戊二醛致畸試驗(yàn)

許崇輝 謝 力 潘 芳 溫巧玲 劉慧智 李華燕 李妙珍

(廣東出入境檢驗(yàn)檢疫局 廣東廣州 510623)

1 前言

戊二醛被譽(yù)為繼甲醛和環(huán)氧乙烷消毒之后化學(xué)消毒滅菌劑發(fā)展史上的第三個(gè)里程碑，適用于醫(yī)療器械和耐濕忌熱的精密儀器的消毒與滅菌，廣泛用于醫(yī)療、制藥等行業(yè)[1]。由于戊二醛是一種具有揮發(fā)性和刺激性的化學(xué)試劑，因此，職業(yè)接觸戊二醛的生產(chǎn)工人和醫(yī)務(wù)工作者的職業(yè)接觸暴露具有途徑多（可經(jīng)皮膚/黏膜、經(jīng)呼吸道和經(jīng)口3個(gè)途徑）、時(shí)間長(zhǎng)（每個(gè)工作日數(shù)小時(shí)和數(shù)十年的職業(yè)工作）的特點(diǎn)，個(gè)別員工可能一輩子1/4時(shí)間接觸到戊二醛，同時(shí)，有相當(dāng)一部分職業(yè)接觸者是女性工作者。

為了研究戊二醛長(zhǎng)期、低濃度的接觸對(duì)女性工作者等機(jī)體的影響，本研究在對(duì)某品牌25%戊二醛溶液進(jìn)行了急性毒性實(shí)驗(yàn)、遺傳毒性實(shí)驗(yàn)、局部接觸毒性及90d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)等毒理學(xué)第一、第二、第三階段研究的基礎(chǔ)上[2-5]，開(kāi)展了戊二醛對(duì)大鼠致畸試驗(yàn)[6]，研究戊二醛對(duì)大鼠母體毒性、胚胎毒性和致畸作用，以了解接觸戊二醛對(duì)懷孕婦女和胎兒有無(wú)潛在的特殊損害。

2 材料與方法

2.1 材料

2.1.1 受試物樣本和受試物溶液

2.1.1.1 受試物樣本

市售戊二醛溶液：分析純，標(biāo)稱濃度為25%，廣東科密歐戊二醛化學(xué)試劑產(chǎn)品，批號(hào)10160586，樣本無(wú)色有刺激氣味，易溶于水。

2.1.1.2 受試物溶液

試驗(yàn)時(shí)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)用蒸餾水臨時(shí)稀釋成不同濃度試驗(yàn)用液。

2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和飼料

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和飼料均由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心（實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證編號(hào)：SCXK（粵）2008-0002）提供。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采用SD大鼠，雌性大鼠80只，雄鼠40只。開(kāi)始實(shí)驗(yàn)時(shí)體重192.8-202.7 g，合格證號(hào)：NO.4400436254。

2.1.3 實(shí)驗(yàn)環(huán)境、主要儀器和試劑

2.1.3.1 實(shí)驗(yàn)環(huán)境

SPF級(jí)動(dòng)物房和普通級(jí)動(dòng)物房（實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證編號(hào)：SYXK（粵）2008-0086）。實(shí)驗(yàn)期間，室溫22℃±2℃，相對(duì)濕度58%-65%。

2.1.3.2 儀器設(shè)備

實(shí)驗(yàn)室常用設(shè)備、游標(biāo)卡尺（百分尺），生物顯微鏡及體視顯微鏡：奧林巴斯。

2.1.3.3 試劑

甲醛、冰乙酸、2，4，6－三硝基酚、氫氧化鉀、甘油、水合氯醛、茜素紅：均為分析純，購(gòu)自廣州市化學(xué)試劑公司。

2.2 方法[6]

2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組、數(shù)量、體重和性別

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采用SD大鼠，雌性80只，隨機(jī)分為4組,分別為低劑量組、中劑量組、高劑量組和陰性（空白）對(duì)照組，每組20只；雄鼠雄性40只，同樣分為4組，每組10只，在實(shí)驗(yàn)環(huán)境下適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。開(kāi)始實(shí)驗(yàn)時(shí)體重192.8-202.7g，合格證號(hào)：NO.4400436254。根據(jù)以前戊二醛急性毒性試驗(yàn)和90d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，設(shè)致畸試驗(yàn)的4組，即高劑量40mg/kg體重、中劑量10mg/kg體重、低劑量4mg/kg體重和空白對(duì)照組。

