三氧化二砷與傳統(tǒng)及新型藥物協(xié)同抑制皮膚T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系增殖*

李嬋娟 郭姍琦 夏 冰 晉 鑫 李曉武 屈福蓮 張翼鷟

·基礎(chǔ)研究·

三氧化二砷與傳統(tǒng)及新型藥物協(xié)同抑制皮膚T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系增殖*

李嬋娟 郭姍琦 夏 冰 晉 鑫 李曉武 屈福蓮 張翼鷟

目的：探討三氧化二砷（arsenic trioxide，As2O3）與傳統(tǒng)藥物地塞米松（Dexamethasone，DXM）、依托泊苷（Etoposide，VP-16）、甲氨蝶呤（Methotrexate，MTX）和新型藥物硼替佐米（Bortezomib，BTZ）、組蛋白去乙?；敢种苿?辛二酰苯胺異羥肟酸（suberoylanilide hydroxamic acid，SAHA）聯(lián)合對人皮膚T細(xì)胞淋巴瘤（CTCL）細(xì)胞系Hut-78、Hut-102細(xì)胞的增殖抑制作用。方法：不同濃度的As2O3單藥或與DXM/VP-16/MTX/BTZ/SAHA聯(lián)合作用于Hut-78、Hut-102細(xì)胞48 h后，采用MTT法檢測細(xì)胞增殖抑制率，應(yīng)用聯(lián)合指數(shù)分析兩藥是否具有協(xié)同效應(yīng)。結(jié)果：As2O3、DXM、VP-16、MTX、BTZ、SAHA單藥對Hut-78、Hut-102細(xì)胞的增殖均具有顯著的抑制作用，呈劑量依賴性，培養(yǎng)48h的半數(shù)抑制濃度分別為5 μmol/L、500 μg/L、2.5 μg/L、1 μg/L、10 μmol/L、2.5 μmol/L。As2O3與DXM/VP-16/MTX/BTZ/SAHA聯(lián)合時具有協(xié)同效應(yīng)，抗腫瘤作用更為顯著。結(jié)論：As2O3單藥及其與DXM/VP-16/MTX/ BTZ/SAHA聯(lián)合在體外可有效抑制CTCL細(xì)胞增殖。As2O3是一種很有前景的治療CTCL的藥物，As2O3與DXM/VP-16/MTX/BTZ/ SAHA等傳統(tǒng)或新型藥物聯(lián)合可為CTCL臨床的治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

皮膚T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系 三氧化二砷 化療藥物 硼替佐米 組蛋白去乙?；敢种苿?辛二酰苯胺異羥肟酸藥物協(xié)同作用

皮膚T細(xì)胞淋巴瘤（cutaneous T cell lymphoma，CTCL）是一組淋巴細(xì)胞異常增殖性疾病，以皮膚損害為初發(fā)和典型癥狀，其特征是皮膚異型淋巴細(xì)胞聚集，蕈樣肉芽腫（MF）和Sézary綜合征（SS）是其中最常見的類型。近年來，其發(fā)病率和死亡率呈現(xiàn)上升趨勢，嚴(yán)重威脅人類健康，這類疾病大多惡性程度較低，病情進(jìn)展緩慢。但晚期由于全身免疫系統(tǒng)異常，繼發(fā)感染及罹患第二種腫瘤的概率明顯增加［1］。

