宮頸癌存活蛋白的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系

成 杰,程 慧，張 蓓※,馮 強

(徐州市中心醫(yī)院 1婦產(chǎn)科， 2病理科，江蘇 徐州 221009)

宮頸癌是婦科最常見的惡性腫瘤之一，早期患者預(yù)后較好，但晚期宮頸癌預(yù)后較差。目前研究認(rèn)為，宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展與凋亡相關(guān)基因關(guān)系密切[1-2]。近年來研究發(fā)現(xiàn)凋亡抑制因子存活蛋白在多種人類惡性腫瘤中高表達(dá)，并能強烈抑制細(xì)胞凋亡[1]。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)S-P法檢測存活蛋白在宮頸癌組織及癌旁組織的表達(dá)，探討宮頸癌組織中存活蛋白的表達(dá)及其與患者預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集20007年1月至2009年12月徐州市中心醫(yī)院收治的70例手術(shù)切除的臨床病理資料保存完整的宮頸癌石蠟切塊，癌旁組織取自距癌組織0.5～1.0 cm。70例宮頸癌患者年齡為29～74(48.6±13.2)歲；其中年齡≥50歲38例，年齡<50歲32例；鱗狀細(xì)胞癌47例，腺細(xì)胞癌23例；病理分級：G1～G2級39例，G3級31例；病理組織學(xué)分級：高分化26例，中低分化44例；根據(jù)2003年再次修訂后的國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟提出的分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床分期[2]：Ⅰ期35例，Ⅱ期9例，Ⅲ～Ⅳ期26例；腫瘤直徑≥4 cm 41例，<4 cm 29例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：有43例，無27例。納入資料重新切片并由病理醫(yī)師再次確診，所有病例術(shù)前未行放化療。另取20例正常宮頸組織作為對照組，年齡為27～72(47.3±14.1)歲。

1.2免疫組織化學(xué) 實驗用兔抗人存活蛋白單克隆抗體購自福建邁新生物工程公司，存活蛋白的表達(dá)采用免疫組織化學(xué)S-P法，S-P免疫組織化學(xué)試劑盒購自北京中杉橋生物公司，實驗步驟按試劑盒說明書進(jìn)行。磷酸鹽緩沖溶液代替一抗作為陰性對照，已知抗體陽性標(biāo)本為陽性對照。

1.4結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 存活蛋白陽性染色信號呈棕色細(xì)小顆粒，均位于細(xì)胞質(zhì)。隨機(jī)抽取10個高倍視野，結(jié)果判斷采用半定量方法。按著色強度劃分：細(xì)胞無著色，0分；細(xì)胞著色為淺黃色，1分；細(xì)胞著色為棕黃色，2分；細(xì)胞著色為棕褐色，3分。陽性細(xì)胞百分率：陰性，0分；陽性細(xì)胞<10%，1分；陽性細(xì)胞11%～50%，2分；陽性細(xì)胞51%～75%，3分；陽性細(xì)胞>75%，4分。兩者積分相乘分為四個等級：0～2分為-； 3～5分為+； 6～8分為++； 9～12分為+++。3分及以上為陽性[3]。

2 結(jié) 果

2.1存活蛋白在宮頸癌、癌旁及正常組織中的表達(dá) 存活蛋白陽性染色定位在腫瘤細(xì)胞質(zhì)中，呈棕色細(xì)小顆粒，也可以呈彌漫胞質(zhì)分布(圖1)。在宮頸癌組織中存活蛋白陽性表達(dá)率高于正常組織(χ2=15.82，P<0.05)；癌旁組織中存活蛋白陽性表達(dá)率高于正常組(χ2=7.11，P<0.05)，低于宮頸癌組(χ2=5.37，P<0.05)(表1)。

表1 存活蛋白在宮頸癌、癌旁及正常組織中的表達(dá)

圖1 存活蛋白在宮頸癌組織及癌旁組織中的表達(dá)(×400) 圖A:存活蛋白在宮頸癌組織中呈強陽性表達(dá)，腫瘤細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見棕黃色顆粒；圖B:存活蛋白在癌旁組織中呈弱陽性表達(dá)，腫瘤細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見棕黃色顆粒

2.2存活蛋白的表達(dá)及與宮頸癌臨床病理因素的關(guān)系 70例宮頸癌組織中，存活蛋白陽性率與患者年齡、腫瘤大小、病理類型、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移無關(guān)(P>0.05)，與腫瘤組織學(xué)分級、病理分期及病理分級有關(guān)(P<0.05)(表2)。

表2 存活蛋白與宮頸癌臨床病理因素間的關(guān)系

2.3存活蛋白與宮頸癌患者生存率的關(guān)系 以病理確診為宮頸癌時為觀察起點(以月計算)，70例患者隨訪至2012年5月。經(jīng)生存分析發(fā)現(xiàn)，存活蛋白陰性組患者生存率高于存活蛋白陽性組(χ2=26.275，P<0.05)(圖2)。

圖2 存活蛋白陽性與陰性宮頸癌患者生存曲線

3 討 論

宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤之一，居女性惡性腫瘤的第二位，僅次于乳腺癌。宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展是一個多種因素參與的復(fù)雜病理過程。流行病學(xué)研究顯示，細(xì)胞癌基因的激活、抑癌基因的失活和細(xì)胞凋亡的抑制均參與了宮頸癌前病變和宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展[3]。近年來，研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡受抑制是正常細(xì)胞演變成惡性細(xì)胞的關(guān)鍵過程，參與細(xì)胞凋亡的基因較多，其中凋亡蛋白抑制因子家族是一類抑制凋亡的因子[4]。

