牡蠣降脂膠囊調(diào)血脂作用及其機(jī)制研究

鄒賢剛 ，付書婕 ，黃興振，巫玲玲，蔣偉哲

（1．北海藍(lán)海洋生物藥業(yè)有限責(zé)任公司，廣西 北海 536000； 2．廣西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，廣西 南寧 530021）

血脂異常是心血管疾病的重要危險(xiǎn)因素，高脂血癥的流行病學(xué)調(diào)查表明，我國血脂異?？偦疾÷蕿?8．6%[1]。高血脂是引起動(dòng)脈粥樣硬化（AS）性疾病和脂肪肝的主要因素，與之相關(guān)的心腦血管疾病發(fā)病率高、危害大、病情進(jìn)展兇險(xiǎn)，死亡率約占人類總死亡率的50%[2]。目前，調(diào)血脂的西藥不良反應(yīng)多，且價(jià)格較貴，故從中草藥中尋找有效的調(diào)血脂藥一直備受關(guān)注。牡蠣降脂膠囊由牡蠣肉、大黃、麥冬、西洋參等組方。牡蠣肉是廣西北海特色海洋產(chǎn)品，屬藥食兩用藥材，可促進(jìn)血液循環(huán)，促進(jìn)脂代謝。大黃具有瀉熱通腸、涼血解毒、逐瘀通經(jīng)的功效，常用于調(diào)血脂，可降低總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白、極低密度脂蛋白及過氧化脂質(zhì)的水平。麥冬甘寒清潤，可提高免疫功能、養(yǎng)陰生津、潤肺清心。西洋參可補(bǔ)氣養(yǎng)陰、清熱生津，可促進(jìn)糖代謝和脂肪代謝。該方在民間已有臨床應(yīng)用，但并無現(xiàn)代藥理學(xué)理論的支撐，因此對(duì)其進(jìn)行系統(tǒng)的藥理作用研究，闡明其藥理作用及機(jī)制，可為其深入開發(fā)與應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。本試驗(yàn)中以高脂飼料喂養(yǎng)鵪鶉建立動(dòng)物病理模型，觀察牡蠣降脂膠囊對(duì)高脂血癥模型鵪鶉血脂水平及脂代謝相關(guān)酶的影響，為其開發(fā)及臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 儀器、試藥與動(dòng)物

7170型全自動(dòng)生化分析儀（日本日立公司）；XHF-D高速分散器（寧波新芝生物科技股份有限公司）；AW220型電子天平（日本島津公司）；722型分光光度計(jì)（上海第三分析儀器廠）；AllegraX-12型離心機(jī)（美國貝克曼庫爾特有限公司）；Sunrise-BASIC酶標(biāo)儀（瑞士 Tecan公司）。牡蠣降脂膠囊（北海藍(lán)海洋生物藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)為20110425，規(guī)格為每粒0．35 g，人推薦用量2．1 g／d）；月見草油膠丸（武漢中聯(lián)集團(tuán)四藥藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)為20110309，規(guī)格為每粒0．3 g）。血清 TC檢測試劑盒（批號(hào)為091081）、血清 TG檢測試劑盒（批號(hào)為090815）、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)檢測試劑盒（批號(hào)為090512）、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)檢測試劑盒（批號(hào)為090916）、總酯酶檢測試劑盒，均購于南京建成生物工程研究所；載脂蛋白AI(Apo AI)檢測試劑盒（批號(hào)為 100821）、載脂蛋白(Apo B)檢測試劑盒（批號(hào)為100922），均購于中生北控生物科技股份有限公司；游離膽固醇（FC）測定試劑盒（Sigma公司，批號(hào)為110823）。普通飼料購于南寧飼料廠；高脂飼料配方參考AIN-93G國際配方，普通飼料 78．8%、膽固醇 1%、膽鹽 0．2%，熟豬油10%、蛋黃粉10%，充分?jǐn)嚢柚辆鶆?。體重60～100 g的鵪鶉，約4周齡，雌雄各半（廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，SPF級(jí)，合格證號(hào)為SCXKG（桂）2009-0002）。

