p21與PCNA在子宮內(nèi)膜癌中表達水平及相關性研究*

孫 炯 楊留才 李仕紅 徐紅濤

(1.亭湖區(qū)人民醫(yī)院婦產(chǎn)科,江蘇 鹽城 224000； 2 鹽城衛(wèi)生職業(yè)技術學院, 江蘇 鹽城 224006)

子宮內(nèi)膜癌是一種比較常見的女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，其發(fā)病率僅次于宮頸癌，占女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤發(fā)病率的20%以上，并且發(fā)病率逐年上升[1]。研究表明，惡性腫瘤的發(fā)生和細胞周期的失控存在密切關系，而細胞因子表達量的紊亂往往直接導致了細胞周期的紊亂，甚至出現(xiàn)無限制生長，并且發(fā)展為腫瘤[2]。本次研究通過免疫組化染色的方法檢測p21Cipl/Wafl與增殖細胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen ,PCNA)在子宮內(nèi)膜癌中的表達水平，并研究兩者之間是否存在相關性，現(xiàn)報告如下。

1 資料和方法

1.1病例資料 選取自2009年1月至2012年12月在我院就診并確診為子宮內(nèi)膜癌患者268例作為實驗組，年齡35～72歲，平均年齡為(52.31±17.31)歲。臨床Ⅰ期患者有83 例，Ⅱ期有51例，Ⅲ期有69 例，Ⅳ期有65例。按照病理類型分為內(nèi)膜樣腺癌、腺鱗癌、透明細胞癌、乳頭狀腺癌，其中內(nèi)膜樣腺癌138例，腺鱗癌63例，透明細胞癌36例，乳頭狀腺癌31例。Ⅰ+Ⅱ期患者均予以行全子宮、雙側附件、大網(wǎng)膜、闌尾切除和腹膜后淋巴結清掃術，Ⅲ+Ⅳ期患者行腫瘤減滅術。腫瘤分化程度按FIGO判定的三級分級標準，其中高分化(G1)76 例，中分化(G2)124例，低分化(G3)68 例。另外選取同期在我院門診刮宮正常子宮內(nèi)膜組織80例作為對照組，平均年齡(53.26±17.43)歲。對照組人群經(jīng)過各項檢查排除了惡性腫瘤的可能。實驗組與對照組的年齡均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。

1.2免疫組化方法 所有標本常規(guī)脫水包埋，5 μm連續(xù)切片，石蠟切片常規(guī)脫蠟水化，微波修復5 min，3%過氧化氫孵育10 min去除內(nèi)源性過氧化物酶，加羊抗人PCNA一抗( 1∶200, 美國Santa Cruz公司) ，羊抗人p21一抗(1∶200, 美國Santa Cruz公司)，室溫過夜，PBST清洗，加辣根過氧化物酶標記的兔抗羊IgG二抗( 1-100，美國Santa Cruz公司)室溫孵育40 min；PBST清洗，加Elite-AP(英國Vector公司)孵育15min，PBST清洗，DAB底物液(英國Vector公司)顯色20 min，蘇木素復染10 s，常規(guī)酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，待干燥后光鏡下觀察攝片。

1.3染色結果判斷 染色結果顯示PCNA定位于胞核中，p21定位于胞漿中，以細胞核或者細胞漿出現(xiàn)棕黃色染色作為陽性。在高倍鏡下隨機選取5個視野，每個視野計數(shù)200個細胞，根據(jù)陽性細胞在全部組織細胞中所占比例判定實驗結果，p21以陽性細胞數(shù)占全部組織細胞數(shù)比例<10%判斷為(-)，陽性細胞數(shù)占全部組織細胞數(shù)比例≥10%判斷為(+)；PCNA陽性細胞數(shù)占全部組織細胞數(shù)比例<50%判斷為低增殖，陽性細胞數(shù)占全部組織細胞比例陽性細胞數(shù)≥50%判斷為高增殖。

