腫節(jié)風(fēng)中總黃酮大孔樹(shù)脂吸附－脫吸附動(dòng)力學(xué)研究

楊曉東

（湖南省懷化市第一人民醫(yī)院藥劑科，湖南 懷化 418000）

腫節(jié)風(fēng)為金粟蘭科植物草珊瑚 Sarcandra glabra（Thunb.）Nakai的干燥全株，具清熱涼血、活血消斑、祛風(fēng)通絡(luò)等功效，臨床上用于治療腫瘤（晚期胰腺癌、消化系統(tǒng)惡性腫瘤和鼻部惡性腫瘤、白血病等）、細(xì)菌性痢疾、骨折及多種口腔疾病，療效良好[1－2]。酚類(lèi)、鞣質(zhì)、黃酮苷、香豆素和內(nèi)酯等為腫節(jié)風(fēng)的主要成分，其中總黃酮是其抗腫瘤的有效成分之一[3]。腫節(jié)風(fēng)水提取液中總黃酮的初步純化后，選用大孔樹(shù)脂進(jìn)一步純化，通過(guò)靜態(tài)吸附和動(dòng)態(tài)吸附試驗(yàn)，以總黃酮的比吸附量和解洗脫率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，進(jìn)行多種大孔樹(shù)脂的篩選，最終確定選擇HPD－100型大孔樹(shù)脂。本試驗(yàn)中對(duì)總黃酮在HPD－100型大孔樹(shù)脂上的吸附與脫吸附的動(dòng)力學(xué)過(guò)程進(jìn)行了研究，為確定大孔樹(shù)脂分離純化腫節(jié)風(fēng)純化工藝條件（吸附終點(diǎn)與洗脫終點(diǎn)）提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

Lambda Bio 40型紫外分光光度儀；Mettler AE－200型電子分析天平。HPD－100型大孔吸附樹(shù)脂（滄洲寶恩化工有限公司）；腫節(jié)風(fēng)藥材（湖南三湘中藥飲片有限公司）；蘆丁對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為100080－200707）；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 樹(shù)脂預(yù)處理

HPD－100濕法裝柱，在樹(shù)脂柱內(nèi)加入高于樹(shù)脂層10 cm的乙醇，浸泡4 h后，放出浸液，以乙醇洗脫，至洗滌液在試管中加水稀釋不渾濁且用紫外光譜掃描不得檢出吸收峰為止，再用水洗滌至無(wú)醇味，備用。

2.2 溶液制備

取腫節(jié)風(fēng)適量，加14倍量水，煎提2.5 h，濾過(guò)；濾渣加12倍量水，煎提2 h，濾過(guò)，合并濾液；80℃以下減壓濃縮至提取液含生藥0.6 g/mL，加入乙醇使藥液含醇濃度達(dá)50%，靜置24 h，濾過(guò)，回收乙醇，濃縮至提取液含生藥0.6 g/mL，即得供試品溶液。精密稱取在120℃干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品53.3 mg，置25 mL容量瓶中，加無(wú)水乙醇20 mL，置水浴上微熱使溶解，放冷，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取2.5 mL，置25 mL容量瓶中，加蒸餾水稀釋，使乙醇濃度為70%，即得每1 mL中含無(wú)水蘆丁0.213 mg的對(duì)照品溶液。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

精密吸取質(zhì)量濃度為0.213 g/L的蘆丁對(duì)照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL，分別置 25 mL 容量瓶中，各加甲醇至6.0 mL，加 5%亞硝酸鈉溶液 1 mL，搖勻，放置 6 min，加 10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加氫氧化鈉試液10 mL，再加水至刻度，搖勻，取10 mL，以2 000 r/min的速率離心3 min，放置12 min。按2005年版《中國(guó)藥典（一部）》附錄ⅤB中分光光度法，在490 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度（Y）為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為 Y＝2.013 X －0.013，r＝0.999 9(n＝6)。結(jié)果表明，蘆丁進(jìn)樣量在 0.213 ～1.278 mg范圍內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系。

2.4 總黃酮含量測(cè)定

精密量取2.2項(xiàng)下供試品溶液適量，置25 mL容量瓶中，加水至6 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加氫氧化鈉試液10 mL，再加水至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另各取相同量上述供試品溶液，置25 mL容量瓶中，不加顯色劑，直接加水至刻度，搖勻，作為空白對(duì)照品溶液。分別取上述供試品溶液、空白對(duì)照品溶液適量，在490 nm波長(zhǎng)條件下測(cè)定其紫外吸收度。

2.5 動(dòng)態(tài)吸附動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)

取2.2項(xiàng)下供試品溶液適量，以2 BV/h的流速通過(guò)裝有5.6 g HPD －100型濕樹(shù)脂的玻璃柱（內(nèi)徑 1 cm），每 1 BV（10 mL）流出液收集1份，按上述方法測(cè)定各份流出液中總黃酮的含量，并根據(jù)上柱前藥液的含量計(jì)算各份流出液中總黃酮的泄漏率。結(jié)果見(jiàn)表1。以流出液的份數(shù)（BV/份）為橫坐標(biāo)、總黃酮的泄漏率（%）為縱坐標(biāo)，繪制總黃酮在HPD－100型樹(shù)脂柱上的泄漏曲線，見(jiàn)圖1。

