白藜蘆醇通過減緩內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及增加 eNOS的表達(dá)改善高熱量高膽固醇飲食引起的內(nèi)皮損傷

程靜靜，陳 莉，李朝飛，陳冠軍，鮑瑩瑩，魯云霞

（安徽醫(yī)科大學(xué)1.生物化學(xué)教研室、2.化學(xué)教研室，安徽合肥 230032；3.安徽醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院內(nèi)分泌科，安徽合肥 230022）

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是細(xì)胞內(nèi)膜型／分泌型蛋白質(zhì)合成的細(xì)胞器，在調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)正確折疊、鈣穩(wěn)態(tài)和細(xì)胞凋亡等方面具有重要作用，是維持血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的重要細(xì)胞器，葡萄糖、病毒感染、化學(xué)藥物如衣霉素等多種刺激因素誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)未折疊／錯(cuò)誤折疊蛋白質(zhì)反應(yīng)（unfolded protein response，UPR）和鈣穩(wěn)態(tài)失衡等狀態(tài)被稱為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（ERS）［1］。過度的ERS是一系列疾病，包括動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病、神經(jīng)退行性疾病和腎功能障礙等的誘因之一。

隨著肥胖人群在全球范圍內(nèi)的增多，與動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)的代謝綜合征也日益增多，血脂異常是動(dòng)脈粥樣硬化的起始步驟，其早期病變是內(nèi)皮細(xì)胞的損傷［2］。白藜蘆醇（resveratrol，RES）屬于一種非黃酮類多酚化合物，存在于多種植物中，具有抗自由基、抗脂質(zhì)過氧化作用，對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化等心腦血管疾病的防治起重要的作用［3－4］，但尚無其在血管內(nèi)皮細(xì)胞中影響ERS的相關(guān)報(bào)道。已知氧化應(yīng)激和ERS之間相互聯(lián)系，一方面氧化應(yīng)激干擾ER中的蛋白質(zhì)折疊，另一方面UPR可引起氧化應(yīng)激，因此推測RES的抗氧化作用可能減少UPR和ERS［5］。本實(shí)驗(yàn)旨在研究RES對(duì)高脂飲食小鼠胸主動(dòng)脈血管內(nèi)皮及細(xì)胞的影響是否與ERS有關(guān)。由于RES是天然無毒化合物，作用較緩慢，因此參照文獻(xiàn)選取單一的較高劑量 RES（400 mg·kg－1·d－1）［6］，體外實(shí)驗(yàn)先用不同濃度的RES預(yù)孵育，再用一定濃度的棕櫚酸誘導(dǎo)，以觀察其保護(hù)作用是否具有劑量效應(yīng)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和細(xì)胞株 C57BL／6小鼠24只，8周齡，清潔級(jí)，♂，體質(zhì)量20～25 g，由安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。小鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞（mouse aortic endothelial cells，MAEC），由合肥工業(yè)大學(xué)生物與食品工程學(xué)院劉健博士饋贈(zèng)。

1.1.2 藥物和試劑 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)用白藜蘆醇購自南京澤朗醫(yī)藥科學(xué)技術(shù)有限公司；細(xì)胞實(shí)驗(yàn)用白藜蘆醇（R5010）、棕櫚酸（palmitic acid，PA）購自美國Sigma公司，四季青胎牛血清購自浙江天杭生物科技有限公司；RNAStore樣品保存液（DP408）購自天根生化科技（北京）有限公司；RT試劑盒購自Fermentus Life Sciences；DMEM培養(yǎng)基購自美國Invitrogen公司；鼠抗3-磷酸甘油醛脫氫酶（GAPDH）單克隆抗體購自康為世紀(jì)生物技術(shù)有限公司；兔抗GRP78多克隆抗體購自美國 Abcam公司；鼠抗CHOP單克隆抗體購自美國CST公司；兔抗eNOS多克隆抗體購自美國Santa Cruz公司；羊抗兔辣根過氧化物酶標(biāo)記抗體和DAB均購自武漢博士德生物技術(shù)有限公司；FITC羊抗小鼠二抗購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司；增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光底物檢測試劑盒（ECL發(fā)光劑）購自碧云天生物技術(shù)研究所；DAPI購自Biosharp生物科技有限公司；RIPA裂解液購自南京凱基生物科技發(fā)展有限公司。所有引物均用Primer5.0軟件設(shè)計(jì)，由上海生工生物技術(shù)工程有限公司合成（Tab 1）。