CTCL異質(zhì)性明顯，病理亞型多樣，國內(nèi)外對該類疾病的治療經(jīng)驗(yàn)較少，聯(lián)合化療主要借鑒B細(xì)胞淋巴瘤。在既往的傳統(tǒng)治療中，CTCL與侵襲性B細(xì)胞淋巴瘤的一線化療方案相同，多采用CHOP或CHOP樣方案，但目前已知CHOP或CHOP樣方案對多數(shù)CTCL的療效并不理想［2］。晚期MF/SS的不良預(yù)后，也迫使研究者尋求新的有效治療方法和治療藥物。三氧化二砷（As2O3）是中藥砒霜的主要有效成分，對急性早幼粒細(xì)胞性白血病具有顯著的療效［3-4］。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，As2O3可通過抑制腫瘤新生血管的生成及細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化、凋亡，下調(diào)端粒酶活性等機(jī)制抑制腫瘤細(xì)胞的生長［5-7］。Tun-Kyi等［8］研究發(fā)現(xiàn)As2O3體外可促進(jìn)CTCL細(xì)胞凋亡，體內(nèi)可使小鼠腫瘤體積明顯縮小甚至消失。張學(xué)美等［9］研究證實(shí)As2O3對CTCL細(xì)胞系Hut-78細(xì)胞的增殖抑制呈時間劑量依耐性。錢正子等［10］研究表明硼替佐米與吡喃阿霉素聯(lián)合對Hut-78細(xì)胞具有協(xié)同抑制作用，提示聯(lián)合治療可能成為CTCL治療新選擇，As2O3與某些抗腫瘤藥物聯(lián)合應(yīng)用具有協(xié)同作用［11］。本研究旨在探討As2O3對CTCL細(xì)胞系Hut-78、Hut-102細(xì)胞的體外抗腫瘤效應(yīng)，觀察As2O3與化療藥物地塞米松（DXM），依托泊苷（VP-16），甲氨蝶呤（MTX）和新型藥物硼替佐米（BTZ），組蛋白去乙酰化酶抑制劑-辛二酰苯胺異羥肟酸（SAHA）是否可協(xié)同抑制CTCL細(xì)胞系Hut-78、Hut-102細(xì)胞的增殖。

1 材料與方法

1.1 材料

As2O3購于哈爾濱伊達(dá)藥業(yè)有限公司，溶于0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液（pH7.4），配制成100mmol/L的儲存液待用；DXM購于上海通用藥業(yè)股份有限公司（5 mg/mL）；VP-16購于江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司（5 mL：100 mg）；MTX購于上海醫(yī)藥有限公司華聯(lián)制藥廠（5 mg/支）；BTZ購于西安楊森制藥有限公司，溶于PBS中配制成濃度為10 μg/mL，4℃避光保存?zhèn)溆?；SAHA購于美國International Laboratory，溶于生理鹽水配成4 μg/mL儲存液，-20℃避光保存；RPMI 1640和胎牛血清購自美國Hyclone公司，二甲基亞砜（DMSO）、四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）均購自美國Sigma公司。人皮膚T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系Hut-78、Hut-102細(xì)胞，購自中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞資源中心。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) 選用人皮膚T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系Hut-78、Hut-102細(xì)胞，于含有10%熱滅活胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液中培養(yǎng)，在37℃、5%CO2飽和濕度條件下傳代，取對數(shù)生長期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)分組 Hut-78、Hut-102細(xì)胞系處理：1）空白對照組：未加任何藥物處理；2）各單藥組：As2O3組：在5、4、3、2、1 μmol/L As2O3作用下培養(yǎng)48 h；DXM組：在500、400、300、200、100 μg/mL DXM作用下培養(yǎng)48 h；VP-16組：在2.5、2、1.5、1、0.5 μg/mL VP-16作用下培養(yǎng)48h；MTX組：在1、0.8、0.6、0.4、0.2 μg/mL MTX作用下培養(yǎng)48 h；BTZ組：在10、8、6、4、2 μmol/L BTZ作用下培養(yǎng)48 h；SAHA組：在2.5、2、1.5、1、0.5 μmol/L SAHA作用下培養(yǎng)48 h。3）聯(lián)合用藥組：As203+DXM組：5、4、3、2、1 μmol/L As203分別與500、400、300、200、100 μg/mL DXM作用下培養(yǎng)48 h；As203+VP-16組：上述濃度的As203分別與2.5、2、1.5、1、0.5 μg/mL VP-16作用下培養(yǎng)48h；As203+MTX組：上述濃度的As203分別與1、0.8、0.6、0.4、0.2 μg/mL MTX作用下培養(yǎng)48h；As203+BTZ組：上述濃度的As203分別與10、8、6、4、2 μmol/L BTZ作用下培養(yǎng)48h；As203+SAHA組：上述濃度的As203分別與2.5、2、1.5、1、0.5 μmol/L SAHA作用下培養(yǎng)48 h。每組設(shè)3個復(fù)孔，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取平均值為最終結(jié)果。