1.4統(tǒng)計學方法 所有的數(shù)據(jù)使用SPSS13.0統(tǒng)計學軟件進行分析，各組樣本之間的比較采用χ2檢驗進行統(tǒng)計分析，PCNA和p21之間的相關關系采用Spearman等級相關檢驗進行統(tǒng)計分析，以P≤0.05作為有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1實驗組與對照組PCNA和p21的表達比較 見表1。

表1 實驗組與對照組PCNA和p21表達情況比較

2.2子宮內(nèi)膜癌臨床病理指標與p21和PCNA表達的關系 見表2。

表2 子宮內(nèi)膜癌臨床病理指標與p21和PCNA表達情況的關系

2.3p21和PCNA表達的相關性 p21和PCNA在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達呈負相關(r=-0.79，P<0.05)，見表3。

表3 p21和PCNA表達的相關性

3 討 論

本次研究通過檢測p21和PCNA在子宮內(nèi)膜癌以及正常組織中的表達情況，并且檢測二者之間的相關性。研究結果發(fā)現(xiàn)p21在子宮內(nèi)膜癌中的陽性表達率低于正常組織，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；同時，PCNA在子宮內(nèi)膜癌的高增殖率高于正常組織，差異也具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。通過研究子宮內(nèi)膜癌臨床病理指標和p21、PCNA的表達之間的關系，結果同樣發(fā)現(xiàn)，PCNA和p21的表達和年齡無關，但是在較晚臨床分期、較低分化和有淋巴結轉(zhuǎn)移患者的p21的陽性表達率低于較早臨床分期、較高分化和沒有淋巴結轉(zhuǎn)移的患者，并且差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。而PCNA在較早臨床分期、較高分化和沒有淋巴結轉(zhuǎn)移的患者中的高增殖率低于較晚臨床分期、較低分化和有淋巴結轉(zhuǎn)移患者并且差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

p21是一種重要的細胞周期調(diào)控因子，研究表明p21在多種惡性腫瘤特別是實體腫瘤如胃癌[3]、食管癌[4]的表達出現(xiàn)異常，主要表現(xiàn)為表達水平的下調(diào)。p21是位于p53基因下游的細胞周期素依賴性激酶抑制因子，p21通過和p53結合，阻止DNA損傷后組織細胞進入S期，減少了受損DNA的復制和積累，減少惡性腫瘤的發(fā)生，而在惡性腫瘤中，p21的表達量明顯下調(diào)，導致了細胞增殖明顯增加[5]。上述研究的結果表明，p21的表達水平的改變可能和惡性腫瘤的發(fā)生有關。

研究表明，PCNA有細胞核合成是DNA聚合酶δ的輔助蛋白，并且主要定位于細胞核內(nèi)發(fā)揮作用[6]。在細胞周期中PCNA表達水平從G1期出現(xiàn)上調(diào)，到S期PCNA的表達水平達到最頂峰，到G2期PCNA的表達水平開始下調(diào)[7]，同時，PCNA主要在增殖細胞中表達，因此PCNA可以作為腫瘤增殖狀態(tài)一個重要的指標[8]。國內(nèi)學者韋瑞紅等人[9]通過研究PCNA在子宮內(nèi)膜癌細胞中的表達情況，結果發(fā)現(xiàn)癌細胞的PCNA陽性表達率明顯高于正常直腸黏膜組織，和我們的研究結果基本一致。

此外，我們的研究結果還顯示，PCNA與p21在子宮內(nèi)膜癌中的陽性表達率呈負相關，通過對乳腺癌腫瘤的研究表明，p21的陽性表達率與腫瘤分化程度相關，p21的表達越低，腫瘤分化越差，PCNA 的陽性表達率也越高，而腫瘤的增殖活性越高[10]，和我們的研究結果也基本一致。

我們的研究結果表明，PCNA和p21在子宮內(nèi)膜癌的組織中高表達，并且其表達水平和臨床分期、病理分級、以及淋巴結轉(zhuǎn)移相關；PCNA和p21在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達呈負相關，提示PCNA和p21共同促進子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生和發(fā)展。

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