1．2 方法

動(dòng)物分組與給藥[3]：取鵪鶉72只，以普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后，測定血脂、脂蛋白水平，按體重并參考TG，TC水平隨機(jī)分為6組，每組12只，即對(duì)照組(A組)，模型組(B組)，月見草油膠丸組（陽性對(duì)照組，C 組），牡蠣降脂膠囊低、中、高劑量組（D1，D2，D3組，劑量分別為 0．3，0．6，1．2 g ／kg，分別為人體推薦用量的 10，20，40倍）。對(duì)照組喂飼普通飼料，其余各組喂飼高脂飼料連續(xù)10周，高脂造模成功。各給藥組自造模第11周開始給予藥物治療，每日1次，A組及B組灌胃給予蒸餾水6 mL／kg；C組灌胃給予月見草油 0．26 g／kg（人體推薦用量的 20倍）；牡蠣降脂膠囊各組分別按劑量灌胃給藥，模型組及給藥組同時(shí)繼續(xù)喂飼高脂飼料，連續(xù)6周。動(dòng)物房溫度為（22±2）℃，相對(duì)濕度為65%。

指標(biāo)檢測：每周稱鵪鶉體重1次，觀察體重變化趨勢。試驗(yàn)結(jié)束后，停止給予高脂飼料，普通飼料喂養(yǎng)3 d，所有鵪鶉禁食12 h，以減少高脂飼料中膽固醇對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響，斷頭取血置離心管中，加蓋置4℃冰箱30 min后取出，以3 000 r／min的速率離心20 min，分離出上層血清即為待測樣品。測定血清中 TC，TG，HDL-C，LDL-C，Apo AI，Apo B、肝脂酶（HL）和脂蛋白脂酶（LPL）水平。血清中卵磷酯膽固醇的轉(zhuǎn)移酶（LCAT）的測定，參照蔣憲成等[4]的方法，在500 nm波長處測定游離型膽固醇（FC）水平，以FC的減少量（即膽固醇酯化量）表示LCAT活性大小。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用 SPSS 13．0統(tǒng)計(jì)軟件，所得數(shù)據(jù)用±s表示，計(jì)量資料進(jìn)行單因素方差分析，計(jì)數(shù)資料的比較采用 χ2檢驗(yàn)。P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

試驗(yàn)過程中，各組鵪鶉的毛發(fā)有光澤、行動(dòng)靈活，食量及大便正常。在造模的前4周，鵪鶉體重的增長速度較快，第5周開始體重增長變慢。在整個(gè)試驗(yàn)期間，對(duì)照組的體重增長速度相對(duì)于模型組及牡蠣降脂膠囊各劑量組較緩慢，但到14周后體重基本相近。牡蠣降脂膠囊對(duì)高脂血癥鵪鶉體重及各指標(biāo)的影響見表1至表 3。

3 討論

長期食用高膽固醇食物，容易引起高TG及TC血癥。HDLC和LDL-C代謝異常，相應(yīng)地表現(xiàn)出Apo AI和Apo B的代謝異常。Apo AI是 HDL-C最主要的蛋白成分，在血漿中的濃度與HDL-C的水平相關(guān)，是脂代謝關(guān)鍵酶LCAT的激活劑，而LCAT在膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)中起主要作用；Apo AI水平升高就可激活LCAT，加強(qiáng)膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)，從而降低膽固醇水平[5]。Apo B是LDL-C的主要載脂蛋白，在運(yùn)輸內(nèi)源性膽固醇、TG和LDL-C的代謝中起主要作用，攜帶的膽固醇在動(dòng)脈壁沉積，會(huì)導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生[6]。

