胡頹子葉不同提取物藥理活性的比較研究

李廣勝，魯光華，陳 寧，韓永成，劉 偉，黃麗杰

胡頹子（Elaeagnus pungens Thunb.）為胡頹子科胡頹子屬植物，別名：盧都子、半含春、甜棒子。中醫(yī)將其用作平喘藥［1］，胡頹子葉收載于1977年版《中國藥典》一部，是胡頹子科植物胡頹子的干燥葉［2］，具有止咳平喘、止血、解毒之功效，用于主治肺虛咳嗽、氣喘、咳血、吐血、癰疽、痔瘡腫痛等癥［3－6］。對胡頹子葉不同提取物進行鎮(zhèn)咳、平喘、祛痰活性比較，為進一步對胡頹子葉的化學成分及藥理活性進行深入研究提供實驗依據(jù)。

1 材料

1.1 試劑 石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、羧甲基纖維素納、磷酸組胺、氯化乙酰膽堿、酚紅等均為分析純。

1.2 儀器 HH-S型水浴鍋（鞏義市英峪予華儀器廠），島津UV-220型紫外可見分光光度計（日本），DFZ-01型電熱真空干燥箱（黃石市恒豐醫(yī)療器械有限公司）。

1.3 藥品 試驗所用胡頹子葉于2012年購自安徽亳州，由河南中醫(yī)學院董誠明教授鑒定為：胡頹子葉為胡頹子科胡頹子屬植物（Elaeagnus pungens Thunb.）的干燥葉。蛇膽川貝液：廣西靈峰藥業(yè)有限公司，批號：5610011。

1.4 動物 清潔級Wistar小鼠，體質量18～22 g，4～6周，♂♀各半，購自河南省實驗動物中心。動物合格證號：scxk（豫）2011－0014。清潔級 Wistar豚鼠，體質量180～220 g，4～6周，♂♀各半，購自河南省康達公司。動物合格證號：scxk（豫）2011－0001。

2 方法

2.1 供試樣品的制備 取胡頹子葉粗粉500 g，分別用體積分數(shù)為0.95、0.50的乙醇浸泡過夜，回流提取2次，首次加8倍量2 h，第2次加6倍量1 h，合并提取液，回收乙醇，濃縮至無醇味。加入水混勻，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，濃縮至稠膏，得到相應的提取物（即石油醚組、乙酸乙酯組、正丁醇組），萃取后殘余水溶液減壓蒸餾回收溶劑，60℃真空干燥，得到水部位，備用。

2.2 鎮(zhèn)咳實驗［7］取小鼠60只，隨機分為6組。分別為模型組、陽性對照組、石油醚組、乙酸乙酯組、正丁醇組、水部位組。各組小鼠均分別灌胃（ig）給藥，模型組ig等容量蒸餾水，其中陽性對照給予2.1 ml·kg－1的蛇膽川貝液，其余各組灌胃給予含生藥10.8 g·kg－1的胡頹子葉不同提取物的藥液，給藥容量為20 ml·kg－1。每天給藥1次，連續(xù)7 d，末次給藥1 h后，將小鼠置于燒杯中，另在燒杯內放入一棉球，向棉球中注入0.2 ml濃氨水，迅速將燒杯倒置，讓小鼠引發(fā)咳嗽。觀察并記錄小鼠引咳潛伏期，以及小鼠在3 min內的咳嗽次數(shù)。

2.3 祛痰實驗 取小鼠60只，隨機分為6組。分組給藥同實驗“2.2”。末次給藥30 min后，分別給各小鼠腹腔注射質量分數(shù)為5%酚紅10 ml·kg－1。給予酚紅30 min后，頸椎脫臼處死，剝去氣管周圍組織，取甲狀軟骨下至氣管分支處的一段氣管，放入盛有2 ml NaCl的試管中，再加入1 mol·L－1NaOH 0.1 ml，搖勻2 h，使氣管色素溶出，用紫外可見分光光度計于波長546 nm處測定。

2.4 平喘實驗 取豚鼠若干，逐只放入霧室，恒速、恒量噴入質量分數(shù)為2%氯化乙酰膽堿（ACh）和質量分數(shù)為0.1%磷酸組胺混合液15 s，觀察動物呼吸急促、抽搐及跌倒翻滾時間，以跌倒翻滾時間小于120 s的動物為哮喘合格。將合格動物隨機分為6組，每組10只。各組豚鼠均分別灌胃（ig）給藥，模型組ig等容量水，其中陽性組給予2.1 ml·kg－1的蛇膽川貝液，其余各組灌胃給予含生藥5.94 g·kg－1的胡頹子葉不同提取部位的藥液，給藥容量為20 ml·kg－1。各組每日灌胃給藥1次，連續(xù)7 d，末次給藥1 h后，依上述方法噴霧引喘，記錄豚鼠跌倒翻滾的時間。

2.5 統(tǒng)計學處理 統(tǒng)計數(shù)據(jù)采用SPSS13.0分析，數(shù)值變量將采用ˉx±s進行統(tǒng)計學描述，用單因素方差方法分析（One-WayANOVA）。

