HPLC法測(cè)定清肝散結(jié)顆粒中黃芩苷、 漢黃芩苷、 野黃芩苷、 黃芩素及漢黃芩素

趙 亮， 王新霞， 呂 磊， 吳文應(yīng)， 朱臻宇， 柴逸峰， 張國(guó)慶*

（1.第二軍醫(yī)大學(xué)東方肝膽外科醫(yī)院藥材科， 上海 200438； 2.第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院， 上海 200433）

HPLC法測(cè)定清肝散結(jié)顆粒中黃芩苷、 漢黃芩苷、 野黃芩苷、 黃芩素及漢黃芩素

趙 亮1， 王新霞1， 呂 磊1， 吳文應(yīng)1， 朱臻宇2， 柴逸峰2， 張國(guó)慶1*

（1.第二軍醫(yī)大學(xué)東方肝膽外科醫(yī)院藥材科， 上海 200438； 2.第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院， 上海 200433）

目的 對(duì)清肝散結(jié)顆粒 (貓人參、 石見(jiàn)穿、 白花蛇舌草、 半枝蓮及黃芩等) 中所含的黃酮類化學(xué)成分黃芩苷、漢黃芩苷、 野黃芩苷、 黃芩素及漢黃芩素同時(shí)進(jìn)行測(cè)定， 建立制劑質(zhì)量控制方法。 方法 采用高效液相色譜法， Waters Xterra Rp-C18色譜柱 (3.0mm×100mm， 3.5 μm) ， 流動(dòng)相為乙腈 (A) 與 0.1%甲酸水溶液 (B) ， 梯度洗脫， 體積流量 0.4mL/min， 柱溫 20 ℃， 紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為 275 nm， 進(jìn)樣量 5 μL， 運(yùn)行時(shí)間 60min。 結(jié)果 5 個(gè)待測(cè)化合物與周圍干擾峰達(dá)到基線分離， 線性范圍分別為黃芩苷 4.604 ～460.4 μg/mL(r=0.999 9)； 漢黃芩苷 0.770 4 ～77.04 μg/m L(r=0.999 6)； 野黃芩苷 0.415 7 ～41.57 μg/mL(r=0.999 8)； 黃芩素 0.845 6 ～84.56 μg/mL(r=0.999 9)；漢黃芩素 0.799 2 ～79.92 μg/mL(r=0.999 7)， 日內(nèi)/日間精密度均小于 3%(n=3)， 平均回收率在 97% ～102%之間 (n=6)。 清肝散結(jié)顆粒中黃芩苷、 漢黃芩苷、 野黃芩苷、 黃芩素及漢黃芩素的含有量分別為 3.798、 0.829 9、0.180 5、 0.158 9、 0.0726 mg/g。 結(jié)論 該法簡(jiǎn)便、 快捷、 結(jié)果準(zhǔn)確、 重復(fù)性好、 實(shí)用性強(qiáng)， 可用于清肝散結(jié)顆粒中的質(zhì)量控制。

清肝散結(jié)顆粒；黃芩苷；漢黃芩苷；野黃芩苷；黃芩素；漢黃芩素；高效液相色譜法

中藥復(fù)方制劑清肝散結(jié)顆粒是東方肝膽外科醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合治療科經(jīng)長(zhǎng)期臨床實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)總結(jié)得出的抗肝癌基本方，由貓人參、石見(jiàn)穿、白花蛇舌草、半枝蓮及黃芩等十四味中藥組成，具有清熱解毒，健脾理氣，化瘀軟堅(jiān)的作用。大量的臨床觀察表明，清肝散結(jié)方不僅有良好的改善患者肝功能、減輕患者癥狀的作用，還有良好的抑制肝癌生長(zhǎng)，抗腫瘤轉(zhuǎn)移與復(fù)發(fā)，提高患者預(yù)期生存率的作用［1］。 已有的研究結(jié)果表明清肝散結(jié)顆粒中君藥貓人參、石見(jiàn)穿、白花蛇舌草含有三萜酸類成分［2］，而半枝蓮及佐藥黃芩中含有大量的黃酮類成分，主要功效為清熱、解毒、散瘀、止血及利尿等， 民間主治肝炎疾病和 某些腫 瘤［3-4］； 黃 芩為唇形科植物黃芩的干燥根，具有清熱燥濕、瀉火解毒之功效［5-6］， 二者所含黃酮類成 分包括 黃芩苷、漢黃芩苷、野黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素等。文獻(xiàn)報(bào)道黃芩苷和漢黃芩苷等黃酮類成分具有抗腫瘤、抗菌、免疫調(diào)節(jié)功能、保護(hù)心血管系統(tǒng)及保肝等作用［7-12］。目前， 對(duì) 黃芩 苷、 漢 黃 芩 苷、 野 黃 芩 苷、黃芩素和漢黃芩素的質(zhì)量控制方法主要為高效液相色譜紫外檢測(cè)法、近紅外漫反射光譜法及液質(zhì)聯(lián)用法等［13-17］。 為了更有效 控制清 肝散結(jié)顆粒的質(zhì)量，本研究采用高效液相色譜紫外檢測(cè)法對(duì)該制劑中的黃芩苷、漢黃芩苷、野黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素同時(shí)進(jìn)行定量測(cè)定。