表1 牡蠣降脂膠囊對(duì)高脂血癥鵪鶉體重的影響（±s，g，n＝12）

表1 牡蠣降脂膠囊對(duì)高脂血癥鵪鶉體重的影響（±s，g，n＝12）

注：與 A 組比較， P ＜0．05， P ＜0．01；與 B 組比較， P ＜0．05，P ＜ 0．01。下表同。

組別A組B組C組D1組D2組D3組試驗(yàn)前81．4 ±5．5 81．9 ±6．6 82．1 ±6．9 82．2 ±5．3 83．1 ±6．5 83．3 ±5．7 4周107．7 ± 3．5 124．1 ± 3．6 122．8 ± 2．5 122．1 ± 2．2 123．2 ± 3．5 122．4 ± 3．1 10周141．1 ± 2．7 161．7 ± 3．8 159．2 ± 7．1 161．3 ± 7．3 160．2 ± 6．5 161．2 ± 7．0 12周161．9 ±6．8 170．6 ±8．8 167．7 ±6．9 171．2 ±7．5 169．5 ±6．4 169．6 ±5．0 14周181．7 ± 4．0 190．6 ± 2．8 179．3 ± 3．1 184．8 ± 5．5 182．3 ± 4．1 181．6 ± 2．8 16周191．0 ± 7．1 209．3 ± 5．1 195．2 ± 5．6 192．1 ± 6．1 193．7 ± 4．1 190．5 ± 6．5

表2 牡蠣降脂膠囊對(duì)高脂血癥鵪鶉血脂的影響（±s，mmol／L，n＝12）

表2 牡蠣降脂膠囊對(duì)高脂血癥鵪鶉血脂的影響（±s，mmol／L，n＝12）

組別A組B組C組D1組D2組D3組TG 0．73 ± 0．20 1．25 ± 0．19 0．83 ± 0．20 0．93 ± 0．21 0．75 ± 0．18 0．80 ± 0．26 TC 2．18 ± 2．5 3．47 ± 0．31 2．37 ± 0．27 2．82 ± 0．23 2．43 ± 0．26 2．31 ± 0．27 HDL-C 0．79 ± 0．18 0．71 ± 0．15 0．77 ± 0．23 0．73 ± 0．20 0．75 ± 0．19 0．74 ± 0．21 LDL-C 1．24 ± 0．15 2．28 ± 0．17 1．50 ± 0．19 2．00 ± 0．13 1．58 ± 0．14 1．70 ± 0．18

表3 牡蠣降脂膠囊對(duì)高脂血癥鵪鶉血清中載脂蛋白和血清中LCAT，HL，LPL 的影響（±s，n＝12）

表3 牡蠣降脂膠囊對(duì)高脂血癥鵪鶉血清中載脂蛋白和血清中LCAT，HL，LPL 的影響（±s，n＝12）

載脂蛋白（mmol／L）組別A組B組C組D1組D2組D3組Apo AI 0．110 ± 0．014 0．057 ±0．013 0．080 ± 0．010 0．073 ±0．010 0．075 ± 0．019 0．084 ± 0．035 Apo B 0．226 ± 0．032 0．422 ±0．033 0．259 ± 0．035 0．249 ±0．041 0．237 ± 0．048 0．225 ± 0．024 LCAT（ mol／L）1．74 ± 0．12 0．86 ± 0．08 1．63 ± 0．11 1．35 ± 0．09 1．64 ± 0．18 1．71 ± 0．16 HL（ mol／L）17．12 ± 1．06 8．58 ± 0．18 17．09 ± 0．77 14．46 ± 0．98 16．15 ± 1．45 16．94 ± 0．78 LPL（ mol／L）47．27 ± 1．52 23．50 ± 1．26 47．04 ± 1．17 41．83 ± 0．97 45．37 ± 1．12 47．00 ± 1．31

