急性支氣管肺炎患兒血漿HNP1-3水平及其臨床意義

朱銀燕　華春珍　吳光聲　李珊

急性支氣管肺炎患兒血漿HNP1-3水平及其臨床意義

朱銀燕華春珍吳光聲李珊

【 摘要 】目的了解急性支氣管肺炎患兒血漿人中性粒細(xì)胞多肽1-3（HNP 1-3）水平及其在病原判斷中的參考價值。 方法88例急性支氣管肺炎患兒，分離其急性期和恢復(fù)期血漿，應(yīng)用ELISA法檢測HNP 1-3、白細(xì)胞計數(shù)、中性粒細(xì)胞計數(shù)和hs-CRP，并進(jìn)行比較。 結(jié)果急性期血漿HNP1-3為（257.0±150.6）ng/ml，明顯高于恢復(fù)期的（215.6±104.5）ng/ml（t=2.12，P＜0.05），且血漿HNP1-3水平與白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞計數(shù)和hs-CRP均明顯相關(guān)（r=0.283、0.275、0.273，均P＜0.01）。 結(jié)論88例急性支氣管肺炎患兒急性期血漿HNP1-3水平明顯升高，且與白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞總數(shù)和hs-CRP相關(guān)，可能對細(xì)菌性感染的診斷有參考價值。

【關(guān)鍵詞】支氣管肺炎人中性粒細(xì)胞多肽兒童

急性支氣管肺炎是我國兒童最常罹患的疾病之一，引起小兒肺炎的病原有細(xì)菌、病毒、支原體等，正確判斷病原是有效治療的前提。在發(fā)展中國家，小兒肺炎以細(xì)菌感染多見[1]，但細(xì)菌培養(yǎng)時間較長，門診患兒深部痰液采集依從性差，且抗生素的廣泛使用明顯影響病原菌的檢出率，故血常規(guī)和hs-CRP測定就成了輔助病原判斷的重要參考。人中性粒細(xì)胞多肽（human neutrophil peptides，HNP）是一類可殺滅細(xì)菌的α-防御素，是天然免疫的重要組分，共有6種，其中HNP 1-3主要存在于中性粒細(xì)胞的嗜天青顆粒中，其基礎(chǔ)水平的高低反映了抗感染作用的強(qiáng)弱[2]。正常情況下血漿HNP水平很低；而急性感染時則向胞外分泌大幅度增加[3]。本研究旨在探索急性支氣管肺炎患兒血漿HNP水平的變化，分析其在病原判斷中的可能參考價值。

1　對象和方法

1.1對象2012-01—03我院住院的部分急性支氣管肺炎患兒，共88例，其中男53例，占60.2%，女35例，占39.8%；年齡3～97（29.4±17.2）個月；均經(jīng)痰液支原體DNA檢測和雙份血清支原體抗體IgG檢測排除支原體感染。所有患兒肺部均可聞及細(xì)濕啰音，X線胸片均見斑片狀或較大片陰影。所有患兒進(jìn)行痰培養(yǎng)檢查，其中7例培養(yǎng)到致病菌，占8.0%，包括肺炎鏈球菌2例，肺炎克雷伯桿菌2例，大腸埃希菌1例，卡他莫拉氏菌1例、金黃色葡萄球菌1例。

1.2試劑和儀器EDTA抗凝管購自浙江友利醫(yī)學(xué)科技有限公司，人HNP 1-3試劑盒購自荷蘭Hycult Biotch公司，VERSA max microplate reader酶標(biāo)儀為美國Molecular Devices公司產(chǎn)品。

1.3標(biāo)本的采集和分離患兒分別于入院時以及恢復(fù)期（臨床癥狀和體征明顯好轉(zhuǎn)后），檢查臨床血液指標(biāo)，檢查時抽取全血標(biāo)本1ml，標(biāo)本以EDTA抗凝，冰浴靜置數(shù)分鐘后4℃低溫低速離心分離血漿200μl并分裝2管，每管100μl，置-80℃冰箱保存待用。

1.4血漿HNP濃度的測定將-80℃保存的血漿室溫復(fù)溫，采用人HNP 1-3試劑盒，以ELISA法測定血漿樣本的HNP水平，采用復(fù)孔檢測結(jié)合陰性和零孔對照，保證結(jié)果準(zhǔn)確可靠。整個操作過程嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.5統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件，測得計量資料采用表示，兩兩比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析。

