李淑嬌,唐于平,李偉霞,沈 娟,郭建明,段金廒
(南京中醫(yī)藥大學(xué)江蘇省中藥資源產(chǎn)業(yè)化過程協(xié)同創(chuàng)新中心/中藥資源產(chǎn)業(yè)化與方劑創(chuàng)新藥物國(guó)家地方聯(lián)合工程研究中心,江蘇南京 210023)
藥物的劑量和臨床效應(yīng)之間有著直接的關(guān)系,在一定范圍內(nèi)同一藥物的劑量(或濃度)增加或減少時(shí),藥物的效應(yīng)隨之增強(qiáng)或減弱,藥物的這種劑量(或濃度)與效應(yīng)之間的關(guān)系稱為量效關(guān)系。方藥用量是中醫(yī)臨床實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)積累的結(jié)晶,在中醫(yī)臨床辨證準(zhǔn)確、治則治法正確的前提下,恰當(dāng)?shù)挠盟巹┝渴潜U现兴幇踩行У年P(guān)鍵[1]。而配伍是方劑中各藥味的內(nèi)在關(guān)系,中醫(yī)治病多以數(shù)味中藥配伍形成的方劑為載體,通過多組分作用在多靶點(diǎn),融補(bǔ)充、整合、調(diào)節(jié)等協(xié)同增效而起到綜合治療作用[2]。補(bǔ)血?jiǎng)┻m用于血虛證,血虛易致血滯,故常與活血化瘀藥配伍使用,以去瘀生新。當(dāng)歸有補(bǔ)血活血、調(diào)經(jīng)止痛之功效,為補(bǔ)血之圣藥;與活血化瘀之紅花配伍,以奏補(bǔ)血調(diào)血之功。本課題組利用已建立的《中醫(yī)方劑大辭典》數(shù)據(jù)庫(kù),基于關(guān)聯(lián)規(guī)則方法對(duì)中醫(yī)古方當(dāng)歸-紅花配伍用藥規(guī)律進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,結(jié)果顯示在十萬余首方劑中當(dāng)歸-紅花配伍應(yīng)用頻次高達(dá)1 222次,其中配比為1∶1出現(xiàn)的概率最大[3]。因此,在本實(shí)驗(yàn)中,采用乙酰苯肼 +環(huán)磷酰胺法進(jìn)行造模,先以1∶1比例為基礎(chǔ)探討當(dāng)歸-紅花配伍使用時(shí)的最佳補(bǔ)血?jiǎng)┝浚缓筮x擇當(dāng)歸-紅花不同配比(1∶0、4∶1、2∶1、3∶2、1∶1、2∶3、1∶2、1∶4、0∶1)為研究對(duì)象,觀察其對(duì)小鼠血虛模型的影響,探討當(dāng)歸-紅花有效應(yīng)用的配伍劑量與比例,為現(xiàn)代臨床應(yīng)用當(dāng)歸與紅花提供科學(xué)依據(jù)。
1.1 動(dòng)物 清潔級(jí)♀ ICR小鼠,體質(zhì)量18~22 g,由揚(yáng)州大學(xué)比較醫(yī)學(xué)中心提供,合格證號(hào)SCXK(蘇)2012-0004。
1.2 試劑與儀器 注射用環(huán)磷酰胺(CTX,江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司,批號(hào):09121321);N-乙酰苯肼(APH,天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所,批號(hào):20081104);復(fù)方阿膠漿(EJ,山東東阿阿膠股份有限公司,批號(hào):1301078);乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-2Na,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司,批號(hào):T20090224);XS800i型全自動(dòng)血液分析儀(Sysmex-800,日本);R2002k-1 20 L旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀;SH2-95A型循環(huán)水式多用真空泵;電子分析天平(BT125D,sartorius,德國(guó))。
