通痹止痛顆粒中淫羊藿的提取工藝研究

鄭 莉

（防城港市中醫(yī)醫(yī)院，廣西 防城港 538021 ）

通痹止痛顆粒中淫羊藿的提取工藝研究

鄭 莉

（防城港市中醫(yī)醫(yī)院，廣西 防城港 538021 ）

目的研究通痹止痛顆粒中淫羊藿的最佳提取工藝。方法以淫羊藿苷為指標(biāo)，分別比較醇提與水提、不同濃度乙醇回流提取，并用正交試驗法優(yōu)選通痹止痛顆粒中淫羊藿的提取工藝。結(jié)果最佳工藝為70%乙醇15倍量，浸泡1 h，回流提取2次，每次1.5 h。結(jié)論該工藝合理可行，含量測定方法穩(wěn)定可靠。

通痹止痛顆粒；提取工藝；淫羊藿；正交試驗

通痹止痛顆粒是由擬黑多刺蟻、獨活、威靈仙、延胡、淫羊藿、續(xù)斷、雞血藤、甘草等制成的復(fù)方中藥顆粒，具有強(qiáng)筋壯骨，祛風(fēng)通絡(luò)，散寒除濕，通痹止痛的功效，用于風(fēng)寒濕邪閉阻經(jīng)絡(luò)，氣血運行不暢所致痹病。淫羊藿的主要成分為黃酮類[1,2]，淫羊藿苷是黃酮類中的主要活性成分，具有顯著的藥理作用[3,4]。本實驗以淫羊藿苷為指標(biāo)，分別比較醇提與水提、不同濃度乙醇回流提取，并用正交試驗法優(yōu)選通痹止痛顆粒中淫羊藿的提取工藝，試圖找出最佳提取方法。

1 儀器與材料

1.1 儀器：高效液相色譜儀：島津LC-6A、CR-3A數(shù)據(jù)處理機(jī)、SPD-6A紫外可見檢測器。TG332A型微量分析天平（上海天平儀器廠）。

1.2 材料：淫羊藿苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號773-9412）；乙腈為色譜純，其他試劑為分析純，水為注射用水。

2 方法與結(jié)果

2.1 醇提與水提的比較：稱取淫羊藿粗粉100 g兩份，一份用60%乙醇回流提取二次，每次加10倍量60%乙醇，回流1 h，濾過，合并濾液，回收乙醇，濃縮至600 mL；另一份加水浸泡1 h，煎煮二次，每次加水12倍量，煎煮2 h，濾過，合并濾液，濃縮至600 mL。取上述兩種溶液各2 mL，加聚酰胺0.2～0.3 g拌勻，水浴加熱至近干，加至聚酰胺小柱（玻璃柱內(nèi)徑1.2 cm，聚酰胺高5 cm）上，容器以水適量多次洗滌，移入小柱內(nèi)，并以水50 mL洗脫，棄去水液，再以醋酸乙酯150 mL洗脫，收集醋酸乙酯洗脫液，蒸干，殘留物精密加入70%乙醇10 mL使溶解，作為供試品溶液。按《中國藥典》2005年版一部淫羊藿含量測定項下方法[5]測定其淫羊藿苷含量，結(jié)果見表1。

表1 淫羊藿乙醇回流提取與水煎煮提取的比較

2.2 不同濃度乙醇回流提取的比較：分別稱取淫羊藿粗粉100 g，以50%、60%、70%、80%、90%乙醇回流提取二次，每次1 h，每次加10倍量乙醇，同“2.1”項下方法測定其淫羊藿苷含量，結(jié)果見表2。

表2 淫羊藿不同濃度乙醇回流提取的比較

2.3 70%乙醇回流提取工藝優(yōu)選：根據(jù)經(jīng)驗和文獻(xiàn)資料[6]，乙醇量（A）、浸泡時間（B）、回流時間（C）、回流次數(shù)（D）是影響加熱回流提取效果的主要因素，以提取液中淫羊藿苷含量為指標(biāo)，按4個因素，每因素3水平，用L9（34）正交表進(jìn)行正交試驗，因素水平見表3。每次試驗取淫羊藿粗粉100g，試驗結(jié)果見表4，方差分析見表5。

表3 因素水平表

表4 淫羊藿70%乙醇回流提取工藝條件正交試驗表

表5 淫羊藿70%乙醇回流提取工藝條件方差分析表

2.4 結(jié)果與分析：從表1可以看出，乙醇回流法優(yōu)于水煎煮法。從表2可以看出，隨乙醇濃度提高，所提得淫羊藿苷總量增加。70%、80%、90%乙醇所提得淫羊藿苷總量相差不大，重復(fù)試驗3次，結(jié)果無顯著性差異（P＞0.05）。從節(jié)約成本角度考慮，以70%乙醇回流提取較佳。

從試驗分析結(jié)果可看出，乙醇量（A）、回流時間（C）、回流次數(shù)（D）對淫羊藿苷含量均有影響（P＜0.1～0.01），其影響大小順序為D＞A＞C。浸泡時間（B）離差平方和最小，近似作為誤差Sse。經(jīng)直觀比較分析，同時結(jié)合生產(chǎn)實際和成本，優(yōu)選水平最佳方案應(yīng)為A3B1C3D2，即每次加入70%乙醇15倍量，浸泡1 h，回流提取2次，1.5小時/次。

2.5 工藝驗證：為驗證優(yōu)選工藝的可靠性和重復(fù)性，按最佳工藝平行制備3份樣品，測得淫羊藿苷的平均含量為0.17%，處于較高水平。表明該工藝合理可行，具可操作性和重復(fù)性。

3 討 論

由于含量測定是采用高效液相色譜法，為排除其他組分的干擾，以聚酰胺柱凈化處理樣品。操作過程中，為保障淫羊藿苷充分被聚酰胺吸附，上柱前盡量使拌樣聚酰胺蒸干。選擇醋酸乙酯為洗脫溶媒，經(jīng)多次試驗，用量150 mL后無待測成分流出。

本實驗以淫羊藿苷為指標(biāo)，分別比較醇提與水提、不同濃度乙醇回流提取，并用正交試驗法優(yōu)選通痹止痛顆粒中淫羊藿的提取工藝，最后確定其最佳提取工藝為：每次加入70%乙醇15倍量，浸泡1 h，回流提取2次，每次1.5 h。

[1] 劉信順,楊濱.淫羊藿屬植物的化學(xué)成分[J].中草藥,1990,21(9):23.

[2] 郭寶林,余竟光.淫羊藿化學(xué)成分的研究[J].中國中藥雜志,1996, 21(5):290-292.

[3] 王敏,劉崇銘.淫羊藿苷對血管平滑肌的作用[J].沈陽藥學(xué)院學(xué)報,1993,10(3):185-190.

[4] 許蘭芝,陳維寧.淫羊藿總黃酮對腎上腺素能受體阻斷作用的研究[J].中國藥理學(xué)通報,1994,10(4):311-313.

[5] 國家藥典委員會.中國藥典.一部[S].北京,化學(xué)工業(yè)出版社,2005: 229.

[6] 肖崇厚,楊松松,洪筱坤.中藥化學(xué)[M].上海,上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1987:21.

R282.710.3

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1671-8194（2014）36-0053-02