1.2.3 MTT法檢測細(xì)胞增殖能力 采用MTT法測定As2O3、DXM、VP-16、MTX、BTZ、SAHA單藥及As2O3與上述各藥物聯(lián)合對Hut-78、Hut-102細(xì)胞增殖的抑制效應(yīng)。將對數(shù)生長期的腫瘤細(xì)胞以1×105個/孔接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔總體系0.2 mL，在不同濃度的As2O3（1～5 μ mol/L）、DXM（100～500 μ g/mL）、VP-16（0.5～2.5 μg/mL）、MTX（0.2～1 μg/mL）、BTZ（2～10 μmol/L）、SAHA（0.5～2.5 μmol/L）作用下培養(yǎng)48 h，然后每孔加入新鮮配置的MTT工作液20 μL（終濃度0.5 mg/mL）繼續(xù)培養(yǎng)4h，小心吸棄上清，每孔加入DMSO 0.2 mL，振蕩混勻。用酶標(biāo)儀測定570 nm波長處的吸光度（A）值，按下列公式計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率=［（陰性對照組A值-空白組A值）-（實(shí)驗(yàn)組A值-空白組A值）］/（陰性對照組A值-空白組A值）×100%。

1.2.4 聯(lián)合指數(shù)測定 應(yīng)用CalcuSyn software（Biosoft，F(xiàn)erguson，MO，美國）軟件分析協(xié)同指數(shù)（Combination index，CI）［12-13］，結(jié)果分別以CI＜1代表具有協(xié)同作用，≈1為相加作用，＞1為拮抗作用。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，所有體外實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)計(jì)量資料用±s描述，兩樣本均數(shù)的比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 As2O3、DXM、VP-16、MTX、BTZ、SAHA單藥對Hut-78、Hut-102細(xì)胞增殖的影響

Hut-78、Hut-102細(xì)胞經(jīng)不同濃度As2O3、DXM、VP-16、MTX、BTZ、SAHA單藥處理48h后，除MTX、BTZ外，其余4種藥物細(xì)胞增殖抑制率均隨藥物濃度的增加而顯著增強(qiáng)（P＜0.05）。表明As2O3、DXM、VP-16、MTX、BTZ、SAHA單藥對Hut-78、Hut-102細(xì)胞的增殖抑制作用呈劑量依賴性，48 h的半數(shù)抑制濃度分別為5 μmol/L、500 μg/L、2.5 μg/L、1 μg/L、10 μmol/L、2.5 μmol/L（圖1A）。

2.2 As2O3與DXM的協(xié)同作用

As2O3與DXM聯(lián)合時，對Hut-78、Hut-102細(xì)胞的增殖抑制作用均強(qiáng)于各單藥組（P＜0.05，圖1A）。當(dāng)fa（細(xì)胞增殖抑制率）＞30%，CI值隨著fa的增大而減小，表明協(xié)同效應(yīng)更加顯著（圖1B）。

2.3 As2O3與VP-16的協(xié)同作用

As2O3與VP-16聯(lián)合時，對Hut-78、Hut-102細(xì)胞的增殖抑制作用強(qiáng)于各單藥組（P＜0.05，圖1A）。當(dāng)fa＞50%時，CI＞1，此時兩藥具有拮抗效應(yīng)。提示As2O3與VP-16聯(lián)合用藥，僅在細(xì)胞增殖抑制率較低（fa＜50%）時發(fā)揮協(xié)同作用（圖1C）。

2.4 As2O3與MTX的協(xié)同作用

As2O3與MTX聯(lián)合時，對Hut-78、Hut-102細(xì)胞的增殖抑制作用強(qiáng)于各單藥組（P＜0.05，圖1A）。CI隨fa的增大而增大，當(dāng)fa＞80%時，CI＞1，此時兩藥具有拮抗效應(yīng)（圖1D）。

2.5 As2O3與BTZ的協(xié)同作用

As2O3與BTZ聯(lián)合時，對Hut-78、Hut-102細(xì)胞的增殖抑制作用均強(qiáng)于各單藥組（P＜0.05）（圖1A）。對于Hut-78細(xì)胞系，當(dāng)fa＞70%時，CI＞1，此時兩藥具有拮抗效應(yīng)；而對于Hut-102，fa＞20%均有協(xié)同效應(yīng)，fa在60%左右，CI值最小，此時協(xié)同效應(yīng)最顯著（圖1E）。