1.3 藥材的鑒定與提取 當(dāng)歸〔Angelica sinensis(Oliv.)Diels.〕、紅花(Carthamus tinctorius L.)藥材經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)王春根教授鑒定,符合《中國(guó)藥典》2010年版標(biāo)準(zhǔn)。選擇9個(gè)不同配比的當(dāng)歸-紅花(1∶0、4∶1、2∶1、3∶2、1∶1、2∶3、1∶2、1∶4、0∶1),按比例稱取當(dāng)歸和紅花,混合,共4.5 kg,用8倍量的水進(jìn)行熱回流提取2 h,自然冷卻后,傾出水溶液,再加入6倍量的水進(jìn)行2次熱回流提取各1.5 h,自然冷卻后,傾出水溶液,過濾藥渣,合并3次水提液進(jìn)行真空減壓濃縮至1 g生藥·g-1浸膏,得到制備樣品,冷藏備用。
2.1 血虛小鼠模型的建立 模型組、陽(yáng)性對(duì)照組及模型給藥組小鼠分別于實(shí)驗(yàn)的d 1和d 4皮下注射APH生理鹽水溶液,劑量分別為20和10 mg·kg-1,d 4~7腹腔注射CTX生理鹽水溶液,劑量均為20 mg·kg-1。其中d 4先皮下注射APH生理鹽水溶液,2 h后再腹腔注射CTX生理鹽水溶液。整個(gè)模型建立過程共 7 d[4]。
2.2 分組與給藥
2.2.1 基于當(dāng)歸-紅花1∶1優(yōu)選最佳補(bǔ)血濃度60只小鼠按體重隨機(jī)分為6組,每組10只,分別為正常組(N1)、模型組(M1)、復(fù)方阿膠漿陽(yáng)性組(EJ1)、當(dāng)歸-紅花1∶1臨床等效量的1、3和5倍劑量組(分別為 GH 1∶1低、GH 1∶1中和 GH 1∶1高),灌胃給藥劑量分別為1.95、5.85和9.75 g·kg-1·d-1。自造模之日起,陽(yáng)性組小鼠灌胃給予復(fù)方阿膠漿0.2 ml·d-1,正常組和模型組小鼠灌胃給予0.2 ml·d-1生理鹽水。各組小鼠均連續(xù)灌胃7 d。動(dòng)物給藥劑量按體表面積換算系數(shù)計(jì)算:人臨床用量×0.0026/20×1 000×臨床等效量的倍數(shù)(g生藥·kg-1小鼠體重)。
2.2.2 基于優(yōu)選的最佳補(bǔ)血濃度評(píng)價(jià)當(dāng)歸-紅花不同配比的補(bǔ)血效應(yīng) 120只小鼠按體重隨機(jī)分為12組,每組 10只,分別為正常組(N2)、模型組(M2)、復(fù)方阿膠漿陽(yáng)性組(EJ2)和當(dāng)歸-紅花不同配比給藥組(分別為 GH 1∶4、GH 4∶1、GH 3∶2、GH 2∶3、GH 1∶2、GH 2∶1、GH 1∶1、GH 1∶0和GH 0∶1組)。自造模之日起,陽(yáng)性組每只小鼠灌胃給予復(fù)方阿膠漿0.2 ml·d-1,正常組每只小鼠灌胃給予0.2 ml·d-1生理鹽水,GH各組小鼠均灌胃給藥 1.95 g·kg-1·d-1,連續(xù)給藥 7 d。
2.3 檢測(cè)指標(biāo) 每天觀察各組小鼠行為狀態(tài)并稱重。各組小鼠均于末次灌胃給藥0.5 h后眼底靜脈叢采血測(cè)血常規(guī)。血常規(guī)采用XS800i型全自動(dòng)血液分析儀進(jìn)行檢測(cè),主要包括外周血中白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC/109·L-1)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(RBC/1012·L-1)、血紅蛋白 (HGB/g· L-1)、中性 粒 細(xì)胞 比率(GR/%)、單核細(xì)胞比率(MO/%)、淋巴細(xì)胞比率(LY/%)和血小板計(jì)數(shù)(PLT/109·L-1),共 7項(xiàng)指標(biāo)。眼眶采血后小鼠脫頸椎處死取胸腺、脾臟和肝臟稱重,按公式計(jì)算胸腺指數(shù)(thymus index,TI)、脾臟指數(shù)(spleen index,SI)和肝臟指數(shù)(liver index,LI),計(jì)算公式分別為 TI=胸腺重(mg)/鼠重(g);SI=脾重(mg)/鼠重(g);LI=肝重(mg)/鼠重(g)。
