度他雄胺對(duì)人前列腺癌PC-3細(xì)胞移植裸鼠成瘤預(yù)防效應(yīng)與機(jī)制研究*

周仕軼 李俊濤張蜀武

成都中醫(yī)藥大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院/附屬醫(yī)院（成都 611137）

度他雄胺對(duì)人前列腺癌PC-3細(xì)胞移植裸鼠成瘤預(yù)防效應(yīng)與機(jī)制研究*

周仕軼 李俊濤**張蜀武

成都中醫(yī)藥大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院/附屬醫(yī)院（成都 611137）

目的探討新型5α還原酶抑制劑——度他雄胺對(duì)人前列腺癌PC-3細(xì)胞裸鼠移植瘤的成瘤預(yù)防效應(yīng)與機(jī)制。方法選取BALB/C裸鼠30只，隨機(jī)平均分為度他雄胺組、非那雄胺對(duì)照組和陰性對(duì)照組，均采用皮下注射人前列腺癌PC-3細(xì)胞建立移植瘤模型，同時(shí)度他雄胺組裸鼠每日腹腔注射度他雄胺含藥血清，非那雄胺組每日腹腔注射非那雄胺含藥血清，陰性對(duì)照組每日腹腔注射非含藥血清。給藥30d內(nèi)，觀察實(shí)驗(yàn)期間各組動(dòng)物移植瘤生長曲線，移植瘤倍增時(shí)間，成瘤百分率。30d后處死動(dòng)物，免疫組化法結(jié)合圖像分析各組裸鼠瘤體ECM降解程度，RT-PCR法檢測細(xì)胞外基質(zhì)-整合素（ECM-integrin）跨膜信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白integrinβ1，β2和β6的表達(dá)情況。結(jié)果實(shí)驗(yàn)期間各組裸鼠移植瘤成瘤率均為100%，移植瘤生長曲線近似，與陰性對(duì)照組相比，度他雄胺和非那雄胺組移植瘤成瘤平均潛伏期延長（P＜0.05），度他雄胺組腫瘤倍增時(shí)間比陰性對(duì)照組和非那雄胺組延長，差異具均統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。免疫組化檢測度他雄胺組和非那雄胺組瘤體ECM較陰性對(duì)照組明顯降解，表現(xiàn)為纖維鏈接蛋白（FN）和膠原（CL）表達(dá)明顯降低（P＜0.01或P＜0.05），基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）表達(dá)明顯增強(qiáng)（P＜0.01或P＜0.05）；RT-PCR法檢測度他雄胺組瘤體細(xì)胞integrinβ1和β6表達(dá)較陰性對(duì)照組明顯降低（P＜0.01或P＜0.05），integrinβ1 表達(dá)較非那雄胺組降低（P＜0.05），結(jié)論 度他雄胺能通過降解人前列腺PC-3細(xì)胞裸鼠抑制瘤ECM，降低integrinβ1和β6表達(dá)，從而抑制決定前列腺癌細(xì)胞生長、增殖和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵信號(hào)通路-ECM-integrin信號(hào)通路，從而延長移植瘤成瘤和倍增時(shí)間，但不能有效抑制成瘤率，因此尚不能明確其具有預(yù)防前列腺癌的作用，同時(shí)也說明前列腺癌形成和生長機(jī)制具有多重復(fù)雜性。

度他雄胺; PC3細(xì)胞; 前列腺腫瘤; 小鼠,裸

前列腺癌（Prostate Cancer, PCa）是老年男性常見腫瘤，美國2013年癌癥統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明該病預(yù)計(jì)發(fā)病率仍居所有腫瘤疾病的第一位，死亡率也僅次于肺癌位于腫瘤疾病第二位[1]，嚴(yán)重危害男性健康。在我國，PCa也是發(fā)病率和死亡率增長最快的腫瘤，并且由于早期診斷技術(shù)未能普及，形成了低于全球發(fā)病率的假象[2]，并呈現(xiàn)高M(jìn)R/IR（死亡率/發(fā)病率）比的現(xiàn)象[3]。