2.6 As2O3與SAHA的協(xié)同作用

As2O3與SAHA聯(lián)合時，對Hut-78細(xì)胞的增殖抑制作用均強(qiáng)于各單藥組（P＜0.01，圖1A）。當(dāng)fa＞20%時，CI隨著fa的增大而減小，表明隨著藥物濃度的增大，協(xié)同作用越顯著（圖1F）。

圖1 As2O3與DXM、VP-16、MTX、BTZ、SAHA單藥及聯(lián)合作用于Hut-78的抑制曲線及CI圖Figure 1 Growth inhibition curves of Hut-78 cells cultured in As2O3,DXM,VP-16,MTX,BTZ,SAHA,and As2O3with DXM,VP-16,MTX,BTZ,or SAHA.The CIs of As2O3with other drugs were analyzed

3 討論

CTCL是一組淋巴細(xì)胞異常增殖性疾病，由于其異質(zhì)性明顯，故缺乏標(biāo)準(zhǔn)化的治療方案。早期患者多以局部治療為主，晚期患者則需要接受全身系統(tǒng)治療，包括全身化療、分子靶向治療及造血干細(xì)胞移植等。隨著組蛋白去乙?；敢种苿ㄈ鏥orinostat［14］、Romidepsin［15］）及單克隆抗體（如Brentuximab［16］）等應(yīng)用于晚期CTCL的治療，患者的近期療效稍有提高，但遠(yuǎn)期療效及預(yù)后并未得到明顯改善，中位生存期僅1.4～4.7年。晚期CTCL的不良預(yù)后迫使我們尋求新的有效治療方法和治療藥物。

As2O3治療各類惡性腫瘤是近幾年腫瘤研究的熱點(diǎn)，有關(guān)As2O3的研究不僅在血液病方面屢見不鮮，如將其應(yīng)用于淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤的治療等，其在實(shí)體瘤方面的研究也多見報(bào)道，例如作用于胃癌［17］、卵巢癌［18］等。雖然各實(shí)驗(yàn)中As2O3的有效藥物濃度有較大差異，但都顯示出較好的臨床應(yīng)用前景。本實(shí)驗(yàn)與Tun-Kyi等［8］結(jié)論一致，不同濃度的As2O3作用于Hut-78、Hut102細(xì)胞，均可見明顯的細(xì)胞增殖抑制作用，其IC50為5 μmol/L，且隨藥物濃度增加，抑制作用增強(qiáng)。

傳統(tǒng)化療藥物包括DXM、VP-16、MTX等用于治療CTCL已有較長的歷史。CTCL早期常使用糖皮質(zhì)激素治療，而單用此類藥物治療緩解期較短。Hussein等［19］及Hayashi［20］等報(bào)道As2O3與DXM合用，對MM（多發(fā)性骨髓瘤）細(xì)胞有協(xié)同促凋亡作用。本實(shí)驗(yàn)中As2O3與DXM聯(lián)合有協(xié)同抑制細(xì)胞增殖作用，且隨著藥物濃度增高，協(xié)同效應(yīng)越顯著。As2O3與DXM聯(lián)合應(yīng)用有望在CTCL治療中發(fā)揮作用。VP-16是治療血液系統(tǒng)惡性腫瘤的重要藥物，本實(shí)驗(yàn)中As2O3與VP-16聯(lián)合時，對Hut-78、Hut-102細(xì)胞的增殖抑制作用強(qiáng)于各單藥組（P＜0.05）。當(dāng)fa＞50%時，CI＞1，此時兩藥具有拮抗效應(yīng)。提示As2O3與VP-16聯(lián)合用藥，僅在細(xì)胞增殖抑制率較低（fa＜50%）時發(fā)揮協(xié)同作用，其聯(lián)合使用價值有待進(jìn)一步證實(shí)。MTX對紅皮病型CTCL比較有效，本實(shí)驗(yàn)中As2O3、MTX單藥均可抑制CTCL細(xì)胞增殖，聯(lián)合使用時，對細(xì)胞的增殖抑制作用顯著增強(qiáng)。CI值隨fa的增大而增大，當(dāng)fa＞80%時，CI＞1，此時兩藥具有拮抗效應(yīng)。此兩藥有望聯(lián)合使用，但其最佳聯(lián)合濃度及劑量有待進(jìn)一步摸索。