1 儀器與試藥

Agilent1100 系列高效液相色譜儀 ( 美國(guó)， 安捷倫科技有限公司)， 包括 G1379A真空脫氣機(jī)、G1311A四元泵、 G1367A自動(dòng)進(jìn)樣器、 G1316A柱溫箱和 G1315A VWD檢測(cè)器； AE240 型十萬(wàn)分之一電 子 天 平 ( 瑞 士， 梅 特 勒-托 利 多 集 團(tuán))；SB3200-超聲波清洗器 (美國(guó)， 必能信超聲有限公司)； PW-超純水系統(tǒng) (香港， 力康生物醫(yī)療控股有限公司)

清肝散結(jié)顆粒委托上海市蔡同德藥廠提取制備， 15g/包； 對(duì)照品黃芩苷、 漢黃芩苷、野黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素均購(gòu)自上海斯丹德生物技術(shù)有限公司 (純度 ＞98.0%)。 乙醇為分析純； 乙腈、甲醇為色譜純 (美國(guó)， 霍尼韋爾國(guó)際有限公司)， 甲酸為色譜純 (美國(guó)，希格瑪科技有限公司)，水為超純水。

2 方法和結(jié)果

2.1 色 譜 條 件 色 譜 柱 為 Waters Xterra Rp-C18(3.0 mm×100 mm，3.5 μm)，流動(dòng)相 A相為乙腈溶液， B相為 0.1%甲酸水， 梯度洗脫 (0 ～10 min， 10% ～20%A； 10 ～30 min， 20% ～25%A；30 ～60 min，25% ～45%A)， 體 積 流 量 0.4 mL/min，柱溫 20 ℃， 紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為 275 nm， 進(jìn)樣量 5 μL， 運(yùn)行時(shí)間為 60 min。

2.2 供試品溶液的制備 取 1 g清肝散結(jié)顆粒樣品， 精密稱定， 置 50 mL錐形瓶中， 加入 70%乙醇 20 mL， 超聲提取 30 min， 過(guò)濾， 收集濾液；濾渣再加入 70%乙醇 20 mL， 超聲 30 min， 過(guò)濾， 合并兩次濾液， 定容至50 mL， 取上清液過(guò) 0.45 μm有機(jī)濾膜，取續(xù)濾液即得。

2.3 對(duì)照品貯備液的配制 精密稱取黃芩苷對(duì)照品 23.02 mg置 10 m L量瓶中， 加入 70%乙醇超聲使溶解， 定容至刻度， 得黃芩苷質(zhì)量濃度為 2.302 mg/mL的對(duì)照品貯備液； 精密稱取漢黃芩苷對(duì)照品 9.63 mg及野黃芩苷對(duì)照品 8.66 mg， 分別置25 mL量瓶中， 加入 70%乙醇超聲使溶解， 定容至刻度， 即得漢黃芩苷 0.385 2 mg/mL、 野黃芩苷0.346 4 mg/mL的對(duì)照品貯備液； 精密稱取黃芩素對(duì)照品 10.57 mg及漢黃芩素對(duì)照品9.99mg， 分別置 5 mL量瓶中， 加入 70%乙醇超聲使溶解， 定容至刻度， 即 得 黃 芩 素 2.114 mg/mL、 漢 黃 芩 素1.998 mg/mL的對(duì)照品貯備液。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取黃芩苷、 漢黃芩苷、野黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素單個(gè)對(duì)照品溶液各 5、 5、3、1、 1 mL，置于 25 mL量瓶， 用70%乙醇定容， 得含黃芩苷 460.4 μg/mL、 漢黃芩苷 77.04 μg/mL、 野黃芩苷 41.57 μg/mL、 黃芩素84.56 μg/mL及漢黃芩素 79.92 μg/m L的混合對(duì)照品溶液。

