原發(fā)性十二指腸梭形細胞鱗癌的組織形態(tài)學及蛋白表達的研究

周英澤，羅紅波，王錫平，王桂芬

(安岳縣人民醫(yī)院病理科，四川 安岳 642350)

·臨床病理·

原發(fā)性十二指腸梭形細胞鱗癌的組織形態(tài)學及蛋白表達的研究

周英澤，羅紅波，王錫平，王桂芬

(安岳縣人民醫(yī)院病理科，四川 安岳 642350)

目的 探討十二指腸梭形細胞鱗癌的組織形態(tài)學及蛋白表達的特點，明確其組織學來源，以提高對該疾病的認識和診斷水平。方法運用HE染色法了解十二指腸梭形細胞鱗癌的組織形態(tài)學特點；通過免疫組織化學染色法進一步了解其蛋白表達特點。結(jié)果HE染色顯示黏膜層、黏膜下層及肌層見大小不等異型性明顯的梭形腫瘤細胞，并見部分不典型細胞間橋和角化珠形成。免疫組織化學染色結(jié)果顯示梭形腫瘤細胞區(qū)域：⑴胞漿著色：CK5/6(+++)、CEA(+++)、CK8/18(++)、Syn(+)、NSE(+)、CgA(+)及S-100蛋白(+)；⑵胞核著色：Ki-67(+++)；⑶CD34和CD117顯示陰性。結(jié)論十二指腸鱗狀細胞癌起源于十二指腸黏膜基底層多潛能干細胞。

十二指腸梭形細胞鱗癌；組織形態(tài)學；蛋白表達；干細胞

小腸惡性腫瘤發(fā)病率僅占整個消化道惡性腫瘤的0.1%[1]，且其發(fā)生率遠不及大腸惡性腫瘤。原發(fā)性十二指腸惡性腫瘤較為少見，一般以腺癌較為常見，而鱗狀細胞癌（Primary duodenum squamous cell carcinoma，PDSCC）很少見，梭形細胞鱗癌是鱗狀細胞癌的一種少見的特殊亞型，因此原發(fā)性十二指腸梭形細胞鱗癌極為罕見。我科于2012年發(fā)現(xiàn)一例原發(fā)性十二指腸梭形細胞鱗癌，現(xiàn)結(jié)合其組織形態(tài)學及蛋白表達的特點給予報道如下：

1 材料與方法

1.1 材料 收集本科室未經(jīng)放化療的十二指腸梭形細胞鱗癌的組織標本1例。兔抗人的CK5/6、CK8/18、CEA、NSE、Syn、CgA、CD34、CD117、Ki-67等單克隆抗體及兔抗S-100蛋白多克隆抗體均購自北京中杉金橋生物技術有限公司(抗體均為工作液)；辣根酶(HRP)標記IgG及DAB顯色試劑盒均購自碧云天生物技術研究所。其他常規(guī)化學試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 方法

1.2.1 HE染色 取材脫水石蠟包埋，再切片經(jīng)脫蠟處理后，按常規(guī)蘇木精-伊紅(HE)染色程序進行染色，封片后顯微鏡觀察結(jié)果。

1.2.2 免疫組織化學染色法定性檢測蛋白表達情況 石蠟包埋的標本經(jīng)切片、脫蠟、3%H2O2-甲醇溶、枸櫞酸鹽或EDTA緩沖液抗原修復及山羊血清封閉等處理后，分別滴加CK5/6、CK8/18、CEA、NSE、Syn、CgA、CD34、CD117、S-100蛋白及Ki-67等抗體，用SP法進行免疫組化標記，顯微鏡下觀察實驗結(jié)果。用PBS代替一抗作為陰性對照。陽性結(jié)果判斷：將胞漿、胞膜或細胞核中出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒作為陽性反應。陽性強度分為3級：強陽性(+++)，陽性細胞50%以上，染色顆粒粗大，著色深；陽性(++)，陽性細胞在25%～49%之間，染色顆粒中等大小，呈棕黃色；弱陽性(+)，陽性細胞在25%以下，染色顆粒細小，呈淡黃色；陰性(-)，所有細胞均沒有染色反應。

2 結(jié) 果

2.1 巨檢 十二指腸腸管一段，長11 cm，最大直徑4 cm，在距十二指腸下端切緣2 cm處見一個直徑為3.5 cm息肉樣腫塊，表面光滑，占據(jù)腸腔1/2周并阻塞十二指腸腸腔，切面灰白色侵及腸壁肌層，邊界欠清，質(zhì)嫩脆；十二指腸腸腔內(nèi)未見乳頭及乳頭周圍組織。另見部分胃胰腺組織及淡黃色腸系膜組織一堆，體積為(12×10×7)cm3，腸系膜組織中查見數(shù)枚腫大淋巴結(jié)，其余組織均未見明確異常。

