ROS/PKC/p38 MAPK途徑在山茱萸多糖抑制心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的作用*

來麗娜， 宋麗華， 張曉京， 張曉一， 雷靜文， 劉 芳， 郭春花， 宋曉亮

(長治醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系，山西 長治 046000)

ROS/PKC/p38 MAPK途徑在山茱萸多糖抑制心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的作用*

來麗娜， 宋麗華， 張曉京， 張曉一， 雷靜文， 劉 芳， 郭春花， 宋曉亮△

(長治醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系，山西 長治 046000)

目的： 觀察山茱萸多糖(polysaccharide fromFructuscorni，PFC)對(duì)缺氧/復(fù)氧(hypoxia/reoxygenation，H/R)損傷心肌細(xì)胞的保護(hù)作用，并探討其對(duì)ROS/PKC/p38 MAPK途徑的影響。方法: 分離原代乳鼠心肌細(xì)胞，建立H/R模型，細(xì)胞分為7組：正常對(duì)照組(N組)、缺氧/復(fù)氧組(H/R組)、缺氧/復(fù)氧+PFC(終濃度20 mg/L、100 mg/L和200 mg/L)預(yù)處理組、缺氧/復(fù)氧+PFC(100 mg/L)預(yù)處理+蛋白激酶C特異性阻斷劑chelerythrine(1 μmol/L)組及缺氧/復(fù)氧+PFC(100 mg/L)預(yù)處理+p38 MAPK特異性阻斷劑SB203580(10 μmol/L)組。倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和自發(fā)搏動(dòng)頻率，Hoechst 33258染色觀察細(xì)胞凋亡率，酶標(biāo)儀測定ROS含量、SOD活性及LDH漏出量，免疫印跡法檢測PKC、p-p38 MAPK和HSP70的蛋白水平。結(jié)果: H/R組細(xì)胞活力下降，搏動(dòng)頻率減慢，細(xì)胞ROS含量、LDH漏出量、細(xì)胞凋亡率及p-p38 MAPK的水平均較N組顯著增加(P<0.01)。經(jīng)PFC預(yù)處理后，細(xì)胞搏動(dòng)頻率、SOD活性及PKC、HSP70的水平較H/R 組顯著增加(P<0.05，)，p-p38 MAPK的水平和細(xì)胞凋亡率均減少(P<0.05)，而PFC的保護(hù)作用能被chelerythrine或SB203580抑制。結(jié)論: 山茱萸多糖可抑制心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷，其作用可能與增加SOD活性、抑制ROS產(chǎn)生、激活PKC并抑制p38MAPK的過度激活有關(guān)。

山茱萸； 多糖； 缺氧/復(fù)氧； 心肌細(xì)胞； 活性氧

許多研究表明蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)激活是缺血預(yù)處理中細(xì)胞保護(hù)信號(hào)傳導(dǎo)的中心環(huán)節(jié)[1]，絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases，MAPKs)可能也參與了缺血預(yù)處理對(duì)心肌的保護(hù)作用[2]。心肌缺血再灌注可誘發(fā)細(xì)胞內(nèi)活性氧(reactive oxygen species，ROS)產(chǎn)生增多，氧化應(yīng)激水平升高，發(fā)生細(xì)胞損傷[3]。但有研究表明，氧化應(yīng)激也可激活PKC和MAPKs信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路[4]。可見PKC和MAPKs信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活在不同情況下可能會(huì)產(chǎn)生不同的作用。山茱萸多糖(polysaccharide fromFructuscorni，PFC)有強(qiáng)大的抗氧化能力[5]。我們前期研究也證實(shí)PFC可以抑制心肌缺血再灌注損傷，其機(jī)制與顯著的抗氧化性有關(guān)。本研究分離原代乳鼠心肌細(xì)胞，建立缺氧/復(fù)氧(hypoxia/reoxygenation，H/R)模型模擬在體心肌缺血再灌注(ischemia/reperfusion，I/R)的病變過程，并選用特異性通路抑制劑，從細(xì)胞水平觀察PFC對(duì)心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧損傷的作用，探討其對(duì)ROS/PKC/p38MAPK途徑的影響。