2.2.2 實(shí)驗(yàn)過(guò)程

2.2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物交配和受孕

按雌雄比例2:1的比例合籠過(guò)夜，次日用陰道涂片方式檢查有無(wú)受孕，發(fā)現(xiàn)涂片有精子的作為受孕成功的大鼠，定為妊娠第0天，按隨機(jī)分組的方式分到各實(shí)驗(yàn)組，每組10只。在受孕的第7天-第16天，每天通過(guò)飲水方式按劑量給予受試物。在受孕的第0天、第7天、第12天、第16天和第20天分別稱各孕鼠體重，并根據(jù)各組體重的變化調(diào)整飲水量。于妊娠第20天處死孕鼠。

2.2.2.2 檢測(cè)指標(biāo)

剖腹取出子宮稱重、記錄并檢查胚胎、死胎及活胎數(shù)。逐一記錄胎仔體重、體長(zhǎng)、檢查胎鼠外觀有無(wú)異常；在體視顯微鏡下檢查胎鼠骨標(biāo)本，逐一檢查骨骼；胎鼠內(nèi)臟檢查，檢查各器官的大小、形狀和相對(duì)位置。

2.2.3 數(shù)據(jù)處理

各組數(shù)據(jù)分別錄入SPSS數(shù)據(jù)庫(kù)，計(jì)算均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差；各劑量組與對(duì)照組比較，用t檢驗(yàn)方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料數(shù)據(jù)以“均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±SD）”的形式表示。

3 結(jié)果

3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般觀察和孕鼠體重增長(zhǎng)

在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間，各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物未見(jiàn)外觀體征、行為活動(dòng)和飲食方面異常，孕鼠在受孕的第7天-第16天，各組動(dòng)物一般情況也大致正常，未見(jiàn)明顯中毒表現(xiàn)；在受孕的第0天、第7天、第12天、第16天和第20天，陰性對(duì)照組與各劑量給藥組體重相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但在第20天，高劑量組體重增長(zhǎng)有小于陰性對(duì)照組和低、中劑量組體重趨勢(shì)，存在劑量-效應(yīng)關(guān)系，見(jiàn)表1。

表1 各組孕鼠平均體重增長(zhǎng)趨勢(shì)表（n=10）

3.2 對(duì)孕鼠胚胎發(fā)育的影響

與陰性對(duì)照組比較，高劑量組的子宮重、黃體數(shù)、著床數(shù)活胎和胎仔總數(shù)均見(jiàn)顯著性減少(P<0.05)，在低、中、高三個(gè)劑量組中也存在劑量-效應(yīng)關(guān)系。其余各劑量組指標(biāo)與陰性對(duì)照組相比差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表2。

表2 各組別孕鼠檢查情況表（n=10）

（續(xù)表）

3.3 對(duì)胎仔生長(zhǎng)發(fā)育的影響

與陰性對(duì)照組比較，各劑量組胎仔體重和身長(zhǎng)的差別無(wú)顯著性 (P>0.05)，結(jié)見(jiàn)表3。各組胎仔外觀形態(tài)、胎仔內(nèi)臟和胎仔骨骼檢查未見(jiàn)畸形。

4 討論

4.1 對(duì)孕鼠一般情況和體重增加的影響

從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看，在第7天-第16天給予受試物期間及其后，各劑量組和陰性對(duì)照組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般情況基本相同，未觀察到有中毒現(xiàn)象，各組體重?zé)o顯著性差別。表明在該實(shí)驗(yàn)劑量下，戊二醛對(duì)大鼠未發(fā)現(xiàn)一般毒性（或母體毒性）。值得注意的是，在第20天，高、中劑量組體重與空白對(duì)照組、低劑量組相差雖無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)的顯著意義(P>0.05)，但在高、中、低3組之間存在劑量-效應(yīng)關(guān)系，見(jiàn)表1。這一看似矛盾的結(jié)果，其實(shí)與各組大鼠內(nèi)胚胎發(fā)育情況相關(guān)。

