酸棗的莖段培養(yǎng)

楊敏

摘 要：以野生酸棗的一年生幼嫩莖段為外植體，以基本培養(yǎng)基和生長調(diào)節(jié)劑為主要影響因素。通過正交試驗篩選出酸棗莖段初代培養(yǎng)的優(yōu)化培養(yǎng)基為：WPM+6-BA 2.0 mg/L +NAA 0.3 mg/L +IBA 0.2mg/L+蔗糖 30 g/L+瓊脂 5.8 g/L，并獲得無菌試管苗，這對酸棗的快繁有重要意義。

關(guān)鍵詞：酸棗；莖段；組織培養(yǎng)

中圖分類號：G632 文獻標識碼：B 文章編號：1002-7661（2014）02-393-01

酸棗，生長于山坡、山谷、溝邊、路旁，延安酸棗產(chǎn)地范圍為延安市寶塔區(qū)、吳旗、志丹等12個縣（區(qū)）現(xiàn)轄行政區(qū)域及黃龍縣石堡、范家卓子、界頭廟、紅石崖、白馬灘、柏峪、三岔、崾等8個鄉(xiāng)（鎮(zhèn)）現(xiàn)轄行政區(qū)域[1]。

酸棗仁能養(yǎng)心、安神、斂汗生津；用于治療神經(jīng)衰弱、失眠、多夢、盜汗等癥為傳統(tǒng)鎮(zhèn)靜安神良藥[2]；酸棗是作棗樹砧木及育種的原始材料[3]。由于莖段培養(yǎng)是以芽生芽的方式進行繁殖，具有易成功、變異小、繁殖速度快等優(yōu)點，成為植物組織培養(yǎng)中應(yīng)用最普遍的方法[4]。

酸棗是一種野生狀態(tài)極具開發(fā)潛力的果樹資源，但存在發(fā)芽率低、長勢弱的缺點。酸棗適應(yīng)性強，耐旱，根系發(fā)達，是一種優(yōu)良的水土保持樹種[6]。酸棗的栽培化已成發(fā)展趨勢，良種苗木快繁迫在眉睫。目前，對于酸棗的研究文獻主要集中在栽培技術(shù)、病蟲害防治、貯藏加工等應(yīng)用技術(shù)方面，通過組培快繁優(yōu)異種質(zhì)，是達到產(chǎn)業(yè)化栽培生產(chǎn)的必由之路。在已有酸棗組培快繁研究中，已經(jīng)實現(xiàn)了植株再生[7-9]。對棗的組培快繁已有較多報道，但是關(guān)于酸棗的組培快繁研究的還很少，而關(guān)于酸棗的莖段培養(yǎng)的更少[5-7]。

本試驗主要以酸棗莖段為材料，通過組織培養(yǎng)技術(shù)，期望建立酸棗莖段的培養(yǎng)系統(tǒng)，為建立其組培快繁及育種奠定基礎(chǔ)。

一、材料與方法

1、材料

于本年度3-4月份采回一年生帶腋芽的酸棗莖段作為試驗材料。

2、試驗方法

（1）試驗設(shè)計

按常規(guī)方法配制滅菌備用。正交設(shè)計表頭見表1。

表1 L16（45）正交試驗因素水平表頭設(shè)計

水平 因素

基培（A） 6-BA（B，mg/l） NAA（C，mg/l） IBA（D，mg/l）

1 MS 0.5 0 0

2 CY4 1.0 0.2 0.2

3 WPM 1.5 0.3 0.3

4 MS 2.0 0.4 0.4

（2）外植體的選擇和預處理 采集健康酸棗植株上一年生莖段，用流水沖洗10-15min，以0.1%的洗潔精浸泡30min后，用自來水反復沖洗干凈，再用15%的巴氏消毒液浸泡15min后用蒸餾水沖洗3-4遍，每15-20個莖段放入盛有3/4V蒸餾水的小燒杯（V<500mL）中進行水培發(fā)芽，待水培芽長至2-3cm左右剪下作外植體，確保每個外植體帶有一個腋芽。

（3）外植體的消毒與接種 設(shè)計兩種消毒方法：（1） 75%C2H5OH 75s + 0.1% HgCl2 8min；（2） 75%C2H5OH 90s + 0.1% HgCl2 10min。再將外植體隨機接種于各設(shè)計培養(yǎng)基中，每種處理接種50瓶。

（4）培養(yǎng)與調(diào)查方法 接種好的外植體然后放入培養(yǎng)室培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為24-27℃，相對濕度為60%-70%，光照強度為1500-2000 Lx，光照時間為12 h.d-1。培養(yǎng)至25d調(diào)查其培養(yǎng)結(jié)果，以污染率、存活率、萌發(fā)率作為衡量指標。

二、結(jié)果與分析

1、不同的消毒處理對污染率和成活率的影響

通過對外植體進行不同消毒時間表明，用75%C2H5OH 75s + 0.1% HgCl2 8min的消毒方法極顯著優(yōu)于用75%C2H5OH 90s +0.1% HgCl210min的消毒方法，而且用前者的消毒方法使外植體的平均成活率（87.3%）極顯著高于用后者的消毒方法的外植體的平均成活率（42.7%）。

2、不同類型的外植體對成活率的影響

通過對水培芽的莖段和無水培芽的莖段分別進行培養(yǎng)，水培芽的莖段的平均存活率（86%）顯著高于無水培芽的莖段的存活率（30%），污染率（10%）和褐化率（4%）顯著低于無水培芽莖段的污染率（46%）和褐化率（24%）。

3、各因素對莖段培養(yǎng)的影響

通過極差分析顯示，各因子萌發(fā)率的極差（R）分別為基培24.5，6-BA 23，NAA 6.5，IBA 14.3，對莖段培養(yǎng)萌發(fā)率的影響主次順序為：基本培養(yǎng)基-6-BA-IBA-NAA。

經(jīng)過多重比較q檢驗分析篩選出酸棗莖段初代培養(yǎng)的優(yōu)化培養(yǎng)基為：A3B4C3D2，即WPM+6-BA 2.0 mg/L +NAA 0.3 mg/L +IBA 0.2mg/L+蔗糖 30 g/L+瓊脂5.8 g/L。

三、討論

實驗結(jié)果表明，通常選取三月份的帶菌少的幼嫩莖段更適合酸棗快繁材料。用75%C2H5OH 75s+0.1%HgCl2 8min的消毒方法顯著優(yōu)于用75%C2H5OH 90s+0.1%HgCl210min的消毒方法，消毒時間不同結(jié)果也不同。

通過正交設(shè)計篩選出的酸棗莖段初代培養(yǎng)（見圖1、2）的優(yōu)化培養(yǎng)基為：WPM+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L +IBA 0.2mg/L+蔗糖 30 g/L+瓊脂5.8 g/L。生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的種類和配比水平也與自身需求有關(guān)，所以選了6-BA 2.0mg/L+NAA0.3mg/L+IBA0.2mg/L的激素水平。

圖1 WPM+6-BA1.5mg/L+IBA0.2mg/L下培養(yǎng)15天的酸棗莖段

圖2 WPM+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L下培養(yǎng)15天的酸棗莖段

參考文獻：

[1] 中國果業(yè)信息網(wǎng). 2008，（25）：1.

[2] 四川醫(yī)學院主編.中草藥學.北京： 人民衛(wèi)生出版社.