材 料 和 方 法

1 動(dòng)物

清潔級(jí)SD大鼠，出生1 d之內(nèi)，雌雄不限。

2 主要試劑

山茱萸多糖由本實(shí)驗(yàn)室自制，經(jīng)硫酸-苯酚法測定其多糖含量為81%。高糖DMEM培養(yǎng)基購自Gibco；胎牛血清購自杭州四季青生物有限公司；所用Ⅰ抗均購自Abcam；chelerythrine chloride和SB203580購自LC Laboratories；Western blotting所用相關(guān)試劑和Hoechst 33258均購自碧云天生物技術(shù)有限公司；ROS、SOD和LDH測定試劑盒購自南京建成生物工程研究所；厭氧產(chǎn)氣袋購自上海新睿生物科技有限公司。

3 方 法

3.1 原代心肌細(xì)胞的分離、培養(yǎng)[6]應(yīng)用胰蛋白酶和Ⅱ型膠原酶分離心肌組織，采用差速貼壁法，去除先貼壁的非心肌細(xì)胞，將尚未貼壁的心肌細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度為5.5×108/L，加入終濃度為0.1 mmol/L的BrdU，移入12孔培養(yǎng)板中培養(yǎng)48 h后換液以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

3.2 心肌細(xì)胞純度鑒定 取培養(yǎng)72 h心肌細(xì)胞爬片，PBS沖洗3次，-20 ℃冰丙酮固定20 min，α-actinⅠ抗37 ℃孵育3 h，辣根過氧化物酶標(biāo)記的Ⅱ抗孵育1 h，DAB顯色。

3.3 H/R損傷模型的建立及分組 將心肌細(xì)胞分為7組，每組3個(gè)復(fù)孔：①正常對(duì)照組(normal，N)；② 缺氧/復(fù)氧組(H/R)：在密閉的小空間內(nèi)放入?yún)捬醍a(chǎn)氣袋，待指示劑變色后開始計(jì)時(shí)，缺氧1 h，95% O2、5% CO2復(fù)氧2 h；③～⑤ PFC預(yù)處理組：提前24 h各孔加入PFC，其終濃度分別為20、100和200 mg/L(依次命名為PFC1+H/R、PFC2+H/R和PFC3+H/R組)，然后進(jìn)行第②組的步驟；⑥ 在PFC(100 mg/L)預(yù)處理前用chelerythrine(1 μmol/L)與細(xì)胞孵育30 min后，再進(jìn)行PFC預(yù)處理操作，即為CHE+PFC2+H/R組；⑦ 在PFC(100 mg/L)預(yù)處理前用SB203580(10 μmol/L)與細(xì)胞孵育30 min后，再進(jìn)行PFC預(yù)處理操作，即為SB+PFC2+H/R組。

3.4 心肌細(xì)胞活力和凋亡率 心肌細(xì)胞培養(yǎng)72 h，每孔任意5個(gè)視野鏡下計(jì)數(shù)細(xì)胞的搏動(dòng)頻率。4%多聚甲醛固定細(xì)胞爬片30 min，PBS清洗，加Hoechst 33258(1 mg/L)37℃孵育20 min，封片，熒光顯微鏡觀察細(xì)胞凋亡情況，以每個(gè)視野凋亡細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)×100%為凋亡率。

3.5 LDH漏出量、ROS含量及SOD活性 復(fù)氧結(jié)束后，吸取細(xì)胞上清液羥胺法測定SOD活性，微板法測定LDH漏出量，裂解細(xì)胞，化學(xué)熒光法測定ROS含量，操作步驟嚴(yán)格按說明書進(jìn)行，以上指標(biāo)均在多功能酶標(biāo)儀上(TECAN)檢測。