目前，針對(duì)PCa的治療復(fù)雜多樣，療效隨病程進(jìn)展而逐漸下降，因此對(duì)PCa預(yù)防，特別是化學(xué)（藥物）預(yù)防的研究成為了熱點(diǎn)。度他雄胺（Dutasteride）是新型5α還原酶抑制劑（5ARI），具有同時(shí)抑制5ARⅠ和5ARⅡ的雙重作用，臨床報(bào)道用于預(yù)防PCa有效，但同時(shí)存在增強(qiáng)Gleason高分級(jí)PCa發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的爭議。本研究利用體外細(xì)胞培養(yǎng)和裸鼠皮下注射移植瘤等方法，觀察度他雄胺對(duì)裸鼠移植瘤成瘤的預(yù)防效果，及其對(duì)PCa形成、增殖和轉(zhuǎn)移起關(guān)鍵作用的ECM-integrin（細(xì)胞外機(jī)制-整合素）跨膜信號(hào)通路的影響，探討其預(yù)防PCa的效應(yīng)和機(jī)制。

材料和方法

一、實(shí)驗(yàn)藥物及配制

度他雄胺軟膠囊，由葛蘭素史克公司生產(chǎn)，規(guī)格0.5mg/粒，國藥準(zhǔn)字H20110205，生產(chǎn)批號(hào)35826003。將膠囊去殼，內(nèi)含白色粉末溶于生理鹽水制成溶液。

非那雄胺片（Finasteride），由杭州默沙東制藥有限公司生產(chǎn)，規(guī)格5mg/粒，國藥準(zhǔn)字J20090145，生產(chǎn)批號(hào)130321。將片劑研磨成極細(xì)粉末，溶于生理鹽水制成溶液。

二、細(xì)胞培養(yǎng)

人前列腺癌PC-3細(xì)胞，由中科院昆明細(xì)胞庫提供，該細(xì)胞株不具有可檢測的雄激素敏感性，為雄激素非依賴性細(xì)胞。用含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液置于37℃、5%CO2的孵化箱內(nèi)培養(yǎng)、傳代，每周傳代3次，傳代比為1:3，直至細(xì)胞數(shù)量達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求。

二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及造模

（一）含藥血清提取

成年雄性SD大鼠45只，2月齡，體質(zhì)量200～250g，由成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（認(rèn)證編號(hào)：川實(shí)動(dòng)管質(zhì)第9號(hào)）。大鼠隨機(jī)分成3組，每組15只。3組大鼠分別灌胃度他雄胺溶液0.083mg?kg-1?d-1（相當(dāng)于成人日劑量的10倍），非那雄胺溶液0.83mg?kg-1?d-1（相當(dāng)于成人日劑量10倍）和等容生理鹽水，連續(xù)5d。腹主動(dòng)脈取血，分離足夠度他雄胺和非那雄胺含藥血清及非含藥血清。

（二）裸鼠及造模

雄性BALB/C裸小鼠30只，8～10周齡，體質(zhì)量20～ 22g，提供方同上。按文獻(xiàn)報(bào)道造模方法[4]，待PC-3細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長期，且濃度達(dá)到2×107個(gè)/mL時(shí)收集細(xì)胞并制成混懸液，調(diào)節(jié)好細(xì)胞濃度為5×107個(gè)/mL 的PC- 3細(xì)胞共2.5mL，以1mL注射器抽取細(xì)胞懸液， 每只裸鼠接種0.2mL， 接種細(xì)胞量約為1×107個(gè)，接種部位為裸鼠頸背皮下， 接種前用碘復(fù)消毒裸鼠皮膚。

三、實(shí)驗(yàn)分組和給藥

注射造模裸鼠隨機(jī)分為度他雄胺組、非那雄胺組和陰性對(duì)照組，每組30只。在注射后移植瘤生長期同時(shí)做腹腔注射給藥，度他雄胺組腹腔注射大鼠30%度他雄胺含藥血清0.2mL?kg-1?d-1；非那雄胺組腹腔注射大鼠30%非那雄胺含藥血清0.2mL?kg-1?d-1；陰性對(duì)照組腹腔注射30%大鼠無藥血清0.2mL?kg-1?d-1，連續(xù)30d。

四、移植瘤成瘤觀察

（一）移植瘤生長曲線觀測

細(xì)胞移植和給藥10d后，每3天測量1次腫瘤長徑（b），短徑（a），按公式V = 1/6（πab2）計(jì)算腫瘤體積，共觀察20d，并繪制生長曲線圖，并計(jì)算成瘤潛伏期。