Tab1 Antitussiveeffectsinmice（ˉx±s，n＝10）

3 結果

3.1 鎮(zhèn)咳實驗 與模型組相比，陽性對照組和乙酸乙酯組對小鼠有明顯止咳作用（P＜0.01）；正丁醇組對小鼠咳嗽有顯示作用（P＜0.05）。與其余提取物組比，乙酸乙酯組明顯有效（P＜0.01）。見 Tab1。

3.2 祛痰實驗 與模型組相比，陽性對照組和乙酸乙酯組對小鼠含痰均具有明顯的祛痰作用（P＜0.01）；正丁醇組對小鼠含痰具有明顯的祛痰作用（P＜0.05），與石油醚組或水部位組比，乙酸乙酯組有效（P＜0.05）。見Tab2。

*P＜0．05，**P＜0．01vsModel；△P＜0.05vsPetroleumether；＃P＜0.05vsWater-part

3.3 平喘實驗 與模型組相比，陽性對照組、乙酸乙酯組和正丁醇組對2%氯化乙酰膽堿（ACh）和0.1%磷酸組胺混合液引起的小鼠哮喘均有明顯的平喘作用（P＜0.01）。與石油醚組或水部位組比，乙酸乙酯組明顯有效（P＜0.01）。與正丁醇組比，乙酸乙酯組有效（P＜0.05）。見Tab3。

Tab3 Protectiveeffectsofdrug-induced breathinginguineapigs（ˉx±s，n＝10）

4 討論

本研究采用3種動物模型，分別為氨水引咳法、氣管酚紅法、組胺－乙酰膽堿致喘法。結果表明，乙酸乙酯組和正丁醇組對咳嗽、多痰和哮喘均有明顯作用，其中鎮(zhèn)咳、祛痰作用以正丁醇組為佳，平喘作用以乙酸乙酯組作用明顯，而石油醚組和水組均未見明顯效果。

本實驗從藥效學角度證實了胡頹子葉乙酸乙酯組和正丁醇組確有鎮(zhèn)咳、平喘、祛痰的作用，為臨床用藥提供了實驗支持。胡頹子乙酸乙酯組和正丁醇組對組胺引起的哮喘模型有一定的平喘作用，由此推測，胡頹子的平喘作用機制很可能是通過抑制對過敏遞質的釋放來實現(xiàn)的。其祛痰作用可能是通過增強小鼠呼吸道分泌功能實現(xiàn)的。至于發(fā)揮上述作用的有效成分及機制尚待進一步深入研究。

參考文獻：

［1］ 中國科學院植物志編輯委員會中國植物志，第52卷第2分冊［M］.北京：科學出版社，1983：1.

［1］ EditorialCommitteeoffloraofChinaAcademyofSciencesChina flora［M］.Fifty-second.Beijing；Sciencepress.1983：1.

［2］ 代 黔，王園園，葛月賓，等.胡頹子葉對豚鼠離體氣管平滑肌收縮功能的影響［J］.中草藥，2013，44（10）：1305－8.

［2］ DaiQ，WangYY，GeYB.etal.EffectofElaeagnuspungens leavesoncontractionofisolatedguineapigtrachealsmoothmuscle［J］.ChinTraditHerbalDrugs，2013，44（10）：1305－8.

［3］ MarW，LeeHT，JeKH，etal.ADNAstand-nickingprincipleof ahigherplant，Caesalpiniasappan［J］.ArchPharmacalRes，2003，26（2）：147－50.

［4］ 孟 江，和殿峰，周毅生，等.魚腥草不同提取部位藥理活性的比較研究［J］.時珍國醫(yī)國藥，2008，19（5）：1050－1.

［4］ MengJ，HeDF，ZhouYS，etal.Comparisononthepharmacologicaleffectsofdifferentextractpartsfromhouttuyniacordatathunb［J］.LishizhenMedMaterRes，2008，19（5）：1050－1.

［5］ 陳 奇.中藥藥理實驗方法學［M］.2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2006：435，433，424.

［5］ ChenQ.Methodologyofpharmaco-logicalexperiment［M］.2nded.Beijing：People′sMedicalpublishingHouse，2006：435，433，424.

［6］ 秦冬梅，胡麗萍，文志萍，等.維藥毛菊苣提取物對小鼠四氮化碳急性損傷的保護作用［J］.中國藥理學通報，2012，28（8）：1180－1.

［6］ QinDM，HuLP，WenZP，etal.ProtectiveeffectsofCichorium glandulosumBoissextractsonexperimentalliverinjuryinmice［J］.ChinPharmacolBull，2012，28（8）：1180－1.

［7］ 顏曉燕，童志遠，晏子俊，等.暗紫貝母及浙貝母醇水提取物鎮(zhèn)咳、祛痰及平喘作用比較研究［J］.中國實驗方劑學雜志，2012，18（16）：250－4.

［7］ YanXY，TongZY，YanZJ.etal.Pharmacodynamiccompariasonbetweenaqueousextractsandethanolextractesfromfritillaria unibracteataandfritillariathunbergii.［J］.ChinJExpTraditMed Formul，2012，18（16）：250－4.