3.6 Western blotting分析PKC、p-p38和HSP70的蛋白表達(dá)水平 冰上裂解細(xì)胞，蛋白定量，蛋白電泳后轉(zhuǎn)移到NC膜上，5%脫脂奶粉封閉1 h后加入PKC、p-p38、HSP70Ⅰ抗，4 ℃過夜，次日與堿性磷酸酶偶聯(lián)的Ⅱ抗(Promega)雜交，Western blue(Promega)顯色。采用Image-Pro Plus 7.0圖像分析軟件測定目的蛋白條帶的灰度值，計(jì)算與內(nèi)參照GAPDH條帶灰度值的比值。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。數(shù)據(jù)均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，組間數(shù)據(jù)采用單因素方差分析，以P<0. 05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 原代心肌細(xì)胞的形態(tài)及純度鑒定

培養(yǎng)6 h后細(xì)胞開始貼壁，24 h后已有心肌細(xì)胞伸出偽足，形態(tài)多樣，培養(yǎng)72 h后，細(xì)胞成簇生長，出現(xiàn)明顯節(jié)律性搏動(dòng)。細(xì)胞爬片α-actin免疫組化染色陽性細(xì)胞達(dá)95%以上，見圖 1。

Figure 1.Culture and identification of neonatal rat primary cardiomyocytes. A: primary cardiomyocytes cultured for 24 h (×200); B: primary cardiomyocytes cultured for 72 h (×200); C: identification of cardiomyocytes by immunohistochemistry for the cardiac-specific α-actin (×400).

圖1 原代培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞的培養(yǎng)及鑒定

2 心肌細(xì)胞搏動(dòng)頻率

倒置顯微鏡下觀察N組細(xì)胞成簇生長，折光性良好，搏動(dòng)明顯且規(guī)律；H/R組細(xì)胞折光性下降，偽足縮短或消失，與N組比較搏動(dòng)頻率明顯下降(P<0.01)； 給予PFC(20、100和200 mg/L)后，各組細(xì)胞折光性良好，搏動(dòng)有力且規(guī)律，搏動(dòng)頻率與H/R組相比有顯著差異(P<0.01)，且有一定的劑量依賴性；CHE+PFC2+H/R組細(xì)胞形態(tài)與H/R組相似，搏動(dòng)頻率與H/R組接近；SB+PFC2+H/R組細(xì)胞生長狀態(tài)與CHE+PFC2+H/R組相似，搏動(dòng)頻率明顯減慢，與H/R組相比無顯著差異(P>0.05)，見表1。

3 細(xì)胞凋亡百分率

經(jīng)Hoechst 33258染色，熒光顯微鏡下N組細(xì)胞呈均勻彌散的藍(lán)色熒光，凋亡率僅為2.4%，而H/R組細(xì)胞熒光顏色不均勻，凋亡細(xì)胞出現(xiàn)明顯致密的強(qiáng)藍(lán)色熒光且呈塊狀聚積，其發(fā)生率達(dá)到38.3%，較N組明顯增高(P<0.01)；分別以濃度為20 mg/L、100 mg/L和200 mg/L的PFC預(yù)處理細(xì)胞后，細(xì)胞凋亡率分別為22.1%、10.7%和10.2%，與H/R 組相比凋亡率顯著降低(P<0.05)；而CHE+PFC2+H/R組與SB+PFC2+H/R組細(xì)胞凋亡率較PFC各組明顯升高(P<0.05)，與H/R組比較無顯著差異(P>0.05)，見圖2、表1。

表1 細(xì)胞搏動(dòng)頻率及凋亡率的比較

Table 1.Comparison of apoptotic rates and beating frequencies in the rat cardiomyocytes with different treatments (Mean±SD.n=6)

GroupBeatingfrequency(min-1)Apoptoticrate(%)N96.0±6.62.4±0.6H/R27.7±5.1**38.3±6.8**PFC1+H/R82.5±6.3*##22.1±2.6**#PFC2+H/R94.4±7.4##10.7±2.4*##PFC3+H/R95.6±8.8##10.2±3.4*##CHE+PFC2+H/R25.3±5.3**30.9±8.9**SB+PFC2+H/R31.4±6.7**35.1±7.5**

TableP<0.05,**P<0.01vsN group;#P<0.05,##P<0.01vsH/R group.

Figure 2.Hoechst 33258 staining of neonatal rat cardiomyocytes (×100). A: normal group; B: H/R group; C: PFC1+H/R group; D: PFC2+H/R group; E: PFC3+H/R group; F: CHE+PFC2+H/R group; G: SB+PFC2+H/R group.