Tab 1 Primer sequences used for RT-PCR analysis of related gene expression in m ice

1.1.3 動(dòng)物分組及用藥 將C57 BL／6小鼠隨機(jī)分為標(biāo)準(zhǔn)飲食組（SCD）、高熱量高膽固醇飲食組（HCD，20%豬油、20%蔗糖、10%蛋黃粉、1%膽固醇）和高熱量高膽固醇飲食＋白藜蘆醇組（HCD＋RES）。除SCD組外，其余2組均為HCD喂養(yǎng)，HCD＋RES組在HCD的同時(shí)灌胃白藜蘆醇（400 mg·kg－1·d－1）治療12周。所有操作均遵守安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)的要求。

1.2 方法

1.2.1 胸主動(dòng)脈的病理學(xué)檢測和免疫組織化學(xué)分析 小鼠處死后迅速取出胸主動(dòng)脈，用4%（V／V）的多聚甲醛溶液固定72 h，石蠟包埋，4μm切片，HE染色和間苯二酚品紅染色，400倍光鏡下觀察組織的病理學(xué)改變，對(duì)比拍照。將血管以4μm連續(xù)切片，常規(guī)脫蠟至水，微波抗原修復(fù)，3%H2O2消除內(nèi)源性過氧化物酶活性，PBS洗后用山羊血清封閉，eNOS羊抗兔（1∶100）4℃過夜，二抗工作液室溫孵育10 min，辣根酶標(biāo)記鏈卵白素標(biāo)記，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，中性樹膠封片。

1.2.2 胸主動(dòng)脈的 RT-PCR分析 抽提血管總RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，常規(guī)PCR分析，反應(yīng)條件為：預(yù)變性 94℃3 min，變性 94℃30 s、退火 55℃30 s、延伸72℃ 30 s，32個(gè)循環(huán)后 72℃延伸 5 min，3%瓊脂糖凝膠電泳，以目的條帶的灰度與內(nèi)參GAPDH的灰度之比表示目的基因的表達(dá)水平。

1.2.3 MAEC細(xì)胞培養(yǎng) 將MAEC細(xì)胞解凍復(fù)蘇后，種植在含10%胎牛血清、105IU·L－1青霉素、105IU·L－1鏈霉素的 DMEM培養(yǎng)基中，37℃、5%CO2、95%濕度的條件下培養(yǎng)，2～3 d換液1次。待細(xì)胞生長至單層融合狀態(tài)后，用0.25%胰蛋白酶消化傳代。

1.2.4 MTT實(shí)驗(yàn) 取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞，接種于96孔培養(yǎng)板，低濃度 RES（10μmol·L－1）、中濃度 RES（50μmol·L－1）、高濃度 RES（100μmol·L－1）預(yù)處理6 h后加入0.5 mmol·L－1PA孵育，每組平行6個(gè)復(fù)孔，重復(fù) 3次，培養(yǎng)時(shí)間分別為 6、12、18、24 h，在達(dá)各培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)前4 h時(shí)，每孔加5 g·L－1MTT 20μl繼續(xù)培養(yǎng)4 h，去除培養(yǎng)基，每孔加150μl DMSO，酶標(biāo)儀測定OD570。

1.2.5 Western blot 不同濃度 RES預(yù)處理后加PA共同孵育24 h，RIPA裂解液抽提細(xì)胞總蛋白，BCA法測蛋白濃度，12%SDS-PAGE凝膠電泳，轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，封閉后分別用抗GAPDH（1∶800）、GRP78（1∶600）的一抗4℃孵育過夜，HRP標(biāo)記的二抗室溫孵育1 h，加入 ECL發(fā)光劑反應(yīng)5～10 min，暗室顯影成像，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.6 細(xì)胞免疫熒光 制備細(xì)胞爬片，不同濃度RES預(yù)處理后加PA共同孵育24 h，4%多聚甲醛固定，0.5%Triton X-100破膜，5%BSA封閉后加鼠抗CHOP單克隆抗體（1∶200）4℃孵育過夜，F(xiàn)ITC山羊抗小鼠二抗室溫孵育1 h，DAPI染色10 min后抗熒光淬滅封片劑封片，熒光顯微鏡下觀察。

