內異癥患者增生期內膜組織基質金屬蛋白酶-2、血管生長因子、凋亡細胞調節(jié)基因水平表達的相關性研究

李紅

【摘 要】目的：研究基質金屬蛋白酶-2（MMP-2）、血管生長因子（VEGF）、凋亡細胞調節(jié)基因（Bcl-2和Bax）在增生期子宮內膜異位癥(內異癥,EMs)患者中的水平表達的相關性。方法：采用免疫組化法檢測內異癥56例異位內膜、40例在位內膜和48例對照組的增生期子宮內膜中MMP-2、VEGF、Bcl-2和Bax的表達。結果： ①MMP-2表達異位內膜組高于在位內膜組和正常內膜組，差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)；②VEGF表達異位內膜組強于在位組和對照組內膜，差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)； ③Bcl-2和Bax蛋白表達各組間差異無統(tǒng)計學意義(p＞0.05)，但Bcl-2表達在異位內膜增生期最強；④MMP-2、VEGF、Bcl-2和Bax各指標之間均存在等級相關性。結論：MMP-2、VEGF、Bcl-2和Bax可能相互影響，共同參與子宮內膜異位癥的發(fā)生發(fā)展。

【關鍵詞】子宮內膜異位癥；MMP-2；VEGF；Bcl-2；Bax；免疫組織化學

【中圖分類號】R711 【文獻標識碼】A 【文章編號】1004-7484（2014）03-01107-01

子宮內膜異位癥(內異癥，Endometriosis，EMs )指子宮內膜在子宮腔被覆面以外的地方種植生長，包括內膜間質和上皮細胞在子宮腔以外部位的異位生長，是生育期婦女的常見病。近年來EMs的發(fā)病率有上升趨勢，其在分子水平上的發(fā)病機理尚不完全清楚?；さ耐暾c否也是影響EMs發(fā)生侵襲與轉移種植的關鍵環(huán)節(jié)。MMPs是一組與鋅結合的主要分解細胞外基質的蛋白酶，與EMs的侵襲和轉移的關鍵環(huán)節(jié)[2]。本研究采用免疫組化法對EMs內膜中的MMP-2、VEGF 、Bcl-2和Bax水平進行檢測，探討其在EMs相關性及發(fā)生發(fā)展中的作用，為EMs的臨床診斷和治療提供科學依據(jù)和新思路。

1 材料與方法

1.1 標本

所選病例為2011年6月~2012年12月期間就診于萊西市市立醫(yī)院婦產科的子宮內膜異位癥患者56例（術后病理檢查證實為內異癥者），年齡28~50(34.3士5.2)歲，同時通過刮宮或切開手術取其在位子宮內膜40例，年齡28~51(35.2士4.3)歲。選擇同期因子宮肌瘤行子宮切除術的48例正常子宮內膜為對照組，年齡26~48(35.8士3.9)歲，所有內膜均為增生期。所有患者無其它內外科及內分泌疾病，術前三個月未應用激素治療，月經(jīng)周期規(guī)律。所有組織術后立即取材，經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋，5μm連續(xù)切片5張，1張行常規(guī)HE染色進行病理形態(tài)學觀察，余者用于免疫組織化學染色。

1.2 方法

1.2.1主要試劑：兔抗人VEGF多克隆抗體試劑盒購自武漢博士德生物技術有限公司，鼠抗人MMP-2、Bcl-2、Bax單克隆抗體、SP免疫試劑盒和山羊血清、DAB顯色試劑盒均購自福州邁新生物技術開發(fā)公司。

1.2.2 SP法檢測：MMP-2、VEGF、Bcl-2、Bax蛋白表達 切片常規(guī)二甲苯脫蠟，梯度酒精至水。采用SP法進行免疫組織化學染色，實驗操作嚴格按說明書進行。以0.01M PBS代替一抗作為陰性對照，以已知陽性標本為陽性對照。

1.2.3 免疫組化陽性判斷標準：MMP-2、VEGF、Bcl-2和Bax陽性信號為腺上皮細胞胞漿呈棕黃色著色，根據(jù)文獻Krajewska[1]，按半定量的方法評定每一張標本:隨機選取高倍鏡（×400）下至少5個視野，計數(shù)陽性細胞的百分率，并進行計分（0~4分），同時對陽性細胞免疫染色強度進行計分（0~ 3分），免疫組化染色評分=陽性細胞百分數(shù)評分×染色強度評分。0分為陰性(-)，1~2分為弱陽性(+)，3~4分為中等陽性(++)，4分以上為強陽性(+++)。

1.3 統(tǒng)計學處理

應用SSPS11.0軟件進行統(tǒng)計學處理，秩和檢驗比較各組間免疫組化結果，Kendalls W等級相關分析相關性。

2 結果

2.1 基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)表達情況

MMP-2主要表達于子宮內膜組織的腺上皮細胞胞漿中，間質中也有表達。異位內膜組與在位內膜組和對照組之間差異有統(tǒng)計學意義，在位內膜組和對照組之間差異無統(tǒng)計學意義，見表1。