硼替佐米是一種新型抗腫瘤靶向治療藥物，Zinzani等［21］報(bào)道了一項(xiàng)BTZ單藥治療復(fù)發(fā)或難治性CTCL的Ⅱ期臨床試驗(yàn)，該項(xiàng)研究表明BTZ耐受良好，單藥治療CTCL顯示出良好的效果。本實(shí)驗(yàn)As2O3與BTZ聯(lián)合時，對Hut-78、Hut-102細(xì)胞的增殖抑制作用均強(qiáng)于各單藥組（P＜0.05）；fa在60%左右，CI值最小，此時協(xié)同效應(yīng)最顯著。對于Hut-78細(xì)胞系，當(dāng)fa＞70%時，CI＞1，此時兩藥具有拮抗效應(yīng)。提示兩者可聯(lián)合使用，但關(guān)鍵在于探索有效劑量和濃度。

SAHA（Vorinostat）是第一個被FDA批準(zhǔn)的組蛋白去乙?；敢种苿╤istone deacetylases inhibitor，HDACi）類藥物［22］。其通過抑制HDAC活性，誘導(dǎo)靶細(xì)胞中組蛋白高度乙?；?，從而改變組蛋白與DNA鏈間結(jié)合狀態(tài)，有利于轉(zhuǎn)錄因子與DNA鏈結(jié)合，啟動特異性基因表達(dá)，從而達(dá)到阻斷腫瘤細(xì)胞生長的作用［23］。基于Madeleine等［24］研究，F(xiàn)DA在2006年10月6日批準(zhǔn)SAHA用于治療經(jīng)過兩種化療方案治療病情仍持續(xù)惡化或復(fù)發(fā)的CTCL。SAHA在體外能有效抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，在體內(nèi)可以抑制實(shí)體瘤的生長，并能有效抑制腫瘤血管的形成［25］。本實(shí)驗(yàn)SAHA單藥對Hut-78及Hut-102細(xì)胞系均有顯著抑制作用，呈濃度依賴性。As2O3與SAHA聯(lián)合時，對Hut-78細(xì)胞的增殖抑制作用顯著增強(qiáng)，且隨著藥物濃度的增大，協(xié)同作用越顯著。As2O3與SAHA聯(lián)合有望在CTCL治療中發(fā)揮積極作用。

綜上所述，As2O3與DXM/BTZ/VP-16/MTX/SAHA聯(lián)合作用效果優(yōu)于單藥作用，低濃度（fa＜50%）時，As2O3與BTZ協(xié)同效果最佳；高濃度（fa＞50%）時，其與DXM協(xié)同效果最顯著。As2O3與上述藥物在一定濃度范圍內(nèi)有協(xié)同作用，其協(xié)同作用的具體作用機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。此聯(lián)合用藥有望為CTCL的治療提供新選擇，但兩種藥物聯(lián)合時最佳劑量的選擇和理想治療時間的確定還需要進(jìn)一步的研究，以期獲得最大的治療效果和最小的毒副作用，為CTCL的臨床治療提供新思路和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 Li XW,Zhang YZ.The latest progress in primary cutaneous T-cell lymphoma[J].ShanDong Medical Journal,2012,52(20)：91-94.[李曉武,張翼鷟.原發(fā)皮膚T細(xì)胞淋巴瘤治療的最新進(jìn)展[J].山東醫(yī)藥,2012,52(20)：91-94.]

2 Vose JM.The international PTCL Project,international peripheral T-cell lymphoma(PTCL)clinical and pathologic review project：poor outcome by prognostic indices and lack of efficacy with anthracyclines[J].Blood,2005,106(11)：611-613.

3 Lengfelder E,Hofmann WK,Nowak D.Impact of arsenic trioxide in the treatment of acute promyelocytic leukemia[J].Leukemia, 2012,26(3)：433-442.

4 Keyhani M.Use of arsenic trioxide as a first-line single agent in the treatment of acute promyelocytic leukemia[J].J CIin Oncol, 2012,30(2)：217-222.

5 Hoffman E,Mielicki WP,Arsenic trioxide：impact on the growth and differentiation of cancer cells and possible use in cancer therapy [J].Postepy Hig Med Dosw(Online),2013,67：817-827.