按逐級(jí)稀釋法，精密量取上述對(duì)照品混合溶液適量， 置于 10 mL量瓶， 加 70%乙醇定容至刻度，配制系列標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液。黃芩苷質(zhì)量濃度分別為460.4、 230.2、 46.04、 23.02、 4.604 μg/mL； 漢黃芩 苷 質(zhì) 量 濃 度 分 別 為 77.04、38.52、 7.704、3.852、 0.7704 μg/mL； 野黃芩苷質(zhì)量濃度分別為41.57、 20.78、 4.157、 2.078、 0.4157 μg/mL； 黃芩 素 質(zhì) 量 濃 度 分 別 為 84.56、 42.28、8.456、4.228、 0.8456 μg/mL； 漢黃芩素質(zhì)量濃度分別為79.92、 39.96、 7.992、 3.996、 0.7992 μg/mL。

取混合對(duì)照品系列溶液， 按 “2.1” 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析， 以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo) (x)，液相色譜峰面積為縱坐標(biāo) (y) 進(jìn)行線性回歸， 得回歸方程， 黃芩苷 y=46.632x+141.92， r=0.999 9，線性范 圍 4.604 ～460.4 μg/mL； 漢黃芩苷 y= 45.405x+28.056， r=0.999 6， 線 性 范 圍0.770 4 ～77.04 μg/mL； 野黃芩苷 y=29.292x+ 2.446 4， r=0.999 8， 線性范圍 0.415 7 ～41.57 μg/mL； 黃芩素 y=69.361x+14.078， r=0.999 9，線性范圍 0.845 6 ～84.56 μg/mL； 漢黃芩素 y= 80.074x+47.6，r=0.999 7， 線性范圍 0.799 2 ～79.92 μg/m L。

2.4.2 系統(tǒng)適應(yīng)性 取混合對(duì)照品溶液， 按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣， 黃芩苷、漢黃芩苷、野黃芩苷、黃芩素及漢黃芩素的色譜峰與其左右的干擾峰分離度均大于 1.5， 野黃芩苷、 黃芩苷、 漢黃芩苷、黃芩素及漢黃芩素的色譜峰的保留時(shí)間分別為 17.0、22.0、 30.8、 41.3 和 52.2 min， 理論塔板數(shù)均大于 8 000， 見(jiàn)圖 1C。

2.4.3 專屬性試驗(yàn) 稱取 1/3 處方量的原藥材(不含黃芩、 半枝蓮)， 粉碎， 稱取 5 g， 至 250 mL錐形瓶中， 加入 70%乙 醇 100 mL， 超聲 30 min，過(guò)濾， 收集濾液， 濾渣加入 100 mL70%乙醇， 超聲 30 min， 過(guò)濾， 收集濾液， 合并 2 次濾液， 取濾液過(guò) 0.45 μm有機(jī)濾膜， 按 “2.1” 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，所得色譜見(jiàn)圖 1B。 5 個(gè)待測(cè)化合物保留時(shí)間處未出現(xiàn)干擾色譜峰，說(shuō)明5種化學(xué)成分集中于組方中的黃芩和半枝蓮藥材，故以黃酮類成分的量為指標(biāo)可以很好地控制該制劑質(zhì)量。

圖1 清肝散結(jié)顆粒高效液相色譜圖Fig.1 HPLC chromatogram s of Q inggan Sanjie Granules

2.4.4 精密度試驗(yàn) 取低、 中、 高 3 個(gè)質(zhì)量濃度點(diǎn)混合對(duì)照品溶液， 按 “2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，在1 d內(nèi)分別進(jìn)樣3次，以及連續(xù)3 d分別進(jìn)樣1次，考察日內(nèi)精密度和日間精密度，5個(gè)成分的日內(nèi)精密度、 日間精密度均小于3%， 表明精密度良好。

2.4.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取 6 份清肝散結(jié)顆粒樣品約1 g， 精密稱定， 按 “2.2” 項(xiàng)下制備供試品溶液，按 “2.1” 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析， 計(jì)算。 結(jié)果黃芩苷、漢黃芩苷、野黃芩苷、黃芩素及漢黃芩素5種成分的 RSD分別為 1.57%、0.98%、2.06%、2.84%及 1.93%， 均小于 3%， 表明方法重復(fù)性良好。

