高效液相色譜法測定復(fù)方鋅布顆粒中馬來酸氯苯那敏含量

黃玉昌 ，曾慶偉，吳芳花，鄺美婷

（1．廣東省河源市食品藥品檢驗(yàn)所，廣東 河源 517000； 2．廣東醫(yī)學(xué)院，廣東 東莞 523808）

復(fù)方鋅布顆粒主要成分是葡萄糖酸鋅、布洛芬和馬來酸氯苯那敏。該藥在臨床上為感冒用藥類非處方藥，用于治療普通感冒或流行性感冒引起的發(fā)熱、頭痛、鼻塞等癥[1]。其中，馬來酸氯苯那敏為抗組胺藥，能減輕由感冒或流感引起的鼻塞、流涕、打噴嚏等癥狀。該藥的現(xiàn)行檢驗(yàn)依據(jù)為國家藥品標(biāo)準(zhǔn)[2]，用紫外可見分光光度法測定馬來酸氯苯那敏含量[3]。但在實(shí)際操作中發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)中所用的試劑苯有揮發(fā)性、高毒性與致癌性，一旦吸入，易致呼吸困難，對人體危害極大；且試驗(yàn)流程復(fù)雜，花費(fèi)時(shí)間長，測得的試驗(yàn)結(jié)果偏差也大。筆者采用高效液相色譜法對該藥中的馬來酸氯苯那敏含量進(jìn)行測定，結(jié)果樣品處理簡單，檢測方法靈敏度高、誤差小、重復(fù)性好、專屬性強(qiáng)。

1 儀器與試藥

LC－20AT型高效液相色譜儀(日本島津，L20114916219AE)，SPD－M20A型檢測器(L20154908803AE)，CP225D型電子分析天平(51061464)，Intersil ODS－SP型(十八烷基硅烷建合硅膠柱，C ／N:5020－02746，S／N:OAI92654）。馬來酸氯苯那敏對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為100047－200606）；復(fù)方鋅布顆粒（海南先聲藥業(yè)有限公司，規(guī)格為每包含葡萄糖酸鋅0．1 g，布洛芬 0．15 g，馬來酸氯苯那敏 2 mg，批號分別為 09－120701，09－120706，09－120710）；乙腈（美國 Honeywell Burdick＆ Jackson）為色譜純，其余試劑均為分析純；純化水。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：十八烷基硅烷建合硅膠柱(250 mm×4．6 mm，5 m)；流動(dòng)相：磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫銨 11．5 g，加水適量使溶解，加磷酸 1 mL，用水稀釋至 1 000 mL）－乙腈（80∶20）；流速：1．0 mL ／min；柱溫：40 ℃ ；檢測波長：262 nm；取樣量：10 μL。精密量取對照品溶液10 μL注入高效液相色譜儀，理論板數(shù)按氯苯那敏峰計(jì)算為13 892，與馬來酸峰分離度大于1．5。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2．2 溶液制備

取馬來酸氯苯那敏對照品適量，精密稱定，置容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成質(zhì)量濃度為0．08 g／L的對照品溶液，搖勻，即得對照品溶液。精密稱取本品適量（約相對于馬來酸氯苯那敏2 mg），置25 mL容量瓶中，加流動(dòng)相適量，振搖使馬來酸氯苯那敏溶解，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液。按處方比例取除馬來酸氯苯那敏外的其余組分，按供試品制備工藝和供試品溶液制備方法，制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)：按處方比例，制成缺馬來酸氯苯那敏的陰性對照品溶液，濾過，精密量取10 μL注入高效液相色譜儀，測定，結(jié)果見圖1 A。結(jié)果表明，陰性樣品、流動(dòng)相在馬來酸氯苯那敏色譜相應(yīng)位置上無干擾峰出現(xiàn)，說明處方中其他成分對測定結(jié)果無影響，故本品用此色譜條件測定無干擾。

線性關(guān)系考察：精密稱取馬來酸氯苯那敏對照品適量，用流動(dòng)相溶解并稀釋成質(zhì)量濃度為0．8 g／L的對照品溶液。分別精密量取適量，用流動(dòng)相稀釋成質(zhì)量濃度分別為 0．008，0．04，0．08，0．4，0．8 g／L 的對照品溶液。分別精密量取上述溶液各 10 μL 注入高效液相色譜儀，按擬訂色譜條件分別測定，以峰面積（Y）對質(zhì)量濃度（X）作線性回歸，得回歸方程 Y＝8．9×106X－8 834．7，r＝1．000 0。結(jié)果表明，馬來酸氯苯那敏質(zhì)量濃度在0．008 415～0．841 5 g／L范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：取線性試驗(yàn)項(xiàng)下質(zhì)量濃度為0．008 g／L的對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果的 RSD為0．04%，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批（批號為09－120706）樣品 6份，照2．2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法測定其含量。結(jié)果含量平均值為98．82%，RSD為0．74%，表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取上述同一供試品溶液（質(zhì)量濃度約為0．08g／L），分別于 0，1，4，8，16，24 h 時(shí)在擬訂色譜條件下進(jìn)樣測定。結(jié)果峰面積值基本無變化，RSD為0．64%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的樣品（批號為09－120706）9份，分別精密加入對照品適量，按擬訂色譜條件測定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 馬來酸氯苯那敏加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）

2．4 樣品含量測定

按擬訂方法對3個(gè)批次的樣品進(jìn)行含量測定，每個(gè)樣品平行測定 2次，取平均值。結(jié)果批號為 09－120701，09－120706，09－120710的3批樣品中馬來酸氯苯那敏含量分別為標(biāo)示量的97．0% ，97．8% ，98．0% 。

3 討論

取馬來酸氯苯那敏（0．08 g／L）對照品溶液在 200～300 nm波長內(nèi)掃描，結(jié)果在262 nm波長處有最大吸收，且吸收光譜曲線較平滑，參考文獻(xiàn)[3]，選擇262 nm作為測定波長。試驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)所用高效液相色譜儀對溫度較敏感，在天氣轉(zhuǎn)冷情況下，柱壓增大，儀器警示報(bào)停，阻礙試驗(yàn)繼續(xù)進(jìn)行，故本研究提高柱溫至40℃，同時(shí)通過對比各種柱溫，結(jié)果無顯著性差異。用超聲、振搖等不同方式對樣品進(jìn)行提取，結(jié)果差異無顯著性，參考文獻(xiàn)[3－6]，選擇振搖提取方式。本研究用磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫銨11．5 g，加水適量使溶解，加磷酸1 mL，用水稀釋至1 000 mL）－乙腈（80∶20）代替原來的氯仿作為提取溶劑，試劑更環(huán)保，提取步驟簡單，結(jié)果更準(zhǔn)確可靠。

參考文獻(xiàn)：

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