2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 當(dāng)歸-紅花不同配比的補(bǔ)血作用評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)是基于當(dāng)歸-紅花1∶1優(yōu)選出最佳補(bǔ)血濃度后進(jìn)行的實(shí)驗(yàn),而兩次實(shí)驗(yàn)均設(shè)置了正常組和模型組,由于兩次實(shí)驗(yàn)正常組小鼠的血常規(guī)有微小波動(dòng),為了在同一水平對(duì)兩次實(shí)驗(yàn)的模型組和給藥組進(jìn)行比較,故以正常組1小鼠的血常規(guī)為基準(zhǔn),將正常組2小鼠的血常規(guī)進(jìn)行校正,校正因子f=VN1/VN2(VN1:正常組 1小鼠各指標(biāo)值,VN2:正常組2小鼠各指標(biāo)值),第2次實(shí)驗(yàn)中的模型組和給藥組各指標(biāo)均乘以其校正因子得到校正值,然后對(duì)校正值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 11.0軟件中的Descriptives進(jìn)行統(tǒng)計(jì),實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用ˉx±s表示;與正常組和模型組比較采用軟件中的ANOVA進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
2.5 效應(yīng)整合 依據(jù)多指標(biāo)綜合指數(shù)法,首先對(duì)外周血常規(guī)及臟器指數(shù)等多個(gè)指標(biāo)進(jìn)行歸一化處理即標(biāo)化,然后依據(jù)本課題組前期查閱文獻(xiàn)并綜合專家意見后給出的權(quán)重系數(shù)對(duì)各效應(yīng)指標(biāo)進(jìn)行效應(yīng)整合,指標(biāo) WBC、RBC和 HGB取權(quán)重為 2,LY、MO、GR、TI、SI和 LI取權(quán)重為 1[5-8]。各指標(biāo)數(shù)據(jù)的標(biāo)化值乘以各自權(quán)重系數(shù)后的加和值即為該藥物對(duì)于血虛小鼠補(bǔ)血作用的總效應(yīng)值(total effect,TE)。
3.1 外觀狀態(tài) 正常小鼠神氣矯健,行動(dòng)敏捷,眼睛明亮,呈鮮粉紅色,鼻唇潔凈潮潤(rùn)呈淡粉紅色,尾圓色粉紅,背腰平直,皮毛光澤而密。模型組小鼠在造模后,出現(xiàn)神疲乏力,行動(dòng)遲緩,嗜睡,團(tuán)縮弓腰,喘促心悸,面、眼、耳、尾蒼白而涼,毛蓬豎而少光澤,血暗紅,尿黃。各給藥組小鼠狀況比模型組有所改善。
Tab 1 Peripheral blood index changes of the experimental period(±s,n=10)
Tab 1 Peripheral blood index changes of the experimental period(±s,n=10)
#P<0.05,##P<0.01 vs normal group;*P<0.05,**P<0.01 vs model group.