2.4.6 準(zhǔn)確度試驗(yàn) 取 6 份清肝散結(jié)顆粒樣品0.5 g，精密稱定， 置 50 mL錐形瓶中，再分別加入 含 黃 芩 苷 460.4 μg/mL、 漢 黃 芩 苷 77.04 μg/m L、 野黃 芩苷 41.57 μg/m L、 黃芩 素 84.56 μg/mL及漢黃芩素 79.92 μg/mL的對(duì)照品混合溶液 2.5 mL， 按 “2.2” 項(xiàng)下制備供試品溶液， 按“2.1” 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析； 結(jié)果黃芩苷、 漢黃芩苷、野黃芩苷、黃芩素及漢黃芩素的加樣回收率分別為 98.3%， 101.8%、 100.2%， 97.4%及 98.9%， RSD分別為 1.88%、2.39、 3.31%、1.27%及 3.51%； 5 種成分的加樣回收率在 97%～102%之間， 符合準(zhǔn)確度要求。

2.4.7 檢測(cè)限及定量限 將黃芩苷、 漢黃芩苷、野黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素對(duì)照品溶液分別進(jìn)行稀釋， 以信噪比為 3 ∶1確定其最低檢測(cè)限， 黃芩苷、漢黃芩苷、野黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素的最低檢 測(cè) 限 分 別 為 0.037、 0.031、 0.083、 0.034、0.016 μg/m L； 以信噪比為 10 ∶1確定其最低定量限，黃芩苷、漢黃芩苷、野黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素 的 最 低 定 量 限 分 別 為 0.090 4、 0.154 1、0.166 3、 0.169 1、 0.079 9 μg/mL。

2.4.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取清肝散結(jié)顆粒樣品 1 g， 精密稱定， 置 50 mL錐形瓶中， 按 “2.2” 項(xiàng)下制備供試品溶液， 分別于 0、 3、 6、 9、 12， 24 h， 按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析， 黃芩苷、 漢黃芩苷、 野黃芩苷、 黃芩素及漢黃芩素的 RSD分別為0.10%、 0.32%、0.52%、0.51%及 0.91%，5 種成分的 RSD均小于 1%， 表明樣品在 24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5 樣品測(cè)定 取 3 份清肝散結(jié)顆粒樣品 1 g， 精密稱定， 置 50 mL錐形瓶中， 按 “2.2” 項(xiàng)下制備供試品溶液， 按 “2.1” 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析。結(jié)果黃芩苷、漢黃芩苷、野黃芩苷、黃芩素及漢黃芩素 的 平 均 質(zhì) 量 分 數(shù) 分 別 為 3.798、 0.829 9、0.180 5、 0.158 9、 0.072 6 mg/g。。

3 討論

3.1 色譜條件

3.1.1 波長(zhǎng)的選擇 采用 DAD在 190 ～400 nm全波長(zhǎng)掃描，結(jié)果發(fā)現(xiàn)黃芩苷、漢黃芩苷、野黃芩苷、 黃芩素及漢黃芩素均在 275 nm處有吸收， 且共同吸收最大，同時(shí)可排除雜質(zhì)對(duì)待測(cè)物的干擾，故選擇275 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.1.2 色譜柱的考察 清肝散結(jié)顆粒中成分復(fù)雜，且待測(cè)物較多，需要對(duì)所有待測(cè)化合物及干擾峰進(jìn)行完全分離。考察了色譜柱的不同填料顆粒類型(Agilent SB-C18、 XDB-C18、Waters Xterra Rp-C18、Chromasil-C18及 CAPCELL PAK C18)， 不 同 內(nèi) 徑(4.6 mm及 3.0 mm)、 不同填料粒徑 (5 μm及2.7 μm) 及不同色譜柱長(zhǎng) (250 mm、 150 mm及100 mm) 對(duì) 5 個(gè)待測(cè)物分離結(jié)果的影響，發(fā)現(xiàn)黃芩苷及漢黃芩苷很容易在各種色譜上與干擾峰得到很好的分離，但野黃芩苷、黃芩素及漢黃芩素與其周圍的干 擾 峰 較難分離， 最后 采 用 Waters Xterra Rp-C18(3.0 mm×100 mm， 3.5 μm) 色譜柱，通過(guò)調(diào)節(jié)流動(dòng)相梯度洗脫程序及溫度的改變，使各待測(cè)物與周圍的色譜峰實(shí)現(xiàn)了基線分離。

