數(shù)量

2.1.1芽孢菌在不同腸道區(qū)段活性菌體數(shù)量由表1可見，芽孢菌在漢中麻鴨腸道內(nèi)可以定殖，少數(shù)芽孢菌滯留在麻鴨十二指腸處，進入小腸后開始萌發(fā)，并進行生長繁殖，在小腸后段達到最大值，菌體數(shù)達6.3×104 CFU/mL，而后重新轉(zhuǎn)入休眠體的芽孢狀態(tài)，完成一個生活周期。小腸后段即盲腸附近是芽孢菌主要生長繁殖和滯留的場所。

2.1.2酵母菌在不同腸道區(qū)段活性菌體數(shù)量由表2可見，酵母菌在漢中麻鴨腸道內(nèi)雖可定殖，但菌體數(shù)量較少，分布范圍較窄，在小腸后段才開始萌發(fā)、繁殖；在盲腸處菌體數(shù)量達到最大值，為7.6×104 CFU/mL。盲腸附近是酵母菌生長繁殖和滯留的場所。

2.1.3乳酸菌在不同腸道區(qū)段活性菌體數(shù)量由表3可見，乳酸菌在漢中麻鴨腸道內(nèi)可以定殖，十二指腸前段即可見乳酸菌菌落；十二指腸后段乳酸菌菌體數(shù)達到最大，為 8.6×104 CFU/mL；至小腸中段時乳酸菌落幾乎不能檢出。十二指腸后段及小腸前段附近是乳酸菌主要生長繁殖和滯留的場所。

2.2漢中麻鴨腸道中定殖菌的分布

以漢中麻鴨腸道中芽孢菌、酵母菌、乳酸菌菌體數(shù)量為縱坐標，以活性菌體在不同腸道區(qū)段的分布部位為橫坐標作圖（圖1）。芽孢菌耐酸堿，生長最適pH值為6.0左右，能分泌高活性的胞外產(chǎn)物，在胃液中仍保持活性，以孢子狀態(tài)進入消化道，在小腸內(nèi)開始萌發(fā)，故芽孢菌主要分布和定殖在遠離胃端的小腸中、后段。酵母菌多分布在土壤、水和動植物體表面，僅零星分布在動物腸道內(nèi)，因其富含蛋白質(zhì)、核酸、維生素和多種酶，具有促進對飼料的消化吸收功能，在漢中麻鴨中雖有酵母菌菌落檢出，但分布和定殖在小腸后段和盲腸。乳酸菌生長的最適pH值為4.0左右，在動物腸道內(nèi)能通過生物拮抗，阻止和抑制致病菌侵入腸道，還可提高食物消化率，因此，在與胃部相連的十二指腸即能檢出乳酸菌菌落，乳酸菌主要分布和定殖在十二指腸后段和小腸前段。

3小結(jié)與討論

采用梯度稀釋和組織培養(yǎng)方法研究陜西漢中麻鴨腸道中定殖菌的生活狀態(tài)和分布，研究結(jié)果表明，小腸后段芽孢菌數(shù)量達最大值6.3×104 CFU/mL，盲腸酵母菌數(shù)量達最大值 7.6×104 CFU/mL，十二指腸后段乳酸菌數(shù)量達最大值 8.6×104 CFU/mL。

芽孢菌劑、酵母菌劑及乳酸菌劑作為動物益生菌或腸道競爭抑制劑，除了可以改善、調(diào)整腸道菌群外，還可抑制有害細菌在腸道內(nèi)膜的吸附和定殖，飼喂動物日糧中添加一定比例，可明顯降低料肉比。

芽孢菌、酵母菌及乳酸菌產(chǎn)生多種消化酶，是提高動物生產(chǎn)性能的一個重要體現(xiàn)，它可以幫助動物消化吸收營養(yǎng)物質(zhì)，具有較強的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性，同時，還具有降解飼料中復(fù)雜碳水化合物的酶，如果膠酶、葡聚糖酶、纖維素酶等，這些酶能夠破壞植物飼料細胞的細胞壁，促使細胞的營養(yǎng)物質(zhì)釋放出來，并能消除飼料中的抗營養(yǎng)因子，減少抗營養(yǎng)因子對動物消化利用的障礙。

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[9]史懷平. 朱鹮消化道正常菌群的分離鑒定及微生態(tài)制劑的研究[D]. 楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2005：1-54.

