氣相色譜法測定食用調(diào)和油中α-亞麻酸及亞油酸的含量

韓 榮， 田 蘭， 吳 迪， 吳桂榮

(新疆醫(yī)科大學(xué)， 烏魯木齊 830011)

亞油酸和α-亞麻酸都是營養(yǎng)學(xué)明確確定的人體必需脂肪酸，其對人體的健康都有著極其重要的意義。α-亞麻酸具有增強免疫力、抗凝血、抗炎、降血脂、延緩腦細(xì)胞衰老等藥理作用[1-4]。亞油酸具有降低血脂、預(yù)防心腦血管疾病、抗腫瘤、抗氧化、降低動物和人體膽固醇與甘油三酯、抗動脈粥樣硬化、提高骨骼密度、防治糖尿病等多種重要生理功能的活性[5-7]。隨著生活水平提高，人們開始注重食用油的營養(yǎng)，而亞油酸和α-亞麻酸是食用油中的重要營養(yǎng)成分，是評價食用油營養(yǎng)價值的關(guān)鍵指標(biāo)。本研究以α-亞麻酸甲酯和亞油酸甲酯為指標(biāo)性成分，采用氣相色譜法[8]測定食用調(diào)和油中亞油酸及α-亞麻酸含量,為食用調(diào)和油質(zhì)量控制和評價提供參考和依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1儀器氮氫空一體機(NHA-500)(北京中惠普技術(shù)分析研究所)，氣相色譜儀(GC2010，日本島津)，磁力攪拌油浴鍋(PS-1000，Tokyo，Japan)。

1.2試劑食用植物調(diào)和油(新疆烏魯木齊札郎孜生物科技有限公司)，α-亞麻酸甲酯(111624-200602)及亞油酸甲酯(111625-200301)(中國藥品生物制品檢定所)，BF3-CH3OH購自上海阿拉丁公司，氫氧化鈉(西安化學(xué)試劑廠)，甲醇(天津市康科德科技有限公司)，正己烷(長沙唐華化工貿(mào)易有限公司)，以上試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件[1-2]色譜柱：島津RTX-WAX彈性石英毛細(xì)管柱(聚乙二醇涂層)，長度30.0 m，膜厚0.25 μm，內(nèi)徑0.25 mm。進樣口溫度250℃，檢測器溫度250℃，柱溫控制采用程序升溫，以200℃為起始柱溫，保持4 min，以4℃/min升溫至230℃，保持3 min；控制方法為：線速率，載氣為N2，尾吹流量30 mL/min，氫氣流量40 mL/min，空氣流量400 L/min。采用手動分流進樣，進樣量為1 μL，分流比為90∶1。

2.2溶液的配制

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)儲備液的配制 亞油酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：精密稱量亞油酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品184.5 mg，定容至10 mL，配制成濃度為18.45 mg/mL亞油酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品儲備液。α-亞麻酸甲酯溶液的制備：精密稱量α-亞麻酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品183.8 mg，定容至10 mL，得濃度為18.38 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品儲備液。

2.2.2 供試品溶液的配制 精密稱量樣品400 mg，加入0.5 mol/L氫氧化鈉甲醇溶液6 mL, 置入65℃水浴鍋中皂化，同時充入氮氣，8 min后加入15%的BF3-CH3OH溶液7 mL，在65℃水浴中2 min，使其進行甲酯化，再加入正己烷3 mL，煮沸1 min，然后冷卻至室溫，轉(zhuǎn)移至試管中，加入的飽和NaCl溶液，靜置并定容上層有機層至5 mL，加入無水Na2SO4干燥，取干燥后樣品200 μL，定容至10 mL，進樣1 μL進行氣相色譜分析[7]。

2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別準(zhǔn)確吸取0.10、0.20、0.40、0.50、1.00、2.00 mL的α-亞麻酸甲酯和亞油酸甲酯儲備液,置于10 mL容量瓶中，以正己烷定容，得到濃度分別為0.183 8、0.367 6、0.735 0、0.919 0、1.838 0、3.676 0 mg/mL的α-亞麻酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)工作液。分別準(zhǔn)確吸取0.10、0.20、0.50、1.00、2.00 mL的亞油酸甲酯儲備液置于10 mL容量瓶中，以正己烷定容，得到濃度分別為0.199 7、0.359 8、0.899 5、1.799 0、3.589 0 mg/mL的亞油酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)工作液，在“2.1”項下分析條件下，各濃度進樣1 μL，以各組分保留時間定性，峰面積定量，以濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖1、2。

圖1 α-亞麻酸甲酯對照品氣相色譜圖

圖2 亞油酸甲酯對照品氣相色譜圖

2.4線性關(guān)系考察α-亞麻酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品濃度在0.183 8～3.676 0 mg/mL范圍內(nèi)，峰面積(Y)與濃度(X)線性關(guān)系良好，Y=1.183 7×105X+6.885 0×104(r=0.999 9，n=6)；亞油酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品濃度在0.199 7～3.598 0 mg/mL范圍內(nèi)，峰面積(Y)與濃度(X)線性關(guān)系良好，Y=1.462 7×105X-2.524 5×103(r=0.999 8，n=6)。

2.5檢測限和定量限α-亞麻酸甲酯的檢測限為0.017 1 mg/mL，定量限為0.063 6 mg/mL。亞油酸甲酯檢測限為0.033 3 mg/mL，定量限為0.101 6 mg/mL。

