豬肉中地西泮殘留的高效液相色譜法測定

柳春暉　宋德華

摘要：本文采用高效液相色譜法（HPLC-DAD）對豬肉中痕量地西泮殘留進行測定，方法檢出限為0.01 mg/kg，平均回收率為89.1%-92.3%。該方法靈敏度高，選擇性和特異性好，能夠?qū)Φ蜐舛鹊臉悠愤M行很好的確認，適合在具有一般檢測條件的實驗室進行推廣。

關(guān)鍵詞：地西泮 液相色譜 豬肉

中圖分類號：S816 文獻標識碼：A 文章編號：1672-5336（2014）06-0041-02

地西泮又名安定，是一種具有鎮(zhèn)靜、抗驚厥作用的藥物，常用于治療成人焦慮、失眠等癥狀。但據(jù)了解，目前有些養(yǎng)豬場在育肥階段，在飼料中添加地西泮，以達到減少動物運動，促進睡眠，提高長成效率的目的。由于地西泮具有成癮性，如長期攝入可致耐受與依賴性，且對新生兒、哺乳期婦女、孕婦影響顯著，農(nóng)業(yè)部公告235號規(guī)定，地西泮只能用作動物疾病治療應(yīng)用，不得用作飼料添加劑，在動物性產(chǎn)品中不得檢出地西泮藥物殘留。

2014年1月1日實施的GB 29697-2013標準中，規(guī)定了動物性食品中地西泮的國標測定方法為氣相色譜-質(zhì)譜法，該方法對實驗室儀器條件要求較高，本文探索一種使用液相色譜對豬肉中地西泮殘留檢測的方法，該方法適合在具有一般檢測條件的實驗室進行推廣。

1 材料與方法

1.1 主要儀器與裝置

Agilent1100高效液相色譜儀；Grace Smart RP18 （250×4.6mm，5μm）色譜??；分析天平；冷凍離心機；高速勻漿機；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；氮氣吹干儀；固相萃取裝置。

1.2 主要材料與試劑

乙腈、甲醇：色譜純；無水硫酸鈉、乙酸銨、異丙醇、冰醋酸、高氯酸、三乙胺：分析純；地西泮：標準品；1%高氯酸溶液；C18固相萃取小柱（500mg，3ml），含碳量為17%；微孔針筒式濾膜：0.2μm。

標準溶液的制備：稱取50.0mg地西泮，用乙腈溶解并于50ml容量瓶定容，取此標準貯備液，用1%高氯酸水溶液稀釋成濃度為0.05，0.10，0.20，0.50和1.00μg/ml的標準工作液，進樣測定。

1.3 試驗條件

色譜柱：Grace Smart RPC18 （250×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈-0.02M乙酸銨水溶液（60：40，v/v）；流速：1.0ml/min；檢測波長：230nm；進樣量：50μl。

1.4 樣品的提取與凈化

稱取5g（準確至0.01g）勻漿試樣，加無水硫酸鈉5g，用20ml乙腈提取，經(jīng)超聲、離心后，取上清液，重復(fù)一次，收集兩次提取液于雞心瓶中，加5-10ml異丙醇，旋蒸至近干，用5ml甲醇-水（2：8，v/v）溶解。C18固相萃取柱平衡后，將上述復(fù)溶液上樣；再用5ml甲醇-水-三乙胺（35：65：0.1，v/v）洗滌小柱；最后用5ml甲醇-乙酸（95：5，v/v）洗脫樣品殘留，收集洗脫液。洗脫液經(jīng)氮氣吹干，用1%高氯酸水溶液1ml，正己烷2ml復(fù)溶，取下層水相過0.2μm濾膜，供HPLC分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 方法的線性

本方法采用濃度為0.05，0.10，0.25，0.5，1.0ug/ml的標準樣品，作標準曲線，地西泮的線性相關(guān)系數(shù)分別為0.9997，標準曲線見圖1。

2.2 方法最低檢出限的確定

檢出限由添加的最低濃度得出，按照3倍信噪比設(shè)定地西泮檢出限，本方法的最低檢測限為0.01mg/kg。

2.3 準確度與精密度實驗

以空白豬肌肉樣品做3個濃度的加標回收實驗，每個濃度做6個平行樣，具體實驗結(jié)果如下：

（A）空白豬肉樣品（B）添加濃度為0.01mg/kg豬肉（C）0.05ug/ml標準溶液。

經(jīng)測定，豬肉的平均回收率分別為89.1-92.3%，本方法的精密度好，準確度高，操作簡便，適合推廣應(yīng)用。

3 結(jié)語

本研究提供了一種液相色譜法檢測豬肉中地西泮含量的方法，是對氣質(zhì)聯(lián)用的國標測定方法的有效補充，本方法回收率、精密度均理想，采用實驗室常規(guī)的儀器設(shè)備和試劑，適合在具有一般檢測條件的實驗室進行推廣。

參考文獻

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