3.1.3 流動(dòng)相的考察 對(duì)流動(dòng)相的組成及不同比例進(jìn)行了考察， 采用不同比例的甲醇-水系統(tǒng)、 乙腈-水系統(tǒng)、 甲醇-甲酸水系統(tǒng) 以及乙腈-甲 酸水系統(tǒng)，發(fā)現(xiàn)在流動(dòng)相中加入一定比例的酸有助于提高待測(cè)物與干擾峰的分離度，經(jīng)過(guò)對(duì)酸的種類、濃度的考察，得出最佳流動(dòng)相為乙腈-0.1%甲酸水溶液，并對(duì)梯度洗脫條件進(jìn)行了優(yōu)化，使得待測(cè)物能夠與干擾峰達(dá)到基線分離。

3.2 樣品提取方法 清肝散結(jié)顆粒采用超聲提取方法，考察提取溶劑種類、超聲時(shí)間、溶劑體積及提取次數(shù)及對(duì)顆粒中黃芩苷、漢黃芩苷、野黃芩苷、黃芩素及漢黃芩素提取結(jié)果的影響，設(shè)計(jì)四因素三水平正交試驗(yàn)來(lái)進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果影響樣品中含有量最高的兩個(gè)成分黃芩苷及漢黃芩苷提取量的因素主次順序?yàn)槿軇┓N類＞提取次數(shù)＞溶劑體積＞提取時(shí)間，而對(duì)于黃芩素及漢黃芩素，增加溶劑量及提取時(shí)間有利于提高提取率， 采用30倍量溶劑提取所得的結(jié)果與 20 倍量基本一致， 而超聲 45 min比超聲 30 min 提取量有所下降，綜合考慮， 最終確定提取方法為 20 倍量 70%乙醇超聲提取 2 次，每次 30 min。

本研究建立了高效液相色譜同時(shí)測(cè)定清肝散結(jié)顆粒中黃芩苷、漢黃芩苷、野黃芩苷、黃芩素及漢黃芩素的方法。通過(guò)對(duì)不同類型色譜柱及流動(dòng)相梯度洗脫條件的摸索，確定最優(yōu)色譜條件，并對(duì)方法學(xué)進(jìn)行了全面考察；通過(guò)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，考察提取溶劑種類、超聲時(shí)間、溶劑體積及提取次數(shù)對(duì)清肝散結(jié)顆粒中5個(gè)黃酮類成分提取結(jié)果的影響，優(yōu)化得到樣品前處理?xiàng)l件。該方法前處理?xiàng)l件簡(jiǎn)便、快速，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠、重復(fù)性好，實(shí)用性強(qiáng)，可用于清肝散結(jié)顆粒中5個(gè)黃酮類成分的定量測(cè)定，進(jìn)行制劑質(zhì)量控制。

［ 1 ］ 陳挺松， 錢(qián) 藝， 吳孝雄， 等.PEIT聯(lián)合清肝抗癌方治療原發(fā) 性 肝 癌 52 例 ［ J］.中 醫(yī) 雜 志， 2012， 53(13): 1144-1145.

［2］ 趙 亮，王新霞，黎越丹，等.高效液相色譜法測(cè)定清肝散結(jié)顆粒中熊果酸及齊墩果酸的含量［J］.第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)， 2012， 33(11):1263-1266.

［ 3 ］ 朱平根， 張祖良.中藥半枝蓮化學(xué)成分研究進(jìn)展［J］.國(guó)際中醫(yī)中藥雜志， 2012， 34(5):462-464.

［4］ 鄒箴蕾， 吳啟南.半枝蓮的化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥， 2005， 16(2):149-150.

［ 5 ］ 厙士芳.黃芩屬植物的藥用價(jià)值研究［J］.中醫(yī)藥信息，2012， 29(3):139-142.

［ 6 ］ 王晶華， 吳兆華.黃芩抗腫瘤作用的研究進(jìn)展［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)， 2009， 28(12):1568-1570.

［7］ 陳 忻，趙 暉，張 楠，等.黃芩苷對(duì)小鼠免疫性肝損傷的保護(hù)作用［J］.中藥藥理與臨床， 2006， 22(34): 39-40.

［8］ 洪 鐵，楊 振，繩 娟，等.黃芩苷抗腫瘤作用及機(jī)制的研究［ J］ .中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)， 2008， 24(12):1676-1678.