6 Emadi A,Gore SD.Arsenic trioxide,an old drug rediscovered[J]. Blood Rev,2010,24(4-5)：191-199.

7 Gao YH,Zhang HP,Yang SM,Inactivation of Akt by arsenic trioxide induces cell death via mitochondrial-mediated apoptotic signaling in SGC-7901 human gastric cancer cells[J].Oncol Rep,2014, 31(4)：1645-1652.

8 Tun-Kyi A,Qin JZ,Oberholzer PA,et al.Arsenic trioxide down-regulates antiapoptotic genes and induces cell death in mycosis fungoides tumors in a mouse model[J].Ann Oncol,2008,19(8)：1488-1494.

9 Zhang XM,Wang T,Li XJ,et al.Effect of arsenic trioxide on proliferation of T cell lymphoma cell line Hut-78[J].Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research,2011,15(23)：4325-4329.[張學(xué)美,王 婷,李曉進(jìn),等.一定濃度下三氧化二砷對T細(xì)胞淋巴瘤Hut-78細(xì)胞株增殖的影響[J].中國組織工程研究與臨床康復(fù),2011,15(23)：4325-4329.]

10 Qian ZZ,Wang HQ,Fu K,et al.In vitro synergistic effect of bortezomib and pirarubicin on proliferation and apoptosis of T cell lymphoma cell line Hut-78[J].Chin J Hematol,2011,32(1)：47-51.[錢正子,王華慶,付 凱,等.硼替佐米與吡喃阿霉素聯(lián)合對T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系Hut-78細(xì)胞增殖和凋亡的影響[J].中華血液學(xué)雜志,2011, 32(1)：47-51.]

11 Nakaoka T,Ota A,Ono T,et al.Combined arsenic trioxide-cisplatin treatment enhances apoptosis in oral squamous cell carcinoma cells[J].Cell Oncol(Dordr),2014,37(2)：119-129.

12 Hideshima T,Catley L,Yasui H,et al.Perifosine,an oral bioactive novel alkylphospholipid,inhibits Akt and induces in vitro and vivo cytotoxicity in human multiple myeloma cells[J].Blood,2006,107 (10)：4053-4062.

13 Hayashi T,Hideshima T,Akiyama M,et al.Arsenic trioxide inhibits growth of human multiple myeloma cells in the bone marrow microenvironment[J].Mol Cancer Ther,2002,1(10)：851-860.

14 Duvic M,Olsen EA,Breneman D,et al.Evaluation of the long-term tolerability and clinical benefit of vorinostat in patients with advanced cutaneous T-cell lymphoma[J].Clin Lymphoma Myeloma,2009,9(6)：412-416.

15 Frye R,Myers M,Axelrod KC,et al.Romidepsin：a new drug for the treatment of cutaneous T-cell lymphoma[J].Clin J Oncol Nurs, 2012,16(2)：195-204.

16 Duvic M,Tetzlaff H,Gangar P,et al.PhaseⅡtrial of brentuximab vedotin(SGN-35)for CD30+cutaneous T-cell lymphomas and lymphoproliferative disorders[J].J Invest Dermatol,2013,133：S180.

17 Jia Y,Liu D,Xiao D,et al.Expression of AFP and STAT3 is involved in arsenic trioxide-induced apoptosis and inhibition of proliferation in AFP-producing gastric cancer cells[J].PLoS One, 2013,8(1)：e54774.

18 Kodigepalli KM,Dutta PS,Bauckman KA,et al.SnoN/SkiL expression is modulated via arsenic trioxide-induced activation of the PI3K/AKT pathway in ovarian cancer cells[J].FEBS Lett,2013,587 (1)：5-16.

19 Hussein MA.Nontraditional cytotoxic therapies for relapsed/refractory multiple myeloma[J].Oncologist,2002,7(Suppl 1)：20-29.

20 Hayashi T,Hideshima T,Akiyama M,et al.Arsenic trioxide inhibits growth of human multiple myeloma cells in the bone marrow microenvironment[J].Mol Cancer Ther,2002,1(10)：851-860.

21 Zinzani PL,Musuraca G,Tani M,et al.PhaseⅡtrial of proteasome inhibitor bortezomib in patients with relapsed or refractory cutaneous T-cell lymphoma[J].J Clin Oncol,2007,25(27)：4293-4297.

22.Marks PA,Discovery and development of SAHA as an anticancer agent[J].Oncogene,2007,26(9)：1351-1356.