存活蛋白是近年來新發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制因子，它不僅抑制細(xì)胞的凋亡還參與對細(xì)胞分裂的調(diào)控，促進(jìn)了細(xì)胞的異常增殖和惡性轉(zhuǎn)化[5]。存活蛋白特異性表達(dá)于胚胎發(fā)育組織及分化未成熟組織，并在許多惡性腫瘤組織中高表達(dá)，而正常成人組織不表達(dá)(胸腺、胎盤、子宮內(nèi)膜除外)[1-2]。本研究結(jié)果顯示，正常宮頸組織中存活蛋白表達(dá)率較低，宮頸癌和癌旁組織中存活蛋白明顯升高，癌組織較癌旁組織更高，與國內(nèi)外研究結(jié)果一致[4,6]，提示存活蛋白的存在代表著細(xì)胞生物學(xué)轉(zhuǎn)化的中間環(huán)節(jié)，其水平變化在正常宮頸組織向?qū)m頸癌轉(zhuǎn)化中起重要作用[6]。同時本研究結(jié)果表明，宮頸癌存活蛋白陽性的46例中，中低分化34例，高分化12例，可見腫瘤惡性程度越高，存活蛋白陽性率越高。Kim等[3]研究發(fā)現(xiàn)，存活蛋白表達(dá)與宮頸癌的病理演進(jìn)有關(guān)，從輕度非典型增生到癌的演進(jìn)中存活蛋白表達(dá)逐漸升高。有研究表明，存活蛋白在宮頸組織中的表達(dá)隨宮頸分化程度的降低而升高[4]。本研究結(jié)果顯示，存活蛋白在宮頸癌中的表達(dá)情況與患者的年齡、腫瘤大小、病理類型、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移均無相關(guān)性。但隨著組織學(xué)分級和病理分期、分級的增加，存活蛋白過表達(dá)也隨之升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，說明存活蛋白基因表達(dá)程度與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和惡性程度相關(guān)，存活蛋白的高表達(dá)預(yù)示著腫瘤具有較高的局部浸潤活性和轉(zhuǎn)移潛能，預(yù)后更差，在一定程度上反映了宮頸癌的惡性程度[5]。以上特點使存活蛋白有可能作為宮頸癌診斷及判定預(yù)后的重要指標(biāo)之一，也為腫瘤治療提供了新的靶點。

有文獻(xiàn)報道，存活蛋白與多種惡性腫瘤預(yù)后相關(guān)。惡性腫瘤的表達(dá)率顯著地高于良性病變，且與腫瘤細(xì)胞的增殖活性間具有正相關(guān)性，過度表達(dá)者生存期短[7-10]。Bache等[6]觀察44例經(jīng)放射治療后的宮頸癌患者存活蛋白表達(dá)情況時發(fā)現(xiàn)，晚期宮頸癌放療患者中存活蛋白表達(dá)水平與患者的5年生存率明顯相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，存活蛋白陽性患者生存率低于陰性組，提示存活蛋白陽性意味著疾病復(fù)發(fā)的危險性較高，生存時間縮短，預(yù)后不良，對指導(dǎo)治療有一定作用。

綜上所述，存活蛋白在宮頸癌中的異常表達(dá)與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，有望成為早期診斷及預(yù)測宮頸癌預(yù)后的一個重要指標(biāo)。

[1] Siripong P,Hahnvajanawong C,Yahuafai J,etal.Induction of apoptosis by rhinacanthone isolated from Rhinacanthus nasutus roots in human cervical carcinoma cells[J].Biol Pharm Bull,2009,32(7):1251-1260.

[2] Temme A,Rieger M,Reber F,etal.Localization,dynamics,and function of survivin revealed by expression of functional survivin DsRed fusion proteins in the living cell[J].Mol Biol Cell，2003,14(1):78-92.

[3] Kim HS,Shiraki K,Park SH.Expression of survivin in CIN and invasive squamous cell carcinoma of uterine cervix[J].Anticancer Res,2002,22(2A):805-808.

[4] 慧燕,黃利鳴,葉紅.Survivin在人宮頸癌前病變和宮頸浸潤癌組織中的定量分析及其臨床價值的評估[J].腫瘤防治研究,2008,35(1)：39-42.

[5] 李素文,朱寶申,孫麗娟,等.Survivin在宮頸癌組織中表達(dá)規(guī)律及臨床意義[J].河北醫(yī)藥,2009,31(14)：1743.

[6] Bache M,Holzapfel D,Kappler M,etal.Survivin protein expression and hypoxia in advanced cervical carcinoma of patients treated by radiotherapy[J].Gynecol Oncol,2007,104(1):139-144.

[7] 孫延霞,石張鎮(zhèn),盧振霞.Survivin在胃癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J].中國實驗診學(xué),2012,16(5):844-845.

[8] 朱華,施錚錚,楊孝軍,等.Survivin、Bcl-2、HPV 16/18 在宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌中的表達(dá)及臨床意義[J].實用婦產(chǎn)科雜志,2010,26(1):57-58.

[9] 朱華,胡燕帥,茨霞.survivin、bcl-2在宮頸癌和癌前病變組織中的表達(dá)及與人乳頭瘤病毒16/18感染的相關(guān)性[J].中華醫(yī)學(xué)雜志,2010,90(7):469-471.

[10] 秦前波,汪名飛,江從慶,等.結(jié)直腸癌中缺氧誘導(dǎo)因子-1α與Survivin 表達(dá)的關(guān)系[J].中華實驗外科雜志,2011,28(10):1713-1715.