在血漿脂蛋白代謝過程中，許多脂酶起著重要作用，主要包括LPL，HL，LCAT。血漿中 TG的增高或降低與血漿中 LPL的活性有一定關(guān)系，LPL具有水解脂蛋白中TG為非酯化脂肪酸（NEFA）和甘油的作用。因此，LPL是影響血漿中TG的一個(gè)直接因素。HL活力異常會(huì)引起血漿脂蛋白代謝紊亂。LCAT在血漿膽固醇酯化及HDL-C的成熟過程中起著重要作用。HDL-C與肝細(xì)胞膜的HDL-C受體結(jié)合，被肝細(xì)胞攝取，在此過程中膽固醇被用于合成膽汁酸或通過膽汁排出體外，使膽固醇在肝的代謝中被清除[7]，LCAT活性決定 HDL-C的生成。因此，脂代謝酶的活性與血脂水平緊密相關(guān)，蘇慧等[8]的研究也表明，LCAT，HL，LPL都是調(diào)節(jié)脂蛋白代謝的關(guān)鍵酶，在脂代謝中發(fā)揮重要作用。

建立合適的高脂血癥動(dòng)物模型是推進(jìn)高脂血癥研究進(jìn)程的關(guān)鍵。目前常用于高脂血癥模型且價(jià)格經(jīng)濟(jì)的動(dòng)物有大鼠、家兔和鵪鶉。大鼠血清中HDL-C是血膽固醇的主要載體，但大鼠具有對(duì)抗動(dòng)脈粥樣硬化形成的能力。家兔是最早用于制造高脂血癥模型的動(dòng)物，其對(duì)高脂飼料敏感性高，外源性膽固醇的吸收率高，但家兔為食草動(dòng)物，膽固醇代謝與人類差異較大，病變與人體不同，且抵抗力差，容易繼發(fā)感染而死亡。目前，鵪鶉被作為高脂血癥及AS模型常用動(dòng)物，為脊椎動(dòng)物中能自發(fā)形成AS的易感動(dòng)物之一，且來源充足，飼養(yǎng)方便，食料簡單。

本研究中采用高脂飼料喂飼鵪鶉復(fù)制高脂血癥模型，研究牡蠣降脂膠囊對(duì)鵪鶉血脂、脂蛋白、載脂蛋白及脂代謝酶的影響，旨在探索牡蠣降脂膠囊調(diào)節(jié)血脂代謝的作用機(jī)制。結(jié)果表明，牡蠣降脂膠囊可以顯著降低高血脂癥鵪鶉血清中的TG，TC，LDL-C水平，但對(duì)血清中HDL-C的升高作用不明顯。同時(shí)，牡蠣降脂膠囊通過提高 Apo AI含量，降低 Apo B含量，提高 LCAT，HL，LPL的活性，而發(fā)揮調(diào)血脂的作用。結(jié)果提示，牡蠣降脂膠囊可有效控制血脂水平，特別是高脂膳食引起的高脂血癥，其調(diào)血脂的機(jī)制可能是通過激活載脂蛋白及脂代謝酶的活性，以抑制腸道內(nèi)外源性血脂和脂蛋白的吸收，加速膽固醇的代謝和促進(jìn)膽固醇的排泄來調(diào)節(jié)TC代謝。

控制高血脂對(duì)于治療AS是非常重要的途徑，目前國內(nèi)外治療AS應(yīng)用最多的是他汀類藥物，但臨床發(fā)現(xiàn)，長期服用這些化學(xué)調(diào)脂藥物可發(fā)生多種不良反應(yīng)，如對(duì)肝、腎功能有一定損害作用，嚴(yán)重時(shí)可危及生命；此外還具有用藥漸強(qiáng)、停藥漸升的弊端[9]。天然中草藥防治高脂血癥及抗AS的研究工作日益受到國內(nèi)外醫(yī)學(xué)界的重視，大量藥理研究及臨床報(bào)道也已證明中草藥具有一定的調(diào)脂和抗AS作用，且不良反應(yīng)少[10]。綜上所述，牡蠣降脂膠囊在高脂血癥及AS的防治中具有較好的應(yīng)用前景，值得進(jìn)一步深入研究開發(fā)并加以利用。

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