2.2 蘇木精-伊紅(HE)染色 如圖1所示，黏膜層、黏膜下層及肌層均可見大小不等異型性明顯的梭形腫瘤細胞，偶見核分裂像；并見少數(shù)不典型的角化珠和細胞間橋形成；腸壁血管、淋巴管中見癌栓并侵犯神經(jīng)管；腸系膜淋巴結(jié)中未見癌組織轉(zhuǎn)移。

圖1 HE染色觀察十二指腸梭形細胞鱗癌的組織形態(tài)學特征(×200)

2.3 免疫組織化學染色 如圖2所示：胞漿著色：CK5/6(+++)、CK8/18(++)、CEA(+++)、Syn(+)、NSE (+)、CgA(+)及S-100蛋白(+)；細胞核著色：Ki-67 (+++)；CD34(-)、CD117(-)。病理診斷：十二指腸梭形細胞鱗癌。

圖2 免疫組織化學染色檢測十二指腸梭形細胞鱗癌的蛋白表達情況（×200）

3 討 論

小腸腫瘤較少見，原發(fā)性小腸惡性腫瘤更為罕見，研究發(fā)現(xiàn)，小腸腫瘤的發(fā)生率僅占胃腸道腫瘤的5%左右，而小腸惡性腫瘤發(fā)生率還不足全部消化道惡性腫瘤的1%[1]，因此，小腸是消化道惡性腫瘤發(fā)病率最低的腸段。在小腸惡性腫瘤中，以上皮惡變多見，上皮惡變可以發(fā)生于小腸的任何部位，但以近段為多見，40%～50%發(fā)生于十二指腸，尤其是壺腹部多見，其次為距屈氏韌帶30 cm以內(nèi)的近段空腸，而回腸的上皮惡變常常多發(fā)生于末段[2]。隨著纖維內(nèi)鏡的廣泛應用，十二指腸癌的發(fā)病率有上升的趨勢[3-4]。

原發(fā)性十二指腸癌好發(fā)于中老年人，男女之比約為1.2:1[1]。按其發(fā)生的部位可分為乳頭上部癌、乳頭周圍癌及乳頭下部癌，其中以乳頭周圍癌最為多見[2]。發(fā)生部位不同其臨床表現(xiàn)也不典型且各不相同，從而易造成誤診或者漏診，但臨床上多以出血、腸梗阻及黃疸等癥狀最為常見。在組織學上，十二指腸癌以腺癌為主，據(jù)統(tǒng)計其在原發(fā)十二指腸癌中占81.4%，少數(shù)病例癌表現(xiàn)為膠樣癌；但有時也有極少數(shù)的個別十二指腸癌表現(xiàn)為印戒細胞癌、小細胞癌、腺鱗癌[5-6]、伴神經(jīng)內(nèi)分泌方向分化的癌[7]及鱗狀細胞癌。

原發(fā)性十二指腸鱗狀細胞癌極少見，國內(nèi)外一些學者先后做了相關報道，目前爭論的焦點在于PDSCC的起源問題：是否來源于十二指腸黏膜腺上皮發(fā)生的鱗狀上皮化生或者是來源于十二指腸乳頭附近的膽總管上皮細胞發(fā)生的鱗狀上皮化生，還是來源于十二指腸黏膜基底層多潛能干細胞向鱗狀上皮分化。1979年Sidhu[8]提出消化道的內(nèi)分泌細胞主要來源于黏膜上皮的干細胞的觀點。隨著免疫組織化學染色技術和分子生物技術的發(fā)展，在小腸上皮腫瘤中發(fā)現(xiàn)腺上皮細胞和內(nèi)分泌細胞同時存在于一個瘤體內(nèi)，進一步說明二者之間存在密切聯(lián)系。Burke等[9]及Barnhil等[10]先后提出十二指腸黏膜基底層多潛能干細胞三向分化成癌(同時存在腺樣、鱗狀細胞和神經(jīng)內(nèi)分泌成分)的觀點。為了明確原發(fā)性十二指腸鱗狀細胞癌的組織來源，我們通過免疫組織化學染色對梭形腫瘤細胞進行多種抗體標記發(fā)現(xiàn)，梭形腫瘤細胞除表達鱗癌相關高分子角蛋白CK5/6外，還同時表達腺癌相關低分子角蛋白CK8/18及神經(jīng)內(nèi)分泌癌相關蛋白Syn、NSE、CgA，這提示我們該例十二指腸梭形細胞鱗癌的組織來源于十二指腸黏膜腺上皮細胞發(fā)生鱗狀上皮化生及十二指腸乳頭附近的膽總管腺上皮細胞發(fā)生鱗狀上皮化生的可能性極小，而來源于十二指腸黏膜基底層多潛能干細胞向鱗狀上皮、腺上皮及神經(jīng)內(nèi)分泌方向分化的可能性極大。因此，我們支持原發(fā)性十二指腸鱗狀細胞癌來源于十二指腸黏膜基底層多潛能干細胞向鱗狀上皮、腺上皮及神經(jīng)內(nèi)分泌方向分化的觀點。與Barnhill等[10]對原發(fā)性十二指腸癌的組織學來源的研究結(jié)果一致。