［ 9 ］ 孟 璐， 張學(xué)武， 李正祿.黃芩苷誘導(dǎo)人肝癌 HepG2 細(xì)胞凋亡及對(duì)相關(guān)蛋白表達(dá)的影響［ J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥， 2010，21(9):2212-2213.

［10 ］ Lu N H， Zhang Y， Gao Z G.Nitrite glucose-glucose oxidase systerm directly induces rat heart homogenate oxidation and tyrosine nitration:Effects of some flavonoids［ J］ .Toxicol In Vitro，2009， 23(4):627-633.

［11］ 楊連梅， 胡 榮， 卜 平.半枝蓮提取物及黃酮成分抗腫瘤藥理研究進(jìn)展［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊， 2010， 28(4): 751-753.

［12］ 宋寄春， 譚詩(shī)云， 陳明鍇.半枝蓮對(duì)人大腸癌細(xì)胞增殖抑制及誘導(dǎo)凋亡的作用［J］.咸寧學(xué)院學(xué)報(bào)， 2007， 21(2): 106-108.

［13］ 李春紅， 何 兵， 張金平， 等.HPLC法同時(shí)測(cè)定梔子金花丸中黃芩苷、 漢黃芩苷、 黃芩素和漢黃芩素［J］.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)， 2012， 39(17):4509-4510.

［14］ 紀(jì)松崗， 劉曉帆， 朱臻宇， 等.高效液相色譜法測(cè)定小柴胡湯中黃芩苷、 漢黃芩苷的含量［J］.第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2010， 31(9):1010-1013.

［15］ 張啟云， 徐良輝， 李冰濤， 等.HPLC法同時(shí)測(cè)定葛根芩連湯中 8 種有效成分的含量［J］.藥物分析雜志， 2011， 31 (7):1425-1429.

［16］ 潘建超， 薛東升， 劉紹勇.近紅外漫反射光譜法快速測(cè)定黃芩藥材中黃芩苷和漢黃芩苷含量［J］.中國(guó)醫(yī)藥指南，2011， 9(34):54-56.

Determ ination of baicalin， wogonoside， scutellarin， baicalein and wogonin in Qinggan Sanjie Granules by HPLC

ZHAO Liang1， WANG Xin-xia1， LüLei1， WU Wen-ying1， ZHU Zhen-yu2， CHAI Yi-feng2，ZHANG Guo-qing1*
(1.Department of Pharmacy， Eastern Hepatobiliary Surgery Hospital， Second Military Medical University， Shanghai200438， China； 2.School of Pharmacy， Second Military Medical University， Shanghai 200433， China)

AIM To establish amethod for determining the contents of baicalin， wogonoside， scutellarin， baicalein and wogonin in Qinggan Sanjie Granules.M ETHODS HPLC-DAD was used in the analysis， the column wasWaters Xterra Rp-C18(3.0 mm×100mm， 3.5 μm) ；mobile phase was acetonitril(A)and 0.1%(V/V) formic acid in water(B)，with gradient elution.The flow rate was 0.4 mL/min， the column temperature was 20 ℃， the detection wavelength was set at275 nm， the injection volume was 5 μL， the running time was60 min. RESULTS The five compounds and the unknowns were separated with baseline， the linear range was 4.604-460.4 μg/mL(r=0.999 9)for baicalin； 0.770 4-77.04 μg/mL(r=0.999 6)for wogonoside， 0.415 7-41.57 μg/mL(r=0.999 8)for scutellarin， 0.845 6-84.56 μg/mL(r=0.999 9)for baicalein， 0.799 2-79.92 μg/m L(r=0.999 7)for wogonin， respectively.The results of intra-day and inter-day precisions were both within 3%(n=3) ， and the average recovery was 97%-102%(n=6) ， the content of baicalin， wogonoside， scutellarin， baicalein and wogonin in Qinggan Sanjie Granules were 3.798， 0.829 9，0.180 5， 0.158 9，and 0.072 6 mg/g(n=3)， respectively.CONCLUSION Themethod is rapid， convenient， accurate， robust and suitable for quality control of Qingan Sanjie Granules.

Qingan Sanjie Granules； baicalin； wogonoside； scutellarin； baicalein； wogonin； HPLC

R927.2

:A

:1001-1528(2014)02-0313-06

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.02.021

2013-04-15

趙 亮 (1980—) ， 男， 主管藥師。 Tel:(021)81875584， E-mail:zhaoliangphar@163.com

*通信作者: 張國(guó)慶 Tel:(021)81875571， E-mail:guoqing-zhang91@126.com