橘皮提取物的抗氧化能力與有效成分分析

天津醫(yī)科大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院（200032）田勤娟

我國(guó)盛產(chǎn)柑橘，每年的產(chǎn)量超過了107t，而橘皮至少占了整個(gè)柑橘重量的1/5，橘皮除了大家熟知的維C和精油外，還具有大量的黃酮類[1]。對(duì)橘皮的研究，國(guó)內(nèi)外都取得了較大的成就，最近有研究表明，橘皮中的成分能夠開發(fā)出抑菌與抗氧化的成分[2]。鑒于此，以下就主要分析5種橘皮測(cè)定物對(duì)DPPH于亞硝酸鹽的清除能力，并分析主要影響成分。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑和原料 柑橘原料來自天津市綜合水果市場(chǎng)，將橘皮剝下在45℃干燥環(huán)境下烘干，再粉碎成橘皮粉末，將粉末保存在4℃環(huán)境中；檸檬苦素標(biāo)準(zhǔn)品來源于南京景竹生物科技有限公司，DPPH來源于北京中生瑞泰科技有限公司，其他的試劑，均來源于中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所。

1.1.2 儀器和設(shè)備 料理機(jī)：瑟諾電器有限公司，真空干燥箱：北京恒泰豐科試驗(yàn)設(shè)備有限公司，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：成都康宇儀器科技有限公司，紫外可見光光度計(jì)：深圳歐克儀表科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 溶劑橘皮提取物的制備 先準(zhǔn)備好500ml的正丁醇、去離子水、氯仿、乙酸乙酯、石油醚溶劑，在溶劑中加入50g的橘皮粉，都提取6h，再離心并收集上清液，反復(fù)3次，將收集到的上清液用選擇蒸發(fā)儀濃縮，將濃縮的樣品烘干，得到5種不同成分的提取物，保存在4℃的環(huán)境中。

1.2.2 DPPH清除能力測(cè)定 稱取12mgDPPH試樣，將其溶于250mL裝有DPPHH容量瓶,使得瓶中濃度為0.12mmol/L,并遮光保存。對(duì)于不同的溶劑提取物進(jìn)行濃度配比，分別配為：0.8、0.4、0.2、0.1、0.05mg/mL等試樣濃度。另取待測(cè)樣品加入到2mL配置好的DPPH溶液，將其均勻混合之后避光放置30min，研究517nm處測(cè)其吸光度。

1.2.3 亞硝酸清除能力測(cè)定 采用鹽酸萘乙二胺法進(jìn)行測(cè)定，向有色管中加入2mL，25ug/L的硝酸鈉液以及3mL的樣品液，樣品液按照上述標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行配比，將其置于80℃水浴10min，然后加入到氨基苯磺酸中混合均勻，靜置15min之后，研究538nm波長(zhǎng)處測(cè)其吸光度。

1.2.4 有效成分含量測(cè)定法 對(duì)于有效成分的含量測(cè)定主要是對(duì)酚、黃酮、單寧、檸檬苦素等進(jìn)行測(cè)定。對(duì)于酚進(jìn)行測(cè)定，稱取0.005g沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)樣品，將其溶解之后，加入福林酚劑，并搖勻，研究760nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。黃酮測(cè)定時(shí)，則稱取20mg蘆丁，按照上述溶液濃度標(biāo)配進(jìn)行配液，混合勻質(zhì)之后靜止5～6min，隨后研究510nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。但是單寧仍然采用510nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度，而檸檬苦素則研究500nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。

2 結(jié)果

結(jié)果表明，不同溶劑的橘皮提取物都對(duì)DPPH與亞硝酸鹽有清除能力，只是清除能力的強(qiáng)弱有一定的差別，其中的乙酸乙酯的清除能力表現(xiàn)的最強(qiáng)。這5種不同溶劑的提取物中黃酮、檸檬苦素、總酚的含量具有明顯的差異，石油醚與氯仿提取的橘皮提取物中的單寧含量差異不大，乙酸乙酯、正丁醇、去離子水3者的單寧含量差異較大。

乙酸乙酯提取物的四種成分均遠(yuǎn)高于其他的溶劑提取物的成分含量，測(cè)定結(jié)果顯示黃酮的含量最高，可以達(dá)到40.40mg/g，不同的容積橘皮提取物中黃酮的含量均為最高。檸檬苦素的含量在5種溶劑中橘皮的提取物中具有顯著性差異，黃酮、總酚的含量也如此，氯仿的提取物中油醚的含量與單寧的含量也存在著顯著性差異，較之其他單寧含量更顯著。

3 結(jié)論

據(jù)研究結(jié)果表明，五種溶劑的提取物中黃酮含量最大，對(duì)于黃酮的提取又與DPPH呈正比例關(guān)系，因此在推測(cè)橘皮的主要抗氧分能力與黃酮的含量具有直接的關(guān)系。而且清除亞硝酸鹽的主要存在活性成分是黃酮、酚、檸檬苦素等。