4.2 對(duì)孕鼠胚胎的影響

在本實(shí)驗(yàn)中，與空白對(duì)照組比較，高劑量組的子宮重、黃體數(shù)、著床數(shù)活胎和胎仔總數(shù)均見(jiàn)顯著性減少(P<0.05)，中劑量組也有這趨勢(shì)。整個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果存在空白對(duì)照組和低、中、高劑量組的劑量-效應(yīng)關(guān)系，見(jiàn)表2。這結(jié)果與表1中孕鼠第20天的體重有很好的符合性。根據(jù)組織胚胎學(xué)，胚胎的發(fā)育過(guò)程，是前期對(duì)母體的體重增加影響?。缓笃谟捎诮M織器官快速成長(zhǎng)，對(duì)母體體重的增加影響大。這是表1中各組孕鼠體重在前期沒(méi)有差別，但第20天又有劑量-效應(yīng)關(guān)系差別的原因。

黃體數(shù)、著床數(shù)、胎仔總數(shù)和子宮重是生理性有相互關(guān)聯(lián)的指標(biāo)，均是雌性大鼠卵細(xì)胞在子宮著床發(fā)育的過(guò)程[7]。從表2可見(jiàn)，各組孕鼠卵巢重?zé)o差別(P>0.05)；而高劑量組黃體數(shù)、著床數(shù)、胎仔總數(shù)、活胎數(shù)和子宮重明顯低于對(duì)照組(P<0.05)，中劑量組雖未在低明顯低于對(duì)照組(P>0.05)，但低、中、高三個(gè)劑量組中也存在劑量-效應(yīng)關(guān)系。這說(shuō)明高劑量組水平（40mg/kg體重）的戊二醛可明顯影響大鼠受孕過(guò)程，即可能有胚胎毒性。

4.3 對(duì)胎兒生長(zhǎng)發(fā)育的影響

與空白對(duì)照組比較，各劑量組胎仔體重和身長(zhǎng)的差別無(wú)顯著性 (P>0.05)，見(jiàn)表3。各組胎仔外觀形態(tài)、胎仔內(nèi)臟和胎仔骨骼檢查未見(jiàn)畸形。這些結(jié)果說(shuō)明，在實(shí)驗(yàn)劑量下，戊二醛對(duì)已發(fā)育成形的胎兒沒(méi)有影響，戊二醛沒(méi)有致畸作用。

表3 各組別胎鼠平均體重與平均體長(zhǎng)（n=10）

5 結(jié)論

在本實(shí)驗(yàn)條件下，高劑量組水平（40mg/kg體重）的戊二醛可明顯影響大鼠受孕過(guò)程，可能有胚胎毒性。在各實(shí)驗(yàn)劑量下，未發(fā)現(xiàn)戊二醛對(duì)孕鼠母體和胎兒生長(zhǎng)發(fā)育有明顯的毒性，未發(fā)現(xiàn)戊二醛有致畸作用。

［1］薛廣波，李云先，顧春英，等.現(xiàn)代消毒學(xué)[M].北京：人民軍醫(yī)出版社，2002：311-325.

［2］許崇輝，劉慧智，溫巧玲，等.戊二醛急性毒性研究[J].檢驗(yàn)檢疫學(xué)刊，2012，22（4）：22-24.

［3］許崇輝，潘芳，溫巧玲，等.戊二醛遺傳毒性研究[J].檢驗(yàn)檢疫學(xué)刊，2013，23（1）：7-10.

［4］許崇輝，溫巧玲，劉慧智，等.戊二醛局部接觸毒性研究[J].檢驗(yàn)檢疫學(xué)刊，2013，23（5）：21-23.

［5］許崇輝，潘芳，劉慧智，等.戊二醛90天喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)研究[J].檢驗(yàn)檢疫學(xué)刊，2014，24（1）：1-4.

［6］GB15193.14-2003 致畸試驗(yàn)[S].

［7］周宗燦.毒理學(xué)教程[M].北京：北京大學(xué)醫(yī)學(xué)出版社，2006：238-258