2　結(jié)果

2.1一般情況急性期88例患兒均進(jìn)行血常規(guī)檢查，其中50例白細(xì)胞計數(shù)高于正常參考值，占56.8%，中性粒細(xì)胞計數(shù)57例高于正常，占64.8%；84例同時檢測了hs-CRP，34例患兒hs-CRP高于正常（10mg/L），占40.5%；恢復(fù)期69例患兒進(jìn)行了血常規(guī)和hs-CRP復(fù)查，其中白細(xì)胞計數(shù)8例高于正常，占9.1%，2例中性粒細(xì)胞計數(shù)高于正常，占2.3%，11例患兒hs-CRP高于正常，占12.5%。

2.2急性期和恢復(fù)期血漿HNP 1-3、白細(xì)胞計數(shù)、中性粒細(xì)胞計數(shù)和hs-CRP比較見表1。

表1　急性期和恢復(fù)期血漿HNP 1-3、白細(xì)胞計數(shù)、中性粒細(xì)胞計數(shù)和hs-CRP比較

由表1可見，88例患兒急性期血漿白細(xì)胞計數(shù)、中性粒細(xì)胞計數(shù)、hs-CRP水平、HNP 1-3水平均明顯高于恢復(fù)期（P＜0.05或0.01）。

2.3血漿HNP1-3水平、白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞計數(shù)和hs-CRP水平相關(guān)性分析見表2。

由表2可見，血漿HNP 1-3水平與白細(xì)胞計數(shù)、中性粒細(xì)胞計數(shù)和hs-CRP水平均明顯相關(guān)（均P＜0.01）。

表2　血漿HNP1-3水平、白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞計數(shù)和hs-CRP水平相關(guān)性分析

3　討論

本組資料顯示，88例患兒中半數(shù)以上的患兒急性期白細(xì)胞計數(shù)和中性粒細(xì)胞計數(shù)高于正常同齡兒，40.5%的患兒hs-CRP高于正常，符合細(xì)菌感染的表現(xiàn)，但深部痰液細(xì)菌培養(yǎng)陽性率較低，僅8.0%，分析原因，考慮與多數(shù)患兒入院前已用過抗生素有關(guān)，采集的痰液標(biāo)本是否合格以及標(biāo)本是否及時接種對結(jié)果也有一定影響。本組痰液細(xì)菌培養(yǎng)陽性的8例患兒和血常規(guī)和hs-CRP符合細(xì)菌感染的表現(xiàn)，所有患兒均使用過抗菌藥物，經(jīng)治療后白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞計數(shù)和hs-CRP水平明顯下降，臨床治愈，提示治療有效，但有為數(shù)不少的患兒缺乏細(xì)菌感染的充分依據(jù)依舊預(yù)防性使用了抗菌藥物，提示抗菌藥物的過度應(yīng)用在臨床依舊存在，應(yīng)強(qiáng)調(diào)避免抗菌藥物濫用。

國內(nèi)外關(guān)于HNP與疾病相關(guān)性的研究相對較少。HNP屬于一類抗微生物多肽，HNP1和HNP3分別由30個氨基酸組成，兩者的區(qū)別在于N端第一個氨基酸。而HNP 2由29個氨基酸殘基組成，只在N端比HNP1和HNP3少一個氨基酸，因此HNP1-3多肽抗原性一致[5]，可通過ELISA法檢測血漿HNP 1-3濃度的總和。HNP 1-3作為一類抗菌肽，可有效地殺傷多種病原微生物，尤其是細(xì)菌[3，6－8]。Panyutich等[3]報道細(xì)菌性腦膜炎和敗血癥患者血漿HNP水平分別為120~910ng/ ml和900~170 000ng/ml，敗血癥患兒血漿HNP水平高于化膿性腦膜炎患者，但兩者血漿HNP水平又明顯高于健康對照組。Ihi等[8]研究發(fā)現(xiàn)感染性疾病患者的血漿HNP水平明顯高于健康對照組，感染者中細(xì)菌感染者血漿HNP水平明顯高于非細(xì)菌感染者。本組急性支氣管肺炎患兒急性期血漿HNP水平明顯高于恢復(fù)期水平，提示HNP參與了機(jī)體的抗感染免疫。HNP可通過與病原菌抗原結(jié)合，抑制病原菌在黏膜上皮細(xì)胞黏附增殖[9－10]，同時可增強(qiáng)病原抗原的免疫原性，促進(jìn)抗原遞呈細(xì)胞的遞呈加工而發(fā)揮抗感染作用[9-10]。本組血漿HNP1-3水平與白細(xì)胞總數(shù)和中性粒細(xì)胞計數(shù)明顯相關(guān)，提示患兒受感染時白細(xì)胞總數(shù)尤其是中性粒細(xì)胞計數(shù)增高是血漿HNP釋放增加的原因，與文獻(xiàn)報道一致[3，8]。HNP在抗病毒感染中的作用相對不確定，國內(nèi)王永杰等[11]研究發(fā)現(xiàn)HNP對冠狀病毒沒有抑制和殺滅作用，與本研究通過HNP高低判斷患者的病原種類這一結(jié)論吻合。國外Jendeberg等[12]曾研究社區(qū)獲得性肺炎患兒血清抗微生物肽水平，發(fā)現(xiàn)患者血漿HNP并未較健康對照組增加，分析原因，可能與對方研究中肺炎的病原以非細(xì)菌病原感染為主有關(guān)。