1.2.7 細(xì)胞免疫組化分析 制備細(xì)胞爬片，不同濃度RES預(yù)處理后加PA共同孵育24 h，4%多聚甲醛固定，其余步驟包括eNOS的濃度均同上述組織的免疫化學(xué)分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以±s表示，多組間比較采用單因素方差分析（ANOVA），兩組間比較用SNK-q檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 白藜蘆醇對(duì)高脂飲食小鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞病理學(xué)的影響 HE及間苯二酚染色結(jié)果顯示：SCD組小鼠動(dòng)脈結(jié)構(gòu)清晰，內(nèi)皮細(xì)胞連續(xù)光滑完整，彈力纖維排列呈波浪狀，未見斷裂，無病理學(xué)改變；HCD組動(dòng)脈管壁增厚，彈力纖維排列紊亂，局部有斷裂現(xiàn)象；HCD＋RES組相對(duì)于HCD組管壁變薄，彈力纖維基本無斷裂（Fig 1）。

2.2 白藜蘆醇對(duì)胸主動(dòng)脈ERS中3個(gè)上游通路分子基因表達(dá)的影響 RT-PCR結(jié)果顯示：與SCD組相比，HCD組小鼠胸主動(dòng)脈的ERS中3個(gè)信號(hào)通路IRE1α、ATF6以及PERK的基因水平表達(dá)均明顯升高（P＜0.05）；與 HCD組相比，HCD＋RES組PERK、IRE1α基因水平明顯降低（P＜0.05），ATF6基因的表達(dá)差異無顯著性（P＞0.05）。

2.3 白藜蘆醇對(duì)胸主動(dòng)脈ERS中2個(gè)下游分子GRP78和CHOP基因表達(dá)的影響 RT-PCR結(jié)果表明：與SCD組相比，HCD組小鼠胸主動(dòng)脈的ERS中GRP78和CHOP基因的表達(dá)均明顯增加（P＜0.05）；與HCD組相比，HCD＋RES組CHOP基因的表達(dá)明顯降低（P＜0.05），GRP78雖然略有升高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見 Fig 3。

2.4 白藜蘆醇對(duì)胸主動(dòng)脈eNOS蛋白水平表達(dá)的影響 免疫組化結(jié)果顯示：eNOS蛋白在內(nèi)皮細(xì)胞的胞質(zhì)中表達(dá)；與SCD組相比，HCD組eNOS的表達(dá)降低；與HCD組相比，HCD＋RES組的eNOS表達(dá)有所增加（Fig 4）。

Fig 1 Photom icrographs ofmouse thoracic aorta w ith HE and resorcinol-fuchsin staining（×400）A.SCD group；B.HCD group；C.HCD＋RES group.1：HE staining；2：resorcinol-fuchsin staining.

Fig 2 Comparison ofmRNA expression of IRE1α，ATF6 and PERK in thoracic aorta of 3 groups*P＜0.05 vs SCD group；＃P＜0.05 vs HCD group

2.5 白藜蘆醇對(duì)棕櫚酸誘導(dǎo)MAEC增殖的影響由Tab 2可知：PA對(duì)MAEC增殖有明顯的抑制作用，且呈濃度和時(shí)間依賴關(guān)系；RES預(yù)處理后，可改善PA對(duì)MAEC增殖的抑制作用，其中低濃度（10 μmol·L－1）RES對(duì) MAEC改善增殖作用不明顯（P＞0.05），較高濃度作用12 h以上明顯增強(qiáng)（P＜0.05），且呈濃度依賴性。

Tab 2 Influence of RES pretreatment on proliferation of mouse aortic endothelial cells treated w ith PA（±s，n＝3）

Tab 2 Influence of RES pretreatment on proliferation of mouse aortic endothelial cells treated w ith PA（±s，n＝3）