圖2 乳鼠心肌細(xì)胞Hoechst 33258染色

4 LDH漏出量和SOD活力

N組細(xì)胞生長狀態(tài)良好，細(xì)胞培養(yǎng)液LDH活性為404.32 U/L；H/R組細(xì)胞經(jīng)過缺氧/復(fù)氧后膜通透性增高，培養(yǎng)液LDH活性顯著升高至924.01 U/L，與N組比較差異顯著(P<0.01)；以不同濃度PFC預(yù)處理后，其細(xì)胞培養(yǎng)液LDH活性均較H/R組降低(P<0.01)，且呈劑量依賴性；而CHE+PFC2+H/R組與SB+PFC2+H/R組LDH漏出量較PFC各組明顯升高(P<0.01)，與H/R組比較無顯著差異(P>0.05)。N組細(xì)胞培養(yǎng)液SOD活性為35.13×103U/L；H/R組培養(yǎng)液SOD活性顯著下降至17.45×103U/L，與N組比較差異顯著(P<0.01)；而PFC各組細(xì)胞培養(yǎng)液SOD活性均較H/R組升高(P<0.05)；CHE+PFC2+H/R組與SB+PFC2+H/R組SOD活性均較PFC各組顯著下降(P<0.01)，與H/R組比較無顯著差異(P>0.05)，見表2。

表2 各組LDH漏出量和SOD活力的比較

Table 2.Comparison of LDH leakage and SOD activity in the rat cardiomyocytes with different treatments (Mean±SD.n=6)

GroupLDH(U/L)SOD(×103U/L)N404.32±22.3635.13±6.99H/R924.01±35.33**17.45±5.55**PFC1+H/R708.86±34.56**#25.29±4.65*#PFC2+H/R588.45±29.65**##33.35±6.04##PFC3+H/R583.67±28.31**##33.58±7.48##CHE+PFC2+H/R899.90±45.85**20.15±4.56**SB+PFC2+H/R901.02±39.16**19.21±5.91**

TableP<0.05,**P<0.01vsN group;#P<0.05,##P<0.01vsH/R group.

5 細(xì)胞ROS釋放量

把N組的熒光強(qiáng)度定為1，與N組相比，H/R組細(xì)胞內(nèi)ROS 釋放量增加(P<0.01)；以不同濃度PFC預(yù)處理后，其細(xì)胞裂解液中的熒光強(qiáng)度較H/R組顯著下降(P<0.05)，但仍高于N組(P<0.05)；而CHE+PFC2+H/R組與SB+PFC2+H/R組細(xì)胞內(nèi)ROS 釋放量較PFC各組明顯升高(P<0.01)，與H/R組比較無顯著差異(P>0.05)，見圖3。

Figure 3.ROS content in the rat cardiomyocytes with different treatments. Mean±SD.n=6.*P<0.05,**P<0.01vsN group;#P<0.05,##P<0.01vsH/R group.

圖3 心肌細(xì)胞的ROS含量

6 心肌細(xì)胞PKC、p-p38 MAPK和HSP70蛋白表達(dá)水平的變化

H/R損傷后，心肌細(xì)胞的HSP70和p-p38 MAPK均升高，與正常組相比差異顯著(P<0.01)，而PKC蛋白水平與正常組比較未見升高(P>0.05)；應(yīng)用PFC(100 mg/L)后，HSP70和PKC的蛋白水平顯著升高，與H/R組比較差異顯著(P<0.01)，而p-p38 MAPK 較H/R組的水平下降(P<0.05)。CHE+PFC2+H/R組和SB+PFC2+H/R組的HSP70與PFC2+H/R組相比顯著下降，CHE+PFC2+H/R組的PKC蛋白水平較PFC2+H/R組顯著下降(P<0.01)，p38磷酸化水平也有降低(P<0.05)，表明PKC抑制劑chelerythrine對(duì)磷酸化p38表達(dá)水平也有影響。SB+PFC2+H/R組的HSP70和磷酸化p38水平較PFC2+H/R組顯著下降(P<0.01)，而PKC水平降低不明顯(P>0.05)，表明p38抑制劑SB203580對(duì)PKC蛋白表達(dá)的影響不明顯，見圖4。