但在我們的實驗中該例腫瘤在組織形態(tài)學上只有梭形細胞鱗癌的特點，沒有腺癌及神經(jīng)內(nèi)分泌癌的形態(tài)學特點；而免疫組化染色蛋白定性實驗顯示梭形腫瘤細胞同時表達鱗癌、腺癌及神經(jīng)內(nèi)分泌癌相關蛋白，兩種實驗數(shù)據(jù)不統(tǒng)一，存在矛盾，這也是我們困惑的問題。如果用“十二指腸黏膜腺上皮細胞發(fā)生鱗狀上皮化生及十二指腸乳頭附近的膽總管腺上皮細胞發(fā)生鱗狀上皮化生”，這一觀點很難解釋這一矛盾現(xiàn)象；而用“干細胞理論”可以解釋這一現(xiàn)象，并可能存在以下幾種病理生理病變化過程：(1)該例腫瘤可能來源于十二指腸黏膜基底層的同一個干細胞，由于受到胃腸道不同時間不同環(huán)境因素不同程度的影響，而向鱗癌、腺癌及神經(jīng)內(nèi)分泌癌等不同腫瘤同時或先后發(fā)生不同程度不同方向分化；(2)該腫瘤可能最初僅發(fā)生鱗癌變，以后在鱗癌的基礎上再續(xù)發(fā)不同程度的腺癌、神經(jīng)內(nèi)分泌癌方向改變；(3)該腫瘤可能最初僅發(fā)生腺癌變，以后在腺癌的基礎上再續(xù)發(fā)不同程度的鱗癌、神經(jīng)內(nèi)分泌癌方向改變。是否存在著這三種病理生理病變現(xiàn)象，需進一步探討，也許可以通過檢測mRNA、蛋白定量、電鏡技術及體外細胞模型能夠證明這些病理生理病變化過程，遺憾的是由于條件的限制，我們沒有從mRNA、蛋白表達水平及體外細胞模型方面做進一步的研究。

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Histomorphology and protein expression in primary duodenum spindle cell squamous carcinoma.

ZHOU Ying-ze,LUO Hong-bo,WANG Xi-ping,WANG Gui-fen.Department of Pathology,Sichuan Anyue County People's Hospital,Anyue 642350,Sichuan,CHINA

Objective To explore the histomorphology and protein expression characteristics of the primary duodenum spindle cell squamous carcinoma,and determine its histological origin,and provide comprehensive understanding in the awareness and diagnosis of this disease.MethodsHE staining was used to understand the histomorphology features of the primary duodenum spindle cell squamous carcinoma,and immunohistochemistry staining was applied to detect the protein expression.ResultsThe HE staining showed pleomorphism fusiform tumor cells in the mucosa,submucosa,and muscular,with a few atypical intercellularbridge and keratin pearl.And the immunohistochemical staining revealed fusiform tumor cell area as follows:(1)staining in cytoplasm:CK5/6(3+),CEA(3+),CK8/ 18(2+),Syn(+),NSE(+),CgA(+)and S-100 protein(+);(2)staining in nuclei:Ki-67(3+);(3)negative in CD34 and CD117.ConclusionThe primary duodenum spindle cell squamous carcinoma arised from the multipotent stem cell in the basal layer of the mucosa duodenum.

Duodenum spindle cell squamous carcinoma;Histomorphology;Protein expression;Stem cell

R735.3+1

A

1003—6350（2014）10—1532—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.10.0594

2013-12-16)

王桂芬。E-mail：wangguifen121085@163.com