2.2 血管生長因子(VEGF)表達情況

VEGF主要定位于腺上皮及血管內皮細胞的胞漿中，同時也分散存在于周圍間質細胞中。異位內膜表達強于在位和對照組內膜，差異有統(tǒng)計學意義，見表1。

2.3 凋亡調節(jié)基因（Bcl-2、Bax）表達情況

Bax主要表達在腺上皮細胞胞漿，異位內膜組表達低于在位內膜組和對照組，但差異無統(tǒng)計學意義，見表1。Bcl -2蛋白主要表達于子宮內膜腺上皮細胞漿和/或細胞膜上，偶見細胞核表達，呈黃色或棕黃色。異位內膜表達強于在位內膜和對照組，差異無統(tǒng)計學意義，見表1。

2.4各指標間相關關系

采用Kendalls W等級相關，分析異位內膜組MMP-2、VEGF、Bcl-2和Bax之間的相關性，發(fā)現(xiàn)各指標間存在等級相關性，見表2。

3 討論

近年，隨著月經(jīng)初潮的低齡化，分娩的高齡化及少育的現(xiàn)象，EMs成為年輕女性及育齡女性多發(fā)疾患之一，其發(fā)病率也呈上升趨勢。目前一致認為侵襲、轉移、種植是EMs的主要特征，由多步驟、多因素參與的復雜過程。凋亡細胞調節(jié)基因Bcl-2與Bax參與了這復雜過程，而對細胞外基質的降解及血管生成是重要先決條件[3]，因此，對EMs的相關性研究更具有臨床意義。

3.1 MMP-2在異位癥中的作用

本實驗發(fā)現(xiàn)，MMP-2在異位內膜組呈高水平表達，而在位內膜組和對照組呈低水平表達，與文獻報道一致[4-6]，提示異位病灶具備較高的蛋白水解能力，由于MMP-2的蛋白水解活性有利于腹腔的侵襲，因此異位內膜中MMP-2蛋白的過度表達可使其具有較高的侵襲能力，能夠降解異位內膜周圍的基底膜及其它ECM成分，破壞腹膜間質細胞的連接，進而侵襲腹膜及病灶周圍的結締組織，使異位內膜在腹膜內種植生長并使病灶不斷擴大，異位內膜一旦植入腹膜表面后，腹腔微環(huán)境發(fā)生變化，各種細胞因子分泌增加，MMP-2的表達進一步增加，侵襲力進一步增強，促進了EMs形成和病情的進展。

3.2 VEGF在在異位癥中的作用

VEGF是參與調控血管生成的最重要的血管生長因子，對于血管內皮細胞有高特異性的促增殖作用，可直接而特異地作用于血管內皮細胞，導致新生血管形成。異位內膜中VEGF含量增高，在內分泌和旁分泌的共同作用下刺激毛細血管增生，為異位生長的腺上皮細胞提供賴以生存的物質基礎，促進異位內膜增殖和侵襲入腹腔內組織。本研究結果表明，VEGF在異位內膜組、在位內膜組和對照組中表達強度依次減弱，提示子宮內膜異位癥中血管生成活動增強。

3.3 Bcl-2和Bax在異位癥中的作用

凋亡作為一種生理或病理性的細胞消亡，普遍存在于生物界，機體通過凋亡消除衰老的細胞并代之以新的細胞，從而維持組織器官中細胞數(shù)量的穩(wěn)定。子宮內膜的周期性增生與脫落通過細胞增殖和凋亡形式來實現(xiàn) [7] 。凋亡存在于子宮內膜異位癥患者在位、異位內膜及腹腔液巨噬細胞中，凋亡調節(jié)基因Bcl-2和Bax在EMs的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。Bcl-2是一種原癌基因，其重要生物學功能是延長細胞壽命并增加細胞對多種凋亡刺激因素的抗性，被稱為凋亡抑制基因，Bax加速細胞死亡，被稱為細胞凋亡促進基因，這兩類蛋白質的比值決定細胞在受到凋亡信號刺激時是否發(fā)生凋亡。Bcl-2/Bax異二聚體的比值在凋亡中起重要作用，其比值越低，凋亡越明顯。

本研究結果顯示，雖然Bcl-2和Bax蛋白在正常子宮內膜、在位和異位子宮內膜表達差異無統(tǒng)計學意義，但Bcl-2表達在異位內膜增生期最強，而Bax蛋白表達在異位內膜最弱，Bcl-2和Bax共同表達于正常子宮內膜、在位和異位子宮內膜增生期腺上皮，且Bcl-2明顯占優(yōu)勢，說明增生期Bcl-2/Bax比值上升，抑制細胞凋亡，保證此期內膜細胞進行大量的增生，對子宮內膜功能層進行快速的修復，促進內異癥的發(fā)生和發(fā)展。

3.4 MMP-2、VEGF、Bcl-2和Bax之間的相互作用

分析異位內膜組MMP-2、VEGF、Bcl-2和Bax的相關性，發(fā)現(xiàn)各指標間存在較強的相關性，提示細胞外基質降解、血管生成及細胞凋亡可能以某種機制共同參與子宮內膜異位癥異位病灶的形成和發(fā)展，進一步證實了子宮內膜異位癥是一個多因素疾病，其作用機制目前尚不清楚，有待于進一步研究。

參考文獻

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