Group WBC/109·L-1 GR/% LY/% MO/% RBC/1012·L-1 HGB/g·L-1 PLT/109·L-1 N1 4.80±1.47 7.02±4.33 77.75±2.16 17.18±3.71 7.12±0.53 116.28±7.41 362.44±30.32 M1 11.6±2.98# 23.91±8.27##50.21±6.59#25.89±5.95#5.24±0.24#102.62±7.05#420.43±33.18#EJ1 5.18±1.32*30.85±10.13 49.33±8.27 23.33±4.01 5.37±0.50 109.33±10.26 379.50±35.31 GH 1∶1(low) 4.82±0.67*31.26±6.59 51.18±8.83 20.52±1.79*5.27±0.43 114.00±8.72*360.50±35.31*GH 1∶1(middle) 5.07±1.81*21.24±8.44 52.46±4.80 24.72±5.33 5.51±0.31 109.75±1.50 363.00±39.53*GH1∶1(high) 4.97±1.85*25.80±4.03 57.15±12.29 23.33±3.54 6.05±0.29*104.5±2.38 419.74±51.75 M2 42.25±6.64##15.35±2.20#49.61±6.59#29.50±5.95##4.21±0.88##100.91±6.90#641.66±49.23##EJ2 22.81±3.65**10.18±1.81*79.84±12.17**13.59±3.08**5.92±0.48*115.47±7.10*589.51±33.65 GH 1∶4 30.32±4.56* 7.75±1.09*77.33±12.04*14.46±3.66*5.58±0.36*114.03±3.62*600.22±60.84 GH 4∶1 38.51±6.05 3.20±0.94**81.63±1.48**13.11±1.48**5.50±0.17*117.46±5.80*610.38±76.55 GH 3∶2 32.64±6.98* 5.32±0.64**78.00±14.18*16.11±5.16*5.41±0.44*114.75±5.44*563.16±46.10*GH 2∶3 27.87±4.14* 5.43±0.34**77.81±5.32*14.04±4.32*5.27±0.60*106.04±8.26 619.35±89.40 GH 2∶1 39.86±6.11 5.46±0.52**80.18±8.72*13.71±2.89**5.57±0.44*118.49±10.13*645.93±40.02 GH 1∶2 28.59±6.33* 5.79±0.22**80.58±9.01* 8.89±2.29**5.17±0.42 107.88±9.62 585.86±34.19 GH 1∶1 31.26±10.78*2.84±0.49**81.32±12.59**12.11±4.94**5.50±0.50*115.30±6.74*611.91±52.33 GH 1∶0 35.74±7.68 3.79±1.80**84.33±4.04**11.42±1.71**5.62±0.27*116.69±4.90*715.61±83.66 GH 0∶1 37.72±11.66 7.64±4.64*72.77±10.30*14.02±5.67*5.49±0.48*118.92±8.27*617.36±41.23
3.2 各組小鼠外周血常規(guī)的變化
3.2.1 當(dāng)歸-紅花1∶1不同濃度對(duì)血虛小鼠外周血常規(guī)的影響 與空白組比較,模型組WBC、GR、MO、PLT均明顯升高(P<0.05),RBC、HGB、LY均明顯降低(P<0.05),說明造模成功。與模型組比較,GH 1∶1低組的 WBC、MO、HGB、PLT均趨向正常(P<0.05),對(duì)于 GR、LY、RBC有所改善,但作用不明顯;GH 1∶1高組對(duì)于降低的RBC均有明顯升高作用(P<0.05),對(duì)于升高的WBC均有明顯降低作用(P<0.05),對(duì) HGB、MO、GR、LY及 PLT改善不明顯。GH 1∶1中組對(duì)于升高的WBC、PLT有明顯降低作用(P<0.05),對(duì)于 GR、LY、MO、RBC改善不明顯(Tab 1)。
3.2.2 當(dāng)歸-紅花不同配比對(duì)小鼠外周血常規(guī)的影響 與空白組比較,模型組WBC、GR、MO、PLT均明顯升高(P<0.05),RBC、HGB、LY均明顯降低(P<0.05),說明造模成功。與模型組比較,陽(yáng)性組、GH 1∶4、GH 3∶2、GH 2∶3、GH 1∶2及 GH 1∶1組的WBC均明顯降低(P<0.05);GH各組 GR、LY、MO水平均趨于正常(P<0.05);GH 4∶1、GH 1∶4、GH 3∶2、GH 2∶1、GH 1∶1、GH 1∶0及 GH 0∶1組HGB水平均明顯升高(P<0.05),GH 2∶3、GH 1∶2組HGB水平均有所升高;GH 4∶1、GH 1∶4、GH 3∶2、GH 2∶3、GH 2∶1、GH 1∶1、GH 1∶0及GH 0∶1組 RBC水平均明顯升高(P<0.05),GH 1∶2組RBC水平有所升高;另外GH 3∶2組PLT水平明顯下降(P<0.05),GH其余各組PLT水平下降不明顯(Tab 1)。
3.3 各組小鼠免疫器官指數(shù)的變化
3.3.1 當(dāng)歸-紅花1∶1不同濃度對(duì)血虛小鼠免疫器官的影響 與空白組比較,模型組的胸腺指數(shù)明顯下降(P<0.05),肝臟指數(shù)、脾臟指數(shù)明顯升高(P<0.05),說明造模成功。與模型組比較,陽(yáng)性組脾臟指數(shù)明顯下降(P<0.05);GH 1∶1低、GH 1∶1中組肝臟指數(shù)明顯下降(P<0.05);其它指標(biāo)亦趨向正常(Tab 2)。
Tab 2 Organ index changes of the experimental period(±s,n=10)
Tab 2 Organ index changes of the experimental period(±s,n=10)
#P<0.05,##P<0.01 vs normal group;*P<0.05,**P<0.01 vs model group.