討 論

心肌細(xì)胞缺氧導(dǎo)致能量代謝障礙，復(fù)氧后，氧自由基隨著大量氧的涌入產(chǎn)生增多，造成細(xì)胞損傷[7-8]。結(jié)合預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，本研究選擇PFC的實(shí)驗(yàn)濃度為20、100 和200 mg/L。實(shí)驗(yàn)以細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH漏出量作為心肌細(xì)胞損傷的指標(biāo)。結(jié)果顯示，H/R組細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH漏出量明顯增加，而PFC各劑量組均可減少H/R后培養(yǎng)液中LDH漏出量，尤以100 和200 mg/L PFC組顯著，表明PFC各劑量組均可減輕細(xì)胞膜的損傷。

Figure 4.The protein levels of PKC, p-p38 and HSP70 in the rat cardiomyocytes detected by Western blotting. Mean±SD.n=3.*P<0.05,**P<0.01vsN group;#P<0.05,##P<0.01vsH/R group.

圖4 心肌細(xì)胞PKC、p-p38和HSP70蛋白的表達(dá)

SOD可清除氧自由基，其值高低反映了機(jī)體清除氧自由基的能力[9]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，H/R組ROS含量明顯增高，SOD的活力降低，心肌細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化，活力下降，而PFC各劑量組均可明顯增強(qiáng)SOD的活力，降低細(xì)胞ROS量，提高細(xì)胞活力，也以100 和200 mg/L PFC組顯著，說明PFC可通過增強(qiáng)細(xì)胞清除氧自由基的能力發(fā)揮對(duì)心肌細(xì)胞H/R損傷的保護(hù)作用。細(xì)胞凋亡也是心肌細(xì)胞H/R損傷的一種表現(xiàn)[10]，實(shí)驗(yàn)中用Hoechst 33258染色細(xì)胞，熒光顯微鏡下測定表明PFC各劑量組均可降低缺氧復(fù)氧后心肌細(xì)胞凋亡率。

HSP70可參與胞內(nèi)蛋白質(zhì)的折疊和轉(zhuǎn)運(yùn)以維持機(jī)體自身的穩(wěn)定性，使細(xì)胞在應(yīng)激狀態(tài)下能進(jìn)行正常的生化反應(yīng)和代謝[11]，屬應(yīng)激狀態(tài)下產(chǎn)生的一種內(nèi)源性保護(hù)蛋白。實(shí)驗(yàn)中可以看到H/R組HSP70高于N組，濃度為100 mg/L PFC預(yù)處理后HSP70的表達(dá)量高于H/R組，說明PFC可以誘導(dǎo)HSP70的產(chǎn)生從而使心肌細(xì)胞耐受缺氧復(fù)氧損傷。

誘發(fā)細(xì)胞內(nèi)ROS產(chǎn)生增多，致使氧化應(yīng)激水平升高是缺血再灌注損傷的重要機(jī)制之一[12]。ROS作為信號(hào)分子可以影響多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，如蛋白激酶C通路、JAK/STAT通路、MAPKs等信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。它既可產(chǎn)生細(xì)胞損傷作用，同時(shí)也可誘導(dǎo)內(nèi)源性抗氧化酶、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶、HSP70等的表達(dá)，產(chǎn)生抗損傷效應(yīng)[13]，可見ROS的作用是雙向的。有研究表明ROS可直接激活p38 MAPK通路，參與靶細(xì)胞損傷[14]。實(shí)驗(yàn)中可以看到H/R組ROS明顯增多，PKC表達(dá)較正常組沒有明顯變化，而p-p38表達(dá)顯著增多，說明大量的ROS可以使p38過度激活，而PFC預(yù)處理可減少ROS的產(chǎn)生，同時(shí)PFC預(yù)處理組PKC的表達(dá)較H/R組增高，而p-p38的表達(dá)較H/R組下降，說明PFC可上調(diào)PKC的表達(dá)，抑制過強(qiáng)的氧化應(yīng)激，減輕p-p38的過度激活。有研究認(rèn)為MAPKs和HSPs等有可能作為PKC的底物介導(dǎo)了心臟缺血預(yù)處理的保護(hù)作用[4]。本研究實(shí)驗(yàn)還觀察到應(yīng)用PKC抑制劑后p38的表達(dá)下調(diào)，可見抑制PKC可以阻斷p38的表達(dá)，同時(shí)PFC的保護(hù)作用消失，而應(yīng)用特異性的p38 MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路阻斷劑SB203580預(yù)處理后，PKC蛋白水平變化不大，也支持p38位于PKC的下游。然而阻斷PKC并不能完全阻斷p38，說明PKC可能只是p38上游信號(hào)分子之一。實(shí)驗(yàn)中采用chelerythrine阻斷PKC活化及SB203580阻斷p38磷酸化，發(fā)現(xiàn)PFC的保護(hù)作用可被抵消，提示PKC及p38參與了PFC對(duì)H/R的保護(hù)作用。