*P＜0.05，**P＜0.01 vs NC；＃P＜0.05，＃＃P＜0.01 vs PA

Group 6 h 12 h 18 h 24 h NC 0.652±0.013 0.685±0.014 0.874±0.016 0.921±0.011 PA 0.543±0.021*0.565±0.016*0.665±0.015**0.636±0.014**RES10μmol·L－1 0.572±0.011 0.599±0.029 0.697±0.011 0.701±0.021＃RES50μmol·L－1 0.591±0.012＃ 0.644±0.021＃ 0.767±0.024＃ 0.782±0.012＃RES100μmol·L－1 0.607±0.025＃ 0.664±0.021＃ 0.841±0.012＃＃ 0.851±0.019＃＃

Fig 3 Com parison ofm RNA expression of CHOP and GRP78 in thoracic aorta of 3 groups*P＜0.05 vs SCD group；＃P＜0.05 vs HCD group

Fig 4 The immunohistochem ical results of eNOS in thoracic aorta of 3 groups（×400）A：SCD group；B：HCD group；C：HCD＋RES group.

2.6 白藜蘆醇對(duì)棕櫚酸誘導(dǎo)M AEC中GRP78蛋白表達(dá)的影響 Western blot結(jié)果表明：與NC組相比，PA組MAEC表達(dá)的GRP78蛋白水平均明顯升高（P＜0.05）；單獨(dú)使用RES組對(duì)GRP78表達(dá)沒有明顯影響（P＞0.05）；不同濃度RES干預(yù)后GRP78的蛋白水平表達(dá)相對(duì)于PA組明顯降低（P＜0.05）（Fig 5）。

Fig 5 Effect of RES pretreatment on expression of GRP78 protein induced by PA in MAEC*P＜0.05 vs NC group；＃P＜0.05 vs PA group

2.7 白藜蘆醇對(duì)棕櫚酸誘導(dǎo)MAEC中CHOP蛋白表達(dá)的影響 與NC組相比，PA組CHOP表達(dá)明顯增加，且定位在細(xì)胞核；與PA組相比，中、高劑量RES干預(yù)組CHOP表達(dá)明顯減少，而低濃度RES組與PA組相比，CHOP的減少不明顯（Fig 6）。

2.8 白藜蘆醇對(duì)棕櫚酸誘導(dǎo)MAEC中eNOS蛋白表達(dá)的影響 eNOS主要在胸主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞的胞質(zhì)中表達(dá)。與NC組相比，PA組eNOS表達(dá)明顯減少；與PA組相比，低濃度RES預(yù)處理后，eNOS蛋白表達(dá)無明顯增加，中、高濃度RES預(yù)處理后，eNOS蛋白表達(dá)明顯增加（Fig 7）。

Fig 6 Effect of RES pretreatment on expression of CHOP protein induced by PA in MAECs

Fig 7 Effects of RES pretreatment on expression of eNOS protein induced by PA in MAECsA：NC group；B：0.5 mmol·L－1 PA group；C：10μmol·L－1 RES＋0.5 mmol·L－1 PA group；D：50μmol·L－1 RES＋0.5 mmol·L－1 PA group；E：100μmol·L－1 RES＋0.5 mmol·L－1 PA group.

3 討論

UPR有3個(gè)主要的效應(yīng)蛋白：ATF6、IRE1α和PERK，在基礎(chǔ)狀態(tài)下，這3個(gè)效應(yīng)蛋白都與分子伴侶GRP78結(jié)合，當(dāng)發(fā)生 ERS時(shí)，它們與GRP78分離，然后被激活［7］。錢磊等［2］研究發(fā)現(xiàn)，高脂飲食或者PA誘導(dǎo)時(shí)胸主動(dòng)脈或內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生ERS。本研究發(fā)現(xiàn)，小鼠高熱量高膽固醇飲食12周后，胸主動(dòng)脈組織彈力纖維排列紊亂，ERS相關(guān)基因水平明顯升高，表明該飲食明顯激活內(nèi)皮細(xì)胞的ERS通路；白藜蘆醇干預(yù)后，血管內(nèi)皮中PERK、IRE1α及下游CHOP、GRP78基因的轉(zhuǎn)錄水平均明顯降低，提示白藜蘆醇保護(hù)高脂損傷大血管的作用機(jī)制可能與其緩解 ERS、降低 PERK、IRE1α及其下游 CHOP、GRP78的基因表達(dá)有關(guān)。另有研究表明白藜蘆醇可抑制缺血／再灌注和衣霉素誘導(dǎo)的ERS及視網(wǎng)膜血管變性［8］，并通過抑制GRP78蛋白的表達(dá)從而減少ERS和糖尿病大鼠的早期腎損害［9］，與本文的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果基本一致。

