高效液相色譜法測(cè)定七味檳榔散中桂皮醛含量

(青海省海西州食品藥品檢驗(yàn)所，青海 德令哈 817000)

七味檳榔散是根據(jù)傳統(tǒng)藏藥處方生產(chǎn)的藏藥制劑，由檳榔、肉桂、干姜、石榴等7味中藥組方，具有溫腎益腎的功效，用于治療腎臟疾病。其收載于藏藥部頒標(biāo)準(zhǔn)[1]中，原標(biāo)準(zhǔn)無(wú)含量測(cè)定項(xiàng)。七味檳榔散主要成分為生物堿，其中檳榔堿的提取過(guò)程復(fù)雜，難以應(yīng)用到實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)中，而方中肉桂的主要成分為桂皮醛，其性質(zhì)穩(wěn)定，是質(zhì)量控制常用的目標(biāo)物[2-3]。目前，七味檳榔散含量測(cè)定方法尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道。本研究中采用高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定肉桂中桂皮醛的含量[3]，以控制七味檳榔散的含量。試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性均能滿(mǎn)足要求，對(duì)七味檳榔散的質(zhì)量控制具有重要意義和應(yīng)用價(jià)值。

1 儀器與試藥

Agilent 1260型組合式全自動(dòng)高效液相色譜儀，包括Agilent G1315B DAD型檢測(cè)器、Agilent G1311C ALS型自動(dòng)進(jìn)樣器及配套的化學(xué)工作站；賽多利斯sartorius BS124S型電子天平、賽多利斯sartorius CP225D型電子天平。桂皮醛對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為110710-201016，含量為98.6%)；樣品3批(青海省海西州蒙藏醫(yī)醫(yī)院制劑中心提供，批號(hào)分別為20120508，20120621，20120711)；乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液制備

精密取桂皮醛對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含10 μg的溶液，即得對(duì)照品溶液。取本品適量混勻，精密稱(chēng)取0.2 g，置100 mL容量瓶中，加甲醇適量超聲20 min，放冷，加甲醇定容至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，即得供試品溶液。按處方配制缺桂皮的陰性樣品，按供試品溶液制備方法操作，即得陰性對(duì)照品溶液。

2.2 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Agilent C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相:乙腈-水(30∶70)；流速:1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng):290 nm；進(jìn)樣量:10 μL。分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣分析，結(jié)果分離效果較好，按桂皮醛峰計(jì)算理論板數(shù)在24 000以上。色譜圖見(jiàn)圖1。

2.3 方法學(xué)考察

干擾試驗(yàn):取2.1項(xiàng)下3種溶液10 μL，注入高效液相色譜儀。陰性對(duì)照品溶液色譜中，在與對(duì)照品出峰相應(yīng)保留時(shí)間處未出現(xiàn)峰，可見(jiàn)輔料對(duì)主成分測(cè)定無(wú)干擾，說(shuō)明方法具有專(zhuān)屬性，色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密吸取對(duì)照品溶液 2，4，8，10，12，16，20 μL，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定峰面積，以峰面積積分值(Y)為縱坐標(biāo)、桂皮醛的量(X，μg)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=10 487X-0.062 1，r=1.000 0。結(jié)果表明，桂皮醛進(jìn)樣量在0.02～0.10 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):精密吸取同一對(duì)照品溶液10 μL，按擬訂色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果峰面積平均值為1 143.187 928，RSD=0.33%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性考察:取同一供試品溶液(批號(hào)為20120508)10 μL，按擬訂色譜條件，分別于0，2，4，8，12 h時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果含量的RSD=0.11%(n=5)，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批(批號(hào)為20120508)樣品，平行制備6份供試品溶液，按擬訂色譜條件測(cè)定桂皮醛的含量。結(jié)果桂皮醛含量的平均值為2.451 mg/g，RSD=0.32%(n=6)，表明該方法測(cè)定桂皮醛重復(fù)性較好。

回收率試驗(yàn):取同一批(批號(hào)為20120508)樣品(桂皮醛含量為2.451 mg/g)，精密稱(chēng)取0.2 g，按擬訂方法操作，精密吸取5 mL，共6份，分別置50 mL容量瓶中，精密加入對(duì)照品溶液(質(zhì)量濃度為 11.00 μg/mL)各 5 mL，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取濾液，依法測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 桂皮醛加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測(cè)定

取樣品3批，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果批號(hào)為20120508、20120621，20120711的3批樣品中桂皮醛含量分別為 2.451，2.439，2.447 mg/g。

3 討論

本試驗(yàn)中分別考察了索氏提取、加熱回流提取及甲醇超聲處理等提取方法，結(jié)果回流提取干擾因素較多，而索氏提取和甲醇超聲處理提取效果優(yōu)良，超聲處理操作簡(jiǎn)便、快捷，故選用甲醇超聲處理制備供試品溶液。

取桂皮醛對(duì)照品溶液，經(jīng)紫外掃描，在290 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，并無(wú)其他因素干擾。因此，確定檢測(cè)波長(zhǎng)為290 nm。

試驗(yàn)結(jié)果表明，用HPLC法對(duì)七味檳榔散中桂皮醛含量進(jìn)行測(cè)定，線性?xún)?yōu)良，無(wú)干擾，具有準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、快速等優(yōu)點(diǎn)，可作為七味檳榔散質(zhì)量控制的指標(biāo)之一。

參考文獻(xiàn)：

[1]WS-BC-0224-95，中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn).藏藥(第一冊(cè))[S].

[2]魏端祥，王 準(zhǔn)，聶劍飛，等.HPLC測(cè)定普力奇降糖膠囊中桂皮醛的含量[J].中國(guó)藥物應(yīng)用與監(jiān)測(cè)，2006，3(3):27-29.

[3]劉艷新，沈洪寬，王 力.高效液相色譜法測(cè)定桂枝飲片中桂皮醛含量[J].中國(guó)藥業(yè)，2006，15(13):32.