（二）腫瘤體積倍增時(shí)間（TD）

TD = 0.1×t /（logDt-logDo）， Do為第一次測得的腫瘤直徑，Dt 為經(jīng)過t時(shí)間后測得的腫瘤直徑。

成瘤率的計(jì)算：成瘤百分率= （接種成功只數(shù)/接種總數(shù)）×100%。30d后，處死裸鼠，分離頸部移植瘤，大體觀察移植瘤的形態(tài)、體積、顏色及與周圍組織的關(guān)系。

五、ECM降解觀察

纖維連接蛋白（FN）、羊多克隆抗體（goat polyclonal IgG）和基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）羊多克隆抗體（goat polyclonal IgG）均購自Santa Cruz Biochemistry公司。以上相應(yīng)二抗及試劑盒購自北京中杉生物技術(shù)有限公司。將度他雄胺組、非那雄胺組和陰性對(duì)照組分離移植瘤組織進(jìn)行病理切片，免疫組化染色，膠原（CL）用Masson染色，運(yùn)用MIAS-2000型圖形圖像分析系統(tǒng)對(duì)染色結(jié)果進(jìn)行分析，觀測各指標(biāo)的面積、積分光密度和平均光密度。

六、RT-PCR法對(duì)ECM-integrin信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白觀察

（一）細(xì)胞總RNA提取

提取各組移植瘤細(xì)胞，用Trizol法裂解細(xì)胞，按比例加入氯仿，離心管混勻。室溫靜止分層后，40℃ 1 200×g，離心15min。在離心管中按比例加入室溫下75%乙醇，7 500×g，離心5min，棄上清液。室溫下靜止5～ 15min，細(xì)胞RNA沉淀干燥，溶解后，-70℃保存。

（二）PCR基因表達(dá)產(chǎn)物擴(kuò)增

1. 取5mL RNA樣本做凝膠電泳，以確定提取RNA的量是否達(dá)到反轉(zhuǎn)錄要求。

2. 將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，參照AMV Reverse Transcriptase（Ferment）操作程序進(jìn)行RNA的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，各檢測基因引物序列與片段長度見表1。

表1 各引物序列與片段長度

3. PCR基因擴(kuò)增，按反應(yīng)體系加入相關(guān)試劑和引物，反復(fù)嘗試摸準(zhǔn)PCR反應(yīng)條件后，取PCR產(chǎn)物5μL 1%瓊脂糖凝膠電泳80V，100mA，30min。采用Greenview染色，用全自動(dòng)凝膠成像儀成像，并分析結(jié)果，以β-actin為內(nèi)參照標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行半定量分析。分析系統(tǒng)測定各特異產(chǎn)物條帶和內(nèi)參照的強(qiáng)度，計(jì)算特異擴(kuò)增產(chǎn)物的相對(duì)量，計(jì)算公式為：特異擴(kuò)增產(chǎn)物的相對(duì)量=特異條帶的強(qiáng)度/內(nèi)參照的強(qiáng)度×100%。

七、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有資料均采用SPSS 19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。各組間比較采用單因素方差分析，其中方差齊者用LSD法，方差不齊者用Dunnett's檢驗(yàn)。

結(jié) 果

一、度他雄胺對(duì)裸鼠移植瘤成瘤的影響

各組裸鼠移植瘤成瘤潛伏期和腫瘤倍增時(shí)間見表2。結(jié)果顯示：度他雄胺組和非那雄胺組成瘤潛伏期比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。這兩組與陰性對(duì)照組比較，均有效延長，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。度他雄胺組裸鼠腫瘤倍增時(shí)間較陰性對(duì)照組和非那雄胺組延長，差異均具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05)。最終各組裸鼠成瘤率均為100%。各組裸鼠移植瘤生長曲線近似，見圖1。經(jīng)30d試驗(yàn)后處死裸鼠，剝離移植瘤觀察各組移植瘤瘤體形態(tài)近似，包膜均完整，均無向周圍組織浸潤生長現(xiàn)象，各組瘤體體積比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，見表2。各組瘤體剖面觀察呈粉紅色，中間有部分壞死灶。各組瘤體分離細(xì)胞經(jīng)染色鏡下觀察具有腫瘤細(xì)胞特征。

