反相高效液相色譜法考察注射用頭孢米諾鈉的穩(wěn)定性

彭貴琴，陳萬一，廖 斌

（重慶市腫瘤研究所，重慶 400030）

頭孢米諾鈉（cefminox sodium）為頭霉素類抗生素，對 β－內(nèi)酰胺酶高度穩(wěn)定[1－2]。該藥能抑制細(xì)胞壁的生物合成，并能結(jié)合于肽多糖，抑制肽多糖與脂蛋白結(jié)合而促進溶菌；還能與革蘭陰性菌特有的外膜脂蛋白二氨基庚二酸結(jié)合，在短時間內(nèi)顯示其很強的雙重殺菌作用[3]。其對各種β－內(nèi)酰胺酶有很強的耐受性和穩(wěn)定性，體內(nèi)分布好，不良反應(yīng)少。但由于頭孢米諾鈉藥物本身的穩(wěn)定性差[4]，因此本試驗考察了頭孢米諾鈉粉針配置0．9%氯化鈉注射液后，在常用試驗條件下的穩(wěn)定性，為開展臨床動物試驗提供了可靠依據(jù)。

1 儀器與試藥

2690型高效液相色譜儀，包括中央控制器、高壓泵、全自動進樣器、996二極管陣列檢測器、Millennium Chromatography Manager色譜數(shù)據(jù)工作站(美國Waters公司)；BP 211D型十萬分之一電子分析天平(德國Sartorius公司)。頭孢米諾對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為130508－201003）；注射用頭孢米諾鈉（山東魯抗醫(yī)藥有限公司，批號為131001）；所有試劑均為色譜純，試驗用水為蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:Diamosil C18柱(150 mm ×4．6 mm，5 μm);保護柱:Dikma Easy Guard C18柱(8 mm ×4 mm，5 μm)； 流動相:醋酸 － 甲醇 － 四氫呋喃(99∶0．5∶0．5)，混合后以三乙胺調(diào) pH 至 3．2±0．1的混合溶液；流速:1 mL／min;柱溫:40℃;檢測波長:254 nm；靈敏度:0．03315 AUFS。在上述色譜條件下，取對照品溶液和供試品溶液20 μL分別進樣，得色譜圖。出峰時間均為6．05 min，色譜峰良好，拖尾因子為 1．02，且無內(nèi)源性雜質(zhì)峰干擾(圖1)。

2．2 溶液制備

取頭孢米諾對照品適量，精密稱定，加蒸餾水溶解并制成每1 mL含 0．2 mg的溶液，作為對照品溶液。取頭孢米諾鈉適量，精密稱定，加0．9%氯化鈉注射液溶解并制成每1 mL含0．2 mg的溶液，作為供試品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：分別取頭孢米諾貯備液 (0．2 g ／L)0．05，0．5，1，2，3，4，5 mL，置 10 mL 容量瓶，用流動相溶液稀釋至刻度，即得工作液，工作液質(zhì)量濃度分別為1，10，20，40，60，80，100 μg ／mL。取工作液 20 μL進樣測定，以頭孢米諾對照品峰面積積分值（Y）對其質(zhì)量濃度（X）進行線性回歸，得回歸方程(權(quán)重 W＝1／C2)Y＝2．53×104X － 2．64 × 103（r＝ 0．999 9）。結(jié)果頭孢米諾檢測質(zhì)量濃度在1～100 μg／mL 范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

圖1 高效液相色譜圖

精密度與準(zhǔn)確度試驗：取對照品貯備液，配置為 10，40，80 μg／mL的高、中、低質(zhì)量濃度對照品溶液，于同日內(nèi)連續(xù)測定5次，連續(xù)測定5 d，計算日內(nèi)、日間精密度和準(zhǔn)確度。結(jié)果數(shù)據(jù)均在正常值范圍內(nèi)，穩(wěn)定性良好。見表1。

表1 精密度及準(zhǔn)確度試驗結(jié)果(X±s)

穩(wěn)定性試驗：精密稱取頭孢米諾鈉適量，用0．9%氯化鈉注射液配置成為臨床動物試驗所需的 3個質(zhì)量濃度，即30，60，120 g／L的樣品溶液，分別置低溫（4℃）和實驗室條件空調(diào)恒溫（20 ℃）下避光保存，臨測前用流動相分別稀釋成 15，30，60 μg ／mL的樣品溶液，使其測量值在標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍以內(nèi)。結(jié)果表明樣品在2種存放條件下于12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

回收率試驗：取頭孢米諾鈉對照品適量，精密稱定，加0．9%氯化鈉注射液溶解并制成 0．2 g ／L 的溶液，配置為 10，40，80 μg／mL的高、中、低質(zhì)量濃度對照品溶液，取20 μL進樣，每個質(zhì)量濃度的樣品連續(xù)進樣5次，由所測得的檢出濃度與配置的濃度相比較，計算回收率(n＝5)。結(jié)果見表2。

表2 方法回收率試驗結(jié)果（n＝5）

2．4 樣品含量測定

取對照品和供試品貯備液各20 μL分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標(biāo)法以峰面積進行計算。通過測定樣品的實際含量與供試品貯備液含量的比較，求出此批樣品的平均百分含量為 97．12% （n＝15），RSD 為 0．32% ，符合《中國藥典》要求，結(jié)果樣品瓶編號為 1，2，3的頭孢米諾平均百分含量分別為96．78% ，97．39% ，97．17% 。

3 討論

注射用頭孢米諾鈉在20℃時0～12 h的穩(wěn)定性與以往試驗研究結(jié)果相近[5]。且5 d內(nèi)試液的含量還能達到90%以上。結(jié)果表明，常溫20℃下降解的速度比低溫條件下明顯提高，通過對數(shù)據(jù)進行整理，發(fā)現(xiàn)20℃下頭孢米諾鈉降解的速率有加快的趨勢，可能與降解過程中樣品溶液的內(nèi)環(huán)境發(fā)生改變有關(guān)。張濤[6]證實了通過光照、pH的變化導(dǎo)致酸堿、氧化的破壞及溫度的影響都可導(dǎo)致頭孢米諾鈉的穩(wěn)定性下降。周慧萍等[7]還考察了不同類型的常用藥物與頭孢米諾鈉配伍后的穩(wěn)定性，如其他抗菌藥物硝咪唑類（甲硝唑、替硝唑）、喹諾酮類（左氧氟沙星）、抗病毒藥物（利巴韋林）、止血藥（酚磺乙胺）等，發(fā)現(xiàn)在一定溫度、時間、環(huán)境條件下試驗是穩(wěn)定的。計佩影等[8]考察了5%轉(zhuǎn)化糖注射液的配伍檢查，主要考慮患者的能量供給。而本試驗主要用于研究動物模型，無需能量補充，且轉(zhuǎn)化葡萄糖易產(chǎn)生降解物5－羥甲糠醛，出現(xiàn)不必要的干擾，因此選0．9%氯化鈉注射液代替。試驗研究明確了在低溫、避光、密封和適宜的pH下，頭孢米諾鈉對照品與注射液的質(zhì)量變化情況，穩(wěn)定性以3～5 d內(nèi)試液為宜，降低了多次試驗臨用臨配的人為因素誤差，提高了試驗的準(zhǔn)確性，為臨床試驗動物的準(zhǔn)確用藥及藥代動力學(xué)研究提供了理論依據(jù)。

參考文獻：

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[8]計佩影，計鳳梅，張海燕．注射用頭孢米諾鈉與5%轉(zhuǎn)化糖注射液配伍穩(wěn)定性考察[J]．中國藥業(yè)，2010，20(13):27．