綜上所述，PFC的抗心肌細(xì)胞H/R損傷作用的機(jī)制涉及PKC/p38 MAPK途徑，其可通過增加SOD活性，降低細(xì)胞內(nèi)ROS含量，上調(diào)PKC 蛋白表達(dá)水平，阻止p38 MAPK的過度激活，誘導(dǎo)HSP70表達(dá)來發(fā)揮保護(hù)作用。

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Role of ROS/PKC/p38 MAPK pathway in protective effects of polysaccharide fromFructuscornion rat cardiomyocytes against hypoxia-reoxygenation injury

LAI Li-na, SONG Li-hua, ZHANG Xiao-jing, ZHANG Xiao-yi, LEI Jing-wen, LIU Fang, GUO Chun-hua, SONG Xiao-liang

(DepartmentofPharmacology,ChangzhiMedicalCollege,Changzhi046000,China.E-mail:songxiaoliang62@sina.com)

AIM: To investigate the effect of polysaccharide fromFructuscorni(PFC) on cardiomyocytes against hypoxia/reoxygenation (H/R) injury and its possible relationship with ROS/PKC/p38 MAPK pathway.METHODS: Primary cardiomyocytes were isolated from neonatal SD rats and randomly divided into normal group, H/R group, PFC (20 mg/L, 100 mg/L and 200 mg/L) preconditioning+H/R groups, chelerythrine+PFC (100 mg/L)+H/R group and SB203580+PFC (100 mg/L)+H/R group. The cell viability was measured by inverted microscopic observation. Apoptosis in the cardiomyocytes was detected by Hoechst 33258 staining and fluorescence microscopy. The levels of lactate dehydrogenase (LDH) and superoxide dismutase (SOD) in the cell culture supernatants, and the reactive oxygen species (ROS) in the cells were also measured by microplate reader. The protein levels of PKC, p-p38 MAPK and HSP70 in the cells were detected by Western blotting.RESULTS: Compared with normal group, the cell viability and beating frequency were decreased in H/R group. LDH and ROS contents, apoptotic rate and p-p38 MAPK level increased significantly (P<0.01). Compared with H/R group, PFC preconditioning increased beating frequency, SOD activity and the protein level of PKC and HSP70, and decreased ROS production， the protein level of p-p38 MAPK and cell apoptotic rate. However, the effect of PFC was inhibited by chelerythrine or SB203580.CONCLUSION: PFC may protect cardiomyocytes from hypoxia/reoxygenation injury. Its mechanism is possibly involved in the inhibition of ROS via increasing the activity of SOD and the activation of PKC, and suppression of excessive activation of p38 MAPK.

Fructuscorni; Polysaccharide; Hypoxia/reoxygenation; Cardiomyocytes； Reactive oxygen species

1000- 4718(2014)12- 2201- 05

2014- 08- 14

2014- 09- 11

山西省高校重點(diǎn)學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目(No.20131007)；山西省高等學(xué)?！?31”領(lǐng)軍人才工程項(xiàng)目(No.604)

R285.5

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2014.12.015

△通訊作者 Tel: 0355-3151036; E-mail： songxiaoliang62@sina.com