圖1 各組裸鼠移植瘤生長曲線圖

表2 各組裸鼠移植瘤平均成瘤潛伏期、腫瘤倍增時(shí)間和瘤體體積比較（±s）

表2 各組裸鼠移植瘤平均成瘤潛伏期、腫瘤倍增時(shí)間和瘤體體積比較（±s）

注：與陰性對(duì)照組相比,*P＜0.05; 與非那雄胺組比,△P＜0.05

組別 成瘤平均 腫瘤平均 30d腫瘤潛伏期(d) 倍增時(shí)間(d) 平均體積(mm3)陰性對(duì)照組 18±3.0 9±1.1 2339.5±233.7度他雄胺組 19±3.1*10±0.9*△2298.6±245.4非那雄胺組 19±3.7*9±1.3 2341.0±220.8

二、度他雄胺對(duì)裸鼠移植瘤ECM的降解作用

CL是ECM含量最多的成分，經(jīng)Masson染色后呈藍(lán)紫色；FN能促進(jìn)ECM各類成分的結(jié)合并沉積，經(jīng)免疫組化染色后陽性表達(dá)呈黃褐色；MMP-2具有降解前兩者的作用，經(jīng)免疫組化染色后陽性表達(dá)呈黃褐色。三者結(jié)合可作為觀測藥物對(duì)ECM降解作用的綜合指標(biāo)，通過MIAS-2000圖像分析系統(tǒng)，可從面積、積分光密度和平均光密度3個(gè)指標(biāo)來分析三者的表達(dá)量。結(jié)果與陰性對(duì)照組相比，度他雄胺和非那雄胺組能降低CL和FN的面積、積分和平均光密度，并增強(qiáng)MMP-2相關(guān)指標(biāo)的作用（P＜0.01或P＜0.05），兩組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），表明度他雄胺和非那雄胺均具有降解裸鼠移植瘤ECM的作用。各組CL、FN和MMP-2面積、積分和平均光密度比較見表3和圖2。

圖2 各組移植瘤CL、FN和MMP-2陽性表達(dá)

表3 各組CL、FN和MMP-2的面積，積分和平均光密度比較（±s）

表3 各組CL、FN和MMP-2的面積，積分和平均光密度比較（±s）

注：與陰性對(duì)照組相比，P＜0.05，P＜0.01

CL FN MMP-2組別 面積 積分光密度 平均光密度 面積 積分光密度 平均光密度 面積 積分光密度 平均光密度(μm2) (IU) (IU) (μm2) (IU) (IU) (μm2) (IU) (IU)陰性對(duì)照組 221.17±13.38 3347±223.6 78.66±14.06 142.34±16.09 876.21±93.44 81.22±9.11 3.05±0.42 24.65±0.32 6.87±0.56度他雄胺組 197.35±9.87**3059±151.7**67.04±13.58**136.67±11.47**853.23±93.19*70.69±9.03*3.66±0.40*29.77±0.37*7.25±0.50*非那雄胺組 199.82±9.36**3118±159.2**67.02±13.49**139.95±12.36*848.77±94.17*73.35±8.73*3.43±0.34**29.48±0.30*7.38±0.61****

三、度他雄胺對(duì)裸鼠移植瘤ECM-integrin信號(hào)通路的作用

度他雄胺在有效降解移植瘤ECM后，與陰性對(duì)照組比較，對(duì)integrinβ1和integrinβ6表達(dá)呈抑制作用（P＜0.01或P＜0.05），與非那雄胺組比較，對(duì)integrinβ1抑制作用更佳（P＜0.01）。各組對(duì)integrinβ1，integrinβ2和integrinβ6表達(dá)影響結(jié)果見表4和圖3至圖5。

表4 各組integrinβ1，integrinβ2和integrinβ6表達(dá)量比較（±s）

表4 各組integrinβ1，integrinβ2和integrinβ6表達(dá)量比較（±s）

組別 integrinβ1 integrinβ2 integrinβ6表達(dá)量 表達(dá)量 表達(dá)量陰性對(duì)照組 0.337±0.021 0.641±0.048 0.616±0.055度他雄胺組 0.055±0.006**△0.633±0.044 0.565±0.047*非那雄胺組 0.203±0.018**0.650±0.039 0.577±0.049*