高脂飲食后小鼠血清中16碳的軟脂酸（PA）和18碳的硬脂酸均升高，以PA升高最為明顯［10］，因此本研究先通過低、中、高劑量的白藜蘆醇預(yù)處理MAEC，然后用 PA（0.5 mmol·L－1）誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，中、高濃度白藜蘆醇（50、100μmol·L－1）可明顯改善PA對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增殖的抑制作用，且呈明顯的劑量依賴關(guān)系（Tab 2）。PA可明顯增加GRP78、CHOP的蛋白表達(dá)，中、高濃度白藜蘆醇則明顯減少PA誘導(dǎo)的ERS。有報(bào)道稱白藜蘆醇可抑制乙醇誘導(dǎo)的ERS及Caspase-12，導(dǎo)致的肝細(xì)胞凋亡［11］，也可在HepG2細(xì)胞中通過誘導(dǎo)去乙酰化酶SIRT1的高表達(dá)來誘導(dǎo)氧調(diào)節(jié)蛋白150（ORP150）的表達(dá)以減緩PA誘導(dǎo)的ERS和胰島素抵抗［12］，與本文的細(xì)胞研究結(jié)果基本一致。

NO主要由eNOS催化生成后分泌到血液，參與調(diào)控血管擴(kuò)張、免疫反應(yīng)等多種生理和病理學(xué)過程［13］。在糖尿病早期階段，由eNOS表達(dá)改變引起的NO水平異常會(huì)導(dǎo)致內(nèi)皮功能障礙的發(fā)生［14］，白藜蘆醇可通過上調(diào)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中eNOS的表達(dá)來發(fā)揮其血管保護(hù)作用［15］。本研究發(fā)現(xiàn)［16］，高脂飲食導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞eNOS表達(dá)減少，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)PA可抑制eNOS的表達(dá)，而動(dòng)物和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的結(jié)果均表明白藜蘆醇的干預(yù)或預(yù)處理可增加eNOS的表達(dá)（Fig 4、6），提示高脂飲食和PA誘導(dǎo)的小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞受損與eNOS的表達(dá)減少密切相關(guān)，而白藜蘆醇可能通過增加eNOS的表達(dá)來逆轉(zhuǎn)內(nèi)皮細(xì)胞的損傷。白藜蘆醇是SIRT1的特異性激動(dòng)劑，研究表明在肝細(xì)胞中，Exedin-4通過增加SIRT1的表達(dá)來減緩ERS標(biāo)志基因的表達(dá)，本研究將在后續(xù)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中繼續(xù)觀察白藜蘆醇是否也能以類似的方式來減少ERS標(biāo)志基因的表達(dá)。

綜上所述，本研究從體內(nèi)和體外兩方面證實(shí)了白藜蘆醇對(duì)高熱量高膽固醇飲食和棕櫚酸誘導(dǎo)胸主動(dòng)脈及血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用，可能與其明顯減少ERS和增加eNOS的表達(dá)有關(guān)。然而白藜蘆醇具體如何影響ERS下游的通路，進(jìn)而改變eNOS的表達(dá)、影響血管的舒張功能？以及其對(duì)ERS的影響是直接作用還是間接作用？需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)來證實(shí)，其機(jī)制的闡明將為開發(fā)白藜蘆醇作為以ERS及其下游PERK、IRE1α等為靶點(diǎn)的藥物提供理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

［1］ Shen M，Wang L，Yang G，etal.Baicalin protects the cardiomyocytes from ER stress-induced apoptosis：Inhibition of CHOP through induction of endothelial nitric oxide synthase［J］.PloS one，2014，9（2）：e88389.