[10]賴國旗，韋克，張德純，等. 健康動物腸道正常菌群的分離與鑒定[J]. 中國微生態(tài)學(xué)雜志，1997，9（2）：23-25.endprint

2.1漢中麻鴨不同腸道區(qū)段定殖菌活性菌體數(shù)量

2.1.1芽孢菌在不同腸道區(qū)段活性菌體數(shù)量由表1可見，芽孢菌在漢中麻鴨腸道內(nèi)可以定殖，少數(shù)芽孢菌滯留在麻鴨十二指腸處，進入小腸后開始萌發(fā)，并進行生長繁殖，在小腸后段達到最大值，菌體數(shù)達6.3×104 CFU/mL，而后重新轉(zhuǎn)入休眠體的芽孢狀態(tài)，完成一個生活周期。小腸后段即盲腸附近是芽孢菌主要生長繁殖和滯留的場所。

2.1.2酵母菌在不同腸道區(qū)段活性菌體數(shù)量由表2可見，酵母菌在漢中麻鴨腸道內(nèi)雖可定殖，但菌體數(shù)量較少，分布范圍較窄，在小腸后段才開始萌發(fā)、繁殖；在盲腸處菌體數(shù)量達到最大值，為7.6×104 CFU/mL。盲腸附近是酵母菌生長繁殖和滯留的場所。

2.1.3乳酸菌在不同腸道區(qū)段活性菌體數(shù)量由表3可見，乳酸菌在漢中麻鴨腸道內(nèi)可以定殖，十二指腸前段即可見乳酸菌菌落；十二指腸后段乳酸菌菌體數(shù)達到最大，為 8.6×104 CFU/mL；至小腸中段時乳酸菌落幾乎不能檢出。十二指腸后段及小腸前段附近是乳酸菌主要生長繁殖和滯留的場所。

2.2漢中麻鴨腸道中定殖菌的分布

以漢中麻鴨腸道中芽孢菌、酵母菌、乳酸菌菌體數(shù)量為縱坐標，以活性菌體在不同腸道區(qū)段的分布部位為橫坐標作圖（圖1）。芽孢菌耐酸堿，生長最適pH值為6.0左右，能分泌高活性的胞外產(chǎn)物，在胃液中仍保持活性，以孢子狀態(tài)進入消化道，在小腸內(nèi)開始萌發(fā)，故芽孢菌主要分布和定殖在遠離胃端的小腸中、后段。酵母菌多分布在土壤、水和動植物體表面，僅零星分布在動物腸道內(nèi)，因其富含蛋白質(zhì)、核酸、維生素和多種酶，具有促進對飼料的消化吸收功能，在漢中麻鴨中雖有酵母菌菌落檢出，但分布和定殖在小腸后段和盲腸。乳酸菌生長的最適pH值為4.0左右，在動物腸道內(nèi)能通過生物拮抗，阻止和抑制致病菌侵入腸道，還可提高食物消化率，因此，在與胃部相連的十二指腸即能檢出乳酸菌菌落，乳酸菌主要分布和定殖在十二指腸后段和小腸前段。

3小結(jié)與討論

采用梯度稀釋和組織培養(yǎng)方法研究陜西漢中麻鴨腸道中定殖菌的生活狀態(tài)和分布，研究結(jié)果表明，小腸后段芽孢菌數(shù)量達最大值6.3×104 CFU/mL，盲腸酵母菌數(shù)量達最大值 7.6×104 CFU/mL，十二指腸后段乳酸菌數(shù)量達最大值 8.6×104 CFU/mL。

芽孢菌劑、酵母菌劑及乳酸菌劑作為動物益生菌或腸道競爭抑制劑，除了可以改善、調(diào)整腸道菌群外，還可抑制有害細菌在腸道內(nèi)膜的吸附和定殖，飼喂動物日糧中添加一定比例，可明顯降低料肉比。

芽孢菌、酵母菌及乳酸菌產(chǎn)生多種消化酶，是提高動物生產(chǎn)性能的一個重要體現(xiàn)，它可以幫助動物消化吸收營養(yǎng)物質(zhì)，具有較強的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性，同時，還具有降解飼料中復(fù)雜碳水化合物的酶，如果膠酶、葡聚糖酶、纖維素酶等，這些酶能夠破壞植物飼料細胞的細胞壁，促使細胞的營養(yǎng)物質(zhì)釋放出來，并能消除飼料中的抗營養(yǎng)因子，減少抗營養(yǎng)因子對動物消化利用的障礙。

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[10]賴國旗，韋克，張德純，等. 健康動物腸道正常菌群的分離與鑒定[J]. 中國微生態(tài)學(xué)雜志，1997，9（2）：23-25.endprint