23 Zhou Q,Dalgard CL,Wynder C,et al.Histone deacetylase inhibitors SAHA and sodium butyrate block G1-to-S cell cycle progression in neurosphere formation by adult subventricular cells[J]. BMC Neurosci,2011,12(1)：50-62.

24 Madeleine D,Youn HK,Timothy MK,et a1.Vorinostat(Suberoylanilide Hydroxamic Acid,SAHA)Provides Prolonged Clinical Benefit to Advanced Cutaneous T-Cell Lymphoma Patients：Updated Results of the Phase II b Multicenter Clinical Tria1[J].Blood(ASH Annual Meeting Abstracts),2006,108：Abstract 399.

25 Tong A,Zhang H,Li z,et al.Proteomic analysis of liver cancer cells treated with suberoylanilide hydroxamic acid[J].Cancer Chemother Pharmacol,2008,61(5)：791-802.

（2014-03-17收稿）

（2014-05-21修回）

（本文編輯：鄭莉）

In vitro synergistic effect of arsenic trioxide with conventional or new drugs on the proliferation of cutaneous T cell lymphoma cells Hut-78 and Hut-102

Chanjuan LI,Shanqi GUO,Bing XIA,Xin JIN,Xiaowu LI,Fulian QU,Yizhuo ZHANG

Yizhuo ZHANG;E-mail:yizhuozhang111@163.com
Tianjin Medical University Cancer Institute and Hospital,National Clinical Research Center for Cancer,Key Laboratory of Cancer Prevention and Therapy,Tianjin,Tianjin 300060,China
This work was supported by the Applicahtion Basis and Frontier Technology Research Plan of Tianjin City(No.13JCYBJC22800) and The Tianjin Education Commission Young Creative Talents Training Plan(No.1101109D)

Objective:To investigate the in vitro effect of arsenic trioxide(As2O3)alone and in combination with dexamethasone (DXM),etoposide(VP-16),methotrexate(MTX),bortezomib(BTZ),and suberoylanilide hydroxamic acid(SAHA)on the growth of human cutaneous T cell lymphoma(CTCL)cells Hut-78 and Hut-102.Methods:Hut-78 and Hut-102 cells were cultured with different concentrations of As2O3,DXM,VP-16,MTX,BTZ,and SAHA alone and As2O3in combination with DXM,VP-16,MTX,BTZ,or SAHA for 48 h.The effects of the different samples on Hut-78 and Hut-102 cell proliferation were determined by MTT assay.Analyses using CalcuSyn software were performed to determine whether the combination of As2O3with DXM,VP-16,MTX,BTZ,or SAHA induced synergistic cytoxicity.Results:As2O3,DXM,VP-16,MTX,BTZ,and SAHA alone significantly inhibited the growth of Hut-78 and Hut-102 cells in a dose-dependent manner,with a 50%inhibiting concentration of 5 μmol/L,500 μg/mL,2.5 μg/mL,1 μg/mL,10 μ mol/L,and 2.5 μmol/L individually after 48 h of culture.As2O3with DXM,VP-16,MTX,BTZ,or SAHA showed remarkable antitumor efficacy compared with that of individual applications.Conclusion:As2O3alone or combined with DXM,VP-16,MTX,BTZ,or SAHA significantly inhibited Hut-78 and Hut-102 cell growth in vitro.This study demonstrated that As2O3with DXM,VP-16,MTX, BTZ,or SAHApresents synergistic antitumor effects on CTCL cells and may be an optimal regimen in clinical trials of CTCL.

cutaneous T cell lymphoma cells,As2O3,conventional drugs,Bortezomib,suberoylanilide hydroxamicacid drug synergism

10.3969/j.issn.1000-8179.20140429

天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院血液科，國家腫瘤臨床醫(yī)學(xué)研究中心，天津市腫瘤防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（天津市300060）

*本文課題受天津市應(yīng)用基礎(chǔ)與前沿技術(shù)研究計(jì)劃（編號：13JCYBJC22800）和天津市教委創(chuàng)新人才中青年培養(yǎng)計(jì)劃（編號：1101109D）資助

張翼鷟 yizhuozhang111@163.com

李嬋娟 專業(yè)方向?yàn)槟[瘤血液病的基礎(chǔ)與臨床研究。

E-mail：lcj880924@163.com