注：與陰性對(duì)照組相比，*P＜0.05，**P＜0.01；與非那雄胺組相比,△P＜0.01

圖3 各組移植瘤細(xì)胞integrinβ1表達(dá)PCR擴(kuò)增圖

圖4 各組移植瘤細(xì)胞integrinβ2表達(dá)PCR擴(kuò)增圖

圖5 各組移植瘤細(xì)胞integrinβ6表達(dá)PCR擴(kuò)增圖

討 論

一、實(shí)驗(yàn)對(duì)象選擇

（一）實(shí)驗(yàn)藥物選擇

度他雄胺是新型5ARI，具有同時(shí)抑制5ARⅠ和5ARⅡ的雙重作用，已由美國FDA批準(zhǔn)上市，主要用于治療前列腺增生癥（BPH）和雄性脫發(fā)等病。目前度他雄胺用作藥物預(yù)防PCa的研究成為熱點(diǎn)，對(duì)諸如REDUCE實(shí)驗(yàn)（度他雄胺降低前列腺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)實(shí)驗(yàn)）等大規(guī)模臨床實(shí)驗(yàn)的綜合分析表明，BPH病人長期持續(xù)服用度他雄胺可以降低低分級(jí)PCa的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，并有助于治療性診斷高分級(jí)PCa，因此被視為PCa預(yù)防的里程碑[5]。循證醫(yī)學(xué)資料也表明，相比坦索羅辛對(duì)照組和安慰劑組，度他雄胺能有效降低BPH合并PCa高發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)患者的PCa患病率（MHRR: 0.66, 95% CI 0.52-0.85）[6]；但也有資料顯示，度他雄胺可能會(huì)增加高分級(jí)PCa的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[7]。目前，度他雄胺預(yù)防PCa的研究也主要見于上訴臨床研究，但預(yù)防機(jī)制實(shí)驗(yàn)研究未能查見，尚屬研究空白。因此本研究選擇度他雄胺為研究對(duì)象，擬揭示其預(yù)防PCa的實(shí)驗(yàn)效應(yīng)和機(jī)制。

（二）對(duì)照藥物選擇

非那雄胺是5ARⅡ抑制劑，臨床用于治療BPH，與實(shí)驗(yàn)藥物屬于同類藥物，但作用范圍不及度他雄胺。臨床PCPT（前列腺癌預(yù)防實(shí)驗(yàn)）研究[8]和循證醫(yī)學(xué)資料均顯示[9]，非那雄胺具有降低PCa發(fā)病率的作用，與對(duì)照組相比，合并OR=0.68，降低發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)32%。因此非那雄胺作為本研究的對(duì)照藥物，能同時(shí)探討并比較實(shí)驗(yàn)和對(duì)照藥物預(yù)防PCa的效應(yīng)和機(jī)制。

二、ECM-integrin信號(hào)通路

細(xì)胞外基質(zhì)-整合素細(xì)胞生存通路（ECM-integrin cell survival pathway）是PCa細(xì)胞失巢凋亡調(diào)控的關(guān)鍵機(jī)制之一，它的激活能促使細(xì)胞在脫離與ECM黏附后繼續(xù)生存[10]，從而促成PCa的最終形成，生長，侵襲和轉(zhuǎn)移。ECM與上皮細(xì)胞的相互作用能介導(dǎo)integrin依賴性分子激活（其中integrinβ1, β2和β6最重要，被發(fā)現(xiàn)在PCa發(fā)生和轉(zhuǎn)移進(jìn)程中明顯上調(diào)[11]），被激活的分子通過介導(dǎo)FAK（Focal adhesion kinase, 黏著斑激酶）激活，繼而激活Src基因族，Src再激活PI3K/Akt（磷脂酰肌醇3-蛋白激酶B）信號(hào)通路，促使細(xì)胞增殖和凋亡逃避，或通過介導(dǎo)ILK-1（Integrinlinked kinase1,整合素鏈接激酶1）激活，ILK1激活后可介導(dǎo)GSK3β（Glycogen synthase kinase3β，糖原合成激酶3β）激活并募集Snail基因族，然后通過級(jí)聯(lián)效應(yīng)激活PI3K/Akt信號(hào)通路，最終促使細(xì)胞在脫離ECM后生存并再與其他ECM黏附，促使PCa的生成。通過前期研究，我們已經(jīng)證實(shí)PI3K/Akt信號(hào)通路受到抑制，將會(huì)促使人前列腺癌DU-145細(xì)胞增殖抑制和凋亡[12]。因此，ECM-integrin信號(hào)通路是調(diào)控PCa生成和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵上游分子機(jī)制。通過前期研究，我們也證實(shí)了非那雄胺具有通過抑制CL和FN表達(dá)，增強(qiáng)MMP-2表達(dá)從而降解ECM的作用[13]。因此本研究正基于非那雄胺能降解ECM，從而推測其同類新型藥物度他雄胺也能降解ECM，兩種藥物降解ECM后導(dǎo)致ECM-integrin信號(hào)通路不能激活，其下游分子機(jī)制失效，從而使PCa不能形成、增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移的假設(shè)而立論的。