［2］ Lu Y，Qian L，Zhang Q，et al.Palmitate induces apoptosis in mouse aortic endothelial cells and endothelial dysfunction in mice fed high-calorie and high-cholesterol diets［J］.Life Sci，2013，92（24）：1165－73.

［3］ Yu W，F(xiàn)u Y C，Wang W.Cellular and molecular effects of resveratrol in health and disease［J］.J Cell Biochem，2012，113（3）：752－9.

［4］ 任俊偉，楊琴.白藜蘆醇對(duì)腦缺血／再灌注氧化應(yīng)激損傷保護(hù)機(jī)制的研究進(jìn)展［J］.中國藥理學(xué)通報(bào)，2011，27（04）：448－51.

［4］ Ren JW，Yang Q.Protectivemechanism of resveratrol on cerebral ischemia／reperfusion injury via ameliorating oxidative stress［J］.Chin Pharmacol Bull，2011，27（04）：448－451.

［5］ Malhotra JD，Miao H，Zhang K，etal.Antioxidants reduce endoplasmic reticulum stress and improve protein secretion［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2008，105（47）：18525－30.

［6］ Lagouge M，Argmann C，Gerhart-Hines Z，et al.Resveratrol improvesmitochondrial function and protects againstmetabolic disease by activating SIRT1 and PGC-1alpha［J］.Cell，2006，127（6）：1109－22.

［7］ Kaplon R E，Chung E，Reese L，et al.Activation of the unfolded protein response in vascular endothelial cells of nondiabetic obese adults［J］.JClin Endocrinol Met，2013，98（9）：E1505－9.

［8］ Li C，Wang L，Huang K，et al.Endoplasmic reticulum stress in retinal vascular degeneration：protective role of resveratrol［J］.Invest Ophthalmol Vis Sci，2012，53（6）：3241－9.

［9］ 王雅蕓，徐家蓉，繆 珩，等.白藜蘆醇對(duì)糖尿病大鼠腎皮質(zhì)氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用 ［J］.中華糖尿病雜志，2012，4（4）：229－33.

［9］ Wang Y R，Xu JR，Miao H，et al.Protective effect of resveratrol from renal cortical oxidative stress injury in diabetic rats［J］.Chin JDiabetes，2012，4（4）：229－33.

［10］Staiger K，Staiger H，Weigert C，etal.Saturated，butnotunsaturated，fatty acids induce apoptosis of human coronary artery endothelial cells via nuclear factor-κB activation［J］.Diabetes，2006，55（11）：3121－6.

［11］Liu LQ，F(xiàn)an ZQ，Tang Y F，etal.The resveratrol attenuates ethanol-induced hepatocyte apoptosis via inhibiting ER-related caspase-12 activation and PDE activity in vitro［J］.Alcohol Clin Exp Res，2014，38（3）：683－93.

［12］Jung TW，Lee K T，Lee M W，et al.SIRT1 attenuates palmitate－induced endoplasmic reticulum stress and insulin resistance in HepG2 cells via induction of oxygen-regulated protein 150［J］.Biochem Biophys Res Commun，2012，422（2）：229－32.

［13］Gotoh T，Mori M.Nitric oxide and endoplasmic reticulum stress［J］.Arterioscler Thromb Vasc Biol，2006，26（7）：1439－46.

［14］Andriambeloson E，Kleschyov A L，Muller B，et al.Nitric oxide production and endothelium-dependent vasorelaxation induced by wine polyphenols in rat aorta［J］.Br J Pharmacol，1997，120（6）：1053－8.

［15］Takizawa Y，Kosuge Y，AwajiH，etal.Up-regulation ofendothelial nitric oxide synthase（eNOS），silentmating type information regulation 2 homologue1（SIRT1）and autophagy-related genes by repeated treatmentswith resveratrol in human umbilical vein endothelial cells［J］.Br JNutr，2013，110（12）：2150－5.

［16］Lee J，Hong SW，Park S E，et al.Exendin-4 attenuates endoplasmic reticulum stress through a SIRT1-dependent mechanism［J］.Cell Stress Chaperones，2014，PMID：24446069［Epub ahead of print］.