CRP增高作為急性感染的指標(biāo)已在臨床上廣泛應(yīng)用，hs-CRP作為對CRP超敏感的檢測方法，能檢測出較血液中低濃度時的CRP變化。本研究顯示血漿HNP1-3水平不僅與白細(xì)胞計數(shù)和中性粒細(xì)胞計數(shù)明顯相關(guān)，還與hs-CRP上升一致，顯示血漿HNP1-3水平可作為兒童急性支氣管肺炎病原判斷的輔助指標(biāo)，若HNP增高提示感染的存在，若明顯增高提示細(xì)菌感染。HNP有抗感染的重要免疫功能，但HNP1-3同時具有一定的細(xì)胞毒性。有研究顯示，HNP1-3釋放到細(xì)胞外可引起組織損傷，高濃度的HNPs（＞20μg/ml）對氣道上皮細(xì)胞有細(xì)胞毒性[6]，因此，過強(qiáng)的HNP釋放在殺滅病原的同時也引起自身組織細(xì)胞損傷。

值得注意的是，由于HNP 1-3主要從中性粒細(xì)胞中釋放，若標(biāo)本采集后未能及時分離血漿和白細(xì)胞，或處理不當(dāng)致白細(xì)胞破壞，均可導(dǎo)致血漿HNP水平明顯升高，因此采集的標(biāo)本經(jīng)EDTA抗凝后必須及時冰浴靜置和4℃低溫離心，以期達(dá)到減少白細(xì)胞破壞的目的。此外，本組研究對象為經(jīng)呼吸道標(biāo)本DNA檢測和雙份血清肺炎支原體抗體檢測排除肺炎支原體肺炎的患兒，支原體肺炎患兒存在免疫功能紊亂，補(bǔ)體系統(tǒng)可能被激活[1]，而HNP抑制補(bǔ)體激活的經(jīng)典途徑和凝集素途徑[13]，因此本研究預(yù)測HNP與肺炎支原體肺炎的發(fā)生可能無直接相關(guān)，故將肺炎支原體肺炎患兒排除，至于支原體肺炎是否存在HNP表達(dá)低下，有待進(jìn)一步研究。

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（本文編輯：沈昱平）

收稿日期：（2014-01-14）

基金項目：浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科技計劃項目（2012KYA155）

作者單位：310015杭州師范大學(xué)附屬醫(yī)院兒科

Serum human neutrophil peptides levels in children with bronchopneumonia

ZHU Yinyan，HUA Chunzhen，WU Guangsheng，et al.Department of Pediatrics，the Affiliated Hospital of Hangzhou Normal University，Hangzhou 310015,China

【 Abstract】ObjectiveTo investigate the serum human neutrophil peptides 1-3(HNP 1-3)levels in children with bronchopneumonia and its value for etiological diagnosis.MethodsPlasma samples were collected from 88 children with bronchopneumonia admitted between January and December 2012.Plasma HNP 1-3 levels were detected by enzyme linked immunosorbent assay(ELISA)at acute and convalescent stages of the patients.Independent sample t test was used to compare SA levels or iron levels between groups and Pearson correlation analysis was used to analyze correlation.ResultsEighty-eight children with bronchopneumonia，including 53 males(60.2%)and 35 females(39.8%)were included in the study.The mean HNP 1-3 level at the acute stage was 257.0±150.6 ng/ml,which was significant higher than that at the convalescent stage(215.6± 104.5mg/ml,t=2.12,P=0.036).Furthermore,plasma HNP1-3 levels were correlated with white blood cell(r=0.283,P＜0.001)，neutrophil(r=0.275,P=0.001)and HS-CRP(r=0.273,P=0.001).ConclusionPlasma HNP 1-3 level is significant higher at the acute stage than that in convalescent stage in children with bronchopneumonia and can be helpful in diagnosis of bacterial infection.

【Key words】BronchopneumoniahumanNeutrophil peptidesChildren