三、問題與展望

通過本研究，我們揭示了度他雄胺能通過降解人前列腺PC-3細(xì)胞裸鼠抑制瘤ECM，降低integrinβ1，β2和β6表達(dá)，從而抑制決定前列腺癌細(xì)胞生長、增殖和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵信號(hào)通路——ECM-integrin信號(hào)通路的作用。但各組裸鼠移植瘤最終均能成瘤，度他雄胺僅表現(xiàn)為能延遲移植瘤平均成瘤時(shí)間和腫瘤倍增時(shí)間，因此尚不能說明其具有預(yù)防前列腺癌的作用，這與大多數(shù)臨床研究文獻(xiàn)的報(bào)道存在一定矛盾。同時(shí)，由于其能降解ECM，特別是MMP-2表達(dá)受到抑制后，會(huì)導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞易于在瘤體中活動(dòng)，而獲得侵襲和轉(zhuǎn)移的能力，這也印證了對(duì)其會(huì)增加高分級(jí)PCa發(fā)生的擔(dān)憂。本研究移植瘤并非位于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的前列腺，因此度他雄胺和非那雄胺降解ECM和調(diào)控ECM-integrin的作用是否充分發(fā)揮，也還難以完全闡明。

今后，還應(yīng)進(jìn)行大樣本和長期隨訪的臨床研究來充分揭示度他雄胺對(duì)PCa的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的抑制作用。由于PCa的發(fā)生機(jī)制具有多樣復(fù)雜性，藥物預(yù)防PCa的效應(yīng)和機(jī)制還應(yīng)成為研究熱點(diǎn)，以便為藥物臨床應(yīng)用提供理論支持和方法指導(dǎo)。

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（2014-02-28收稿）

Prevention effects dutasteride on human prostate cancer PC-3 cells transplanting tumors in nude miceand its mechanism

Zhou Shiyi, Li Juntao**, Zhang Shuwu Clinical Medical College of Chengdu University of TCM/Aff liated Hospital of Chengdu University of TCM, Chengdu 611137, China

ObjectiveTo investigate the prevention effects of new type 5α reductase inhibitor-dutasteride on human PC-3 cells transplanting tumors in nude mice and explore its mechanism.MethodsHuman prostate cancer cells PC-3 were transplanted subcutaneously around 30 nude mice’s necks to establish transplanting tumor models. Then 30 nude mice were divided randomly and evenly into the dutasteride group(treated with intraperitoneal injection of dutasteride serum), the fenasteride group(treated with intraperitoneal injection of fenasteride serum) and the control group (treated with intraperitoneal injection of no durg serum). The tumor growth curve, tumor double time and tumor formation rate were measured during 30 days administration . The immunochemistry and MIAS image analysis were applied to investigate ECM degradation and RT-PCR was applied to measure the expression of integrin β1, and β6 after 30 days of transplantation.Results The tumor growth curves of three groups were similar. Dutasteride could prolong tumor double time as compared with the other 2 groups but there was no statistical signif cance (P>0.05). Both dutasteride and fenasteride could degrade tumor ECM by inhibiting the expression of CL and FN (P<0.01 or P<0.05), and enhancing MMP-2 expression (P<0.01 or P<0.05) compared with the control group. Dutasteride could inhibit integrin β1 and β6 expression (P<0.01 or P<0.05) and had the inhibiting trend of integrin β2 (P>0.05) compared with the control group.ConclusionDutasteride can inhibit ECM-integrin signal pathway by degrading ECM and inhibiting the expression of integrinβ1 and β6. Even so, it can only prolong the tumor formation and double time but can not prevent the formation of human PC-3 transplanting tumor in nude mice. Thus the present data can not supportthat dutasteride has the prevention effect on PCa, but reflecting the complicatedprinciples of PCa formation.

Dutasteride; PC3 cells; prostatic neoplasms; mice, nude

10.3969/j.issn.1008-0848.2014.06.003

R 737.25

資助: 四川省衛(wèi)生廳2012年立項(xiàng)資助科研課題（編號(hào)：120466）**為在讀博士研究生