2.6精密度試驗將1份樣品按供試品溶液配制方法處理后連續(xù)進樣5次，每次進樣1 μL, 并計算峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差 , α-亞麻酸甲酯及亞油酸甲酯的計算結(jié)果分別為1.85%和1.75%，說明儀器精密度良好。

2.7穩(wěn)定性試驗將1份樣品按供試品溶液配制方法處理后，于常溫下密封儲存，按以上色譜條件連續(xù)測定7 d，并計算峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差 ,α-亞麻酸甲酯及亞油酸甲酯的計算結(jié)果分別為1.84%和1.98%，說明方法穩(wěn)定性良好。

2.8重現(xiàn)性試驗取同一批號的食用調(diào)和油樣品5份，按供試品溶液配制方法制備成供試品溶液，再按 以上色譜條件測定，并計算5份樣品峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，α-亞麻酸甲酯及亞油酸甲酯的計算結(jié)果為分別為3.97%和3.81%，說明本品重現(xiàn)性良好。

2.9加樣回收率試驗將亞油酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)儲備液和α-亞麻酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)儲備液混合，制成亞油酸含量為12.030 1 mg/mL、α-亞麻酸含量為8.882 7 mg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液。精密稱取同一批次樣品 9份，分別加入一定量的α-亞麻酸甲酯和亞油酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按供試品溶液配制方法處理，再按以上色譜條件進樣測定，計算回收率，結(jié)果亞油酸平均回收率為99.59%，RSD為2.66%；α-亞麻酸平均回收率為100.73%，RSD為1.29%,見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果

2.10樣品測定結(jié)果分別準(zhǔn)確稱取不同調(diào)和比例的食用調(diào)和油400 mg，制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液1 μL，注入氣相色譜儀進行測定。紅花油與胡麻油的比例為1∶1時，亞油酸和α-亞麻酸的含量分別是39.28%和43.48%；紅花油與胡麻油比例為1∶3時，亞油酸和α-亞麻酸的含量分別是17.76%和71.55%；紅花油與胡麻油比例為7∶1時，亞油酸和α-亞麻酸的含量分別是76.55%和8.93%。從測定結(jié)果看出，氣相色譜法的測定結(jié)果與實際油料配比相符,見圖3、表2。

圖3 調(diào)和油樣品氣相色譜圖

配比(體積比)亞油酸含量/%RSD/%α-亞麻酸含量/%RSD/%紅花油∶胡麻油(1∶1)39.282.2043.814.40 紅花油∶胡麻油(1∶3)17.760.9571.551.43 紅花油∶胡麻油(7∶1)76.551.378.931.44

3 討論

本實驗研究的食用調(diào)和油是由紅花籽油和胡麻油按一定配比組成。紅花籽油的主要成分是亞油酸，胡麻油的主要成分是α-亞麻酸，亞油酸和α-亞麻酸具有調(diào)節(jié)心血管系統(tǒng)的作用[3-8]，其為該食用油中的重要營養(yǎng)成分，所以將亞油酸和α-亞麻酸作為調(diào)和油質(zhì)量控制的指標(biāo)。

在酯化過程中,比較了通入氮氣和不通氮氣2種情況，通入氮氣生成的甲酯化產(chǎn)物產(chǎn)量有所提高。

本實驗建立了用氣相色譜法同時測定食用調(diào)和油中亞油酸甲酯及α-亞麻酸甲酯的方法 ,進而計算其中亞油酸和α-亞麻酸的含量。實驗結(jié)果說明氣相色譜法方法快速、準(zhǔn)確 ,重復(fù)性好 ,可以有效控制食用調(diào)和油的質(zhì)量。該方法也可以作為生產(chǎn)原料紅花油及胡麻油質(zhì)量控制的方法或是其他類型食用調(diào)和油中亞油酸和α-亞麻酸含量的測定方法。該方法的建立對于食用調(diào)和油的生產(chǎn)全程質(zhì)量控制具有積極的意義。

參考文獻(xiàn)：

[1] 趙麗筠，謝思勤，張樂民，等. 氣相色譜法測定金藍(lán)氣霧劑中冰片的含量[J].海南醫(yī)學(xué)，2005,16(11)：136,109.

[2] 國內(nèi)貿(mào)易部谷物油脂化學(xué)研究所. GB/T 17376-1998動植物油脂脂肪酸甲酯制備[S]. 1998.

[3] 李加興，忠海，劉飛等.α-亞麻酸的生理功能及其富集純化[J]. 食品與機械，2009，25(5)：172-177.

[4] Demaison L，Moreau D．Dietary n-3 polyunsaturated fatty acids and coronary heart disease-ralated mortality a possible mechnasim of action[J]．Cell Mol Life Sci，2002，59:463-477．

[5] 邵群，張慧，邊際. 功能性油脂-共軛亞油酸研究進展[J].食品科學(xué), 2002, 23(2)：164-166.

[6] Simopulos AP.The importance of the ratio of omega-6/omega-3 essential fatty acids[J].Biomed Pharmacother，2002，56(8)：365-379.

[7] 毛新民,張瑜,張龑之，等. 保心腦膠囊對高脂血癥大鼠血脂的影響 [J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2006，29(12)：1140-1142.

[8] 古銳，張藝，賴先榮，等.氣相色譜法測定心迪軟膠囊中亞油酸的含量[J].中成藥，2007，29(1)：155-157.