表1 總黃酮在HPD－100型樹(shù)脂柱上的泄漏率

圖1 總黃酮在HPD－100型樹(shù)脂上的泄漏曲線

2.6 動(dòng)態(tài)脫吸附動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)

取上述動(dòng)態(tài)吸附動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)中已吸附飽和的HPD－100型樹(shù)脂柱，先用4 BV的蒸餾水洗柱，再用50%乙醇溶液以8 BV/h流速進(jìn)行洗脫，每1 BV流出液收集1份，同上測(cè)定各份流出液中總黃酮的含量，見(jiàn)表2。以洗脫液的份數(shù)為橫坐標(biāo)、總黃酮的相對(duì)濃度（洗脫液中總黃酮濃度占上樣前藥液濃度的比值）為縱坐標(biāo)，繪制總黃酮在HPD－100型樹(shù)脂柱上的洗脫曲線，結(jié)果見(jiàn)圖2。

表2 各流份洗脫液中總黃酮的含量

圖2 總黃酮在HPD－100型樹(shù)脂上的洗脫曲線

3 討論

預(yù)試驗(yàn)中，對(duì)水提取液經(jīng)過(guò)初步純化與不經(jīng)過(guò)初步純化的大孔樹(shù)脂吸附分離純化進(jìn)行了對(duì)比考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，水提液經(jīng)過(guò)初步純化后再上大孔樹(shù)脂進(jìn)行吸附分離，總黃酮提取物的純度明顯提高，大孔樹(shù)脂的使用周期也明顯提高。因此，對(duì)水提液的初步純化有利于提高大孔樹(shù)脂吸附分離的效果，延長(zhǎng)大孔樹(shù)脂的使用周期，有利于大孔樹(shù)脂的再生。

筆者通過(guò)靜態(tài)吸附和動(dòng)態(tài)吸附試驗(yàn)，以總黃酮的比吸附量和解洗脫率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，選用 PHD100，D －101，LSA －7，LSA －10，LSA－30，ADS－17，ADS－21，ADS－F8等8種樹(shù)脂進(jìn)行了篩選，通過(guò)對(duì)比上述評(píng)價(jià)指標(biāo)，并以總黃酮比吸附量和解洗脫率為縱坐標(biāo)、藥液濃度為橫坐標(biāo)繪制動(dòng)態(tài)吸附和洗脫等溫曲線圖，最終確定選擇HPD－100型大孔樹(shù)脂。動(dòng)態(tài)吸附動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)結(jié)果顯示，腫節(jié)風(fēng)提取液中總黃酮在HPD－100型樹(shù)脂上泄漏損失10%左右時(shí)，上樣的藥液體積約為 2 BV（即 20 mL），測(cè)定試驗(yàn)所用HPD－100型樹(shù)脂的水分為64.2%，通過(guò)計(jì)算得每克 HPD－100型干樹(shù)脂約吸附10 mL。因此，可確定腫節(jié)風(fēng)提取液以生藥量計(jì)質(zhì)量濃度為0.6 g/mL時(shí)，在HPD－100型樹(shù)脂柱上的吸附終點(diǎn)為流出液達(dá)2 BV左右。另外，由動(dòng)態(tài)脫吸附動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)結(jié)果可知，在以50%乙醇為洗脫溶劑的情況下，洗脫液為5 BV時(shí)，腫節(jié)風(fēng)提取液中總黃酮已基本洗脫完全，故可以此作為洗脫的終點(diǎn)。

大孔樹(shù)脂吸附法近年來(lái)已廣泛應(yīng)用于各種植物和草藥的黃酮類(lèi)分離純化。黃酮類(lèi)化合物一般多具有酚羥基和糖苷鏈，有一定的極性和親水性、生成氫鍵的能力較強(qiáng)，有利于弱極性和極性樹(shù)脂的吸附。但在某些情況下吸附作用力強(qiáng)，解吸卻相當(dāng)困難，所以選擇樹(shù)脂種類(lèi)需綜合考慮吸附率、吸附速率、解吸率和產(chǎn)物得率及其黃酮含量等多方面因素[4－6]。

綜上所述，采用大孔樹(shù)脂動(dòng)態(tài)吸附與脫吸附動(dòng)力學(xué)研究，對(duì)腫節(jié)風(fēng)提取液中有效部位在大孔樹(shù)脂上的分離純化過(guò)程進(jìn)行有效控制，可為確定腫節(jié)風(fēng)提取液在大孔吸附樹(shù)脂分離純化工藝的吸附終點(diǎn)與洗脫終點(diǎn)提供科學(xué)合理的依據(jù)。

參考文獻(xiàn):

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