Group TI LI SI 6.16±0.80 N1 3.26±0.50 44.17±2.44 3.91±0.51 M1 1.69±0.12#50.77±2.29#7.64±1.66#EJ1 1.80±0.28 49.61±1.01 5.95±0.72*GH 1∶1(low) 1.75±0.24 46.47±1.94*6.45±1.10 GH 1∶1(middle) 1.73±0.22 46.33±1.94*6.39±1.60 GH 1∶1(high) 1.90±0.55 50.81±3.7 6.53±1.43 M2 1.61±0.40##47.83±2.57#6.19±0.53##EJ2 1.81±0.44 46.36±1.75 6.67±0.96 GH 1∶4 1.56±0.29 45.76±2.97 6.63±0.93 GH 4∶1 1.67±0.22 45.40±2.97 6.31±1.25 GH 3∶2 1.55±0.23 45.07±2.36 5.98±0.66 GH 2∶3 1.74±0.30 44.11±2.14*6.25±0.92 GH 2∶1 1.69±0.31 42.45±2.48**6.21±1.28 GH 1∶2 1.75±0.42 46.33±2.76 6.46±0.97 GH 1∶1 1.53±0.24 43.68±2.86**5.92±1.37 GH 1∶0 1.48±0.28 42.42±2.64**5.99±1.30 GH 0∶1 1.61±0.25 43.67±3.88**
3.3.2 當(dāng)歸-紅花不同配比對(duì)血虛小鼠免疫器官的影響 與空白組比較,模型組的胸腺指數(shù)明顯下降(P<0.05),肝臟指數(shù)、脾臟指數(shù)明顯升高(P<0.05),說明造模成功。與模型組比較,GH 2∶3、GH 2∶1、GH 1∶1、GH 1∶0、GH 0∶1組肝臟指數(shù)明顯下降(P<0.05);GH各配比組胸腺指數(shù)均有所上升,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Tab 2)。
Tab 3 Total effect changes of the experimental period
3.4 總補(bǔ)血效應(yīng)的變化
3.4.1 當(dāng)歸-紅花1∶1不同濃度的總補(bǔ)血效應(yīng)的變化 各濃度的當(dāng)歸-紅花總補(bǔ)血效應(yīng)值大小順序依次為:GH 1∶1低>GH 1∶1中>GH 1∶1高,提示GH 1∶1低組補(bǔ)血效應(yīng)最好,即當(dāng)歸-紅花比例為1∶1時(shí)濃度為臨床常用量的1倍量時(shí)對(duì)血虛小鼠的補(bǔ)血效應(yīng)最好(Tab 3)。
3.4.2 當(dāng)歸-紅花不同配比的總補(bǔ)血效應(yīng)的變化
各比例的當(dāng)歸-紅花總補(bǔ)血效應(yīng)值大小順序依次為:GH 1∶1>GH 1∶2>GH 1∶0>GH 4∶1>GH 2∶3>GH 3∶2>GH 2∶1>GH 1∶4>GH 0∶1,提示GH 1∶1組補(bǔ)血效應(yīng)最好,這與采用關(guān)聯(lián)規(guī)則方法對(duì)中醫(yī)古方當(dāng)歸-紅花配伍用藥規(guī)律進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析的結(jié)果相一致(Tab 3)。
血虛證是中醫(yī)臨床常見的證候群之一,戰(zhàn)傷失血、放化損傷和各種貧血性疾病均歸屬于血虛證范疇。環(huán)磷酰胺作為常用抗腫瘤藥物和免疫抑制劑,其主要毒副作用是骨髓造血障礙,可導(dǎo)致骨髓造血干/祖細(xì)胞的集落生成能力降低,骨髓細(xì)胞凋亡增多,造血細(xì)胞生成減少[9],因此可制造出血虛模型。研究結(jié)果表明:環(huán)磷酰胺對(duì)紅細(xì)胞有緩慢氧化性損傷作用,尤其能干擾紅細(xì)胞的葡萄糖-6-磷酸脫氫酶,促進(jìn)血紅蛋白變性,使紅細(xì)胞易于崩解,最終造成機(jī)體溶血性貧血[10-11]。因此乙酰苯肼、環(huán)磷酰胺聯(lián)合使用的復(fù)合血虛模型可以從雙重環(huán)節(jié)上造成動(dòng)物血虛,采用此方法造模,模型動(dòng)物存活率較高,血虛狀態(tài)的持續(xù)時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)。金若敏等[12]采用此方法造模發(fā)現(xiàn)小鼠外周血紅細(xì)胞減少,骨髓有核細(xì)胞減少,補(bǔ)血中藥能減輕骨髓細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的損傷,明顯增加血虛證模型小鼠紅細(xì)胞數(shù)量。王燕平等[13]用此方法造模觀察到模型小鼠的免疫功能低下,主要表現(xiàn)為T淋巴細(xì)胞增殖能力下降,而補(bǔ)血中藥可使其回升。本課題組黃美艷、史旭芹等[4,14]也采用了該造模方法且得到了較好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,另外李偉霞等[15]還對(duì)不同的造模方法進(jìn)行了比較,發(fā)現(xiàn)了乙酰苯肼、環(huán)磷酰胺聯(lián)合使用的復(fù)合血虛模型更適合于評(píng)價(jià)補(bǔ)血中藥的補(bǔ)血效應(yīng)。因此本實(shí)驗(yàn)采用了該方法復(fù)制血虛模型,從雙重環(huán)節(jié)造成動(dòng)物血虛。
再生障礙性貧血(aplastic anemia,AA)是由于造血干/祖細(xì)胞增生、分化障礙或造血微環(huán)境異常而導(dǎo)致的一類以造血組織功能衰竭為特征的疾病。本實(shí)驗(yàn)采用的乙酰苯肼、環(huán)磷酰胺聯(lián)合使用的方法復(fù)制的小鼠血虛模型,與AA的臨床表現(xiàn)相符。然后本文采用多指標(biāo)綜合指數(shù)法對(duì)當(dāng)歸-紅花1∶1的3個(gè)不同濃度的總補(bǔ)血效應(yīng)進(jìn)行比較,結(jié)果顯示當(dāng)歸、紅花劑量為臨床等效量時(shí)的總補(bǔ)血效應(yīng)最好,這也從當(dāng)歸-紅花臨床應(yīng)用結(jié)果[16-17]得到證實(shí)。用藥劑量是中醫(yī)臨床顯效的重要決定因素之一,恰當(dāng)?shù)挠盟巹┝渴潜U现兴幇踩行У年P(guān)鍵[1]。然后在基于優(yōu)選的最佳補(bǔ)血濃度評(píng)價(jià)當(dāng)歸-紅花不同配比的補(bǔ)血效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)以當(dāng)歸、紅花1∶1的總補(bǔ)血效應(yīng)最好,與臨床中醫(yī)方劑中使用當(dāng)歸、紅花1∶1頻次最高的結(jié)論相一致。這可能與藥物配伍組合后的物質(zhì)基礎(chǔ)及其體內(nèi)代謝過程有著密切的聯(lián)系。因此對(duì)當(dāng)歸-紅花物質(zhì)基礎(chǔ)研究及其在體內(nèi)的吸收、代謝過程的進(jìn)一步研究有可能會(huì)為揭示當(dāng)歸、紅花配伍的本質(zhì)提供科學(xué)依據(jù),為現(xiàn)代臨床更有效應(yīng)用當(dāng)歸與紅花提供了科學(xué)依據(jù)。
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