鍵合纖維素手性固定相拆分奧美拉唑?qū)τ丑w

邵 紅

（鄭州人民醫(yī)院，河南 鄭州 450000）

鍵合纖維素手性固定相拆分奧美拉唑?qū)τ丑w

邵 紅

（鄭州人民醫(yī)院，河南 鄭州 450000）

目的 建立采用鍵合纖維素手性固定相拆分奧美拉唑?qū)τ丑w的高效液相色譜法。方法 在正相條件下，采用Chiralpak IB色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）對奧美拉唑?qū)τ丑w進(jìn)行拆分，考察了流動(dòng)相組成、流速和柱溫對對映體分離的影響。結(jié)果 確立了最佳拆分條件：流動(dòng)相為正己烷-乙醇（90∶10），流速0.8 mL/min，檢測波長280 nm，柱溫25 ℃。結(jié)論 本法簡便，準(zhǔn)確，適用于奧美拉唑?qū)τ丑w的拆分。

高效液相色譜；鍵合纖維素手性固定相；奧美拉唑；對映體拆分

奧美拉唑是第一代苯并咪唑類質(zhì)子泵抑制劑，主要用于胃潰瘍、十二指腸潰瘍和反流性食管炎等疾病。分子中含有1個(gè)手性硫原子，存在1對對映體，其對映體在藥動(dòng)學(xué)方面存在明顯差異，S-對映體抑酸作用比消旋體更強(qiáng)，更持久[1,2]。目前，采用高效液相色譜法對奧美拉唑進(jìn)行拆分的報(bào)道主要有手性固定相法[3,4]和柱前衍生化法[5]。尚未有采用Chiralpak IB色譜柱對其進(jìn)行拆分的報(bào)道。本文采用Chiralpak IB色譜柱對奧美拉唑?qū)τ丑w進(jìn)行拆分，同時(shí)考察了影響分離的因素：流動(dòng)相組成、流速和柱溫。

1 儀器與試藥

Agilent HP1100高效液相色譜儀（1100VWD紫外可見檢測器，1100自動(dòng)進(jìn)樣器，HP化學(xué)工作站）；Chiralpak IB色譜柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm；日本大賽璐公司）；BP211D1/10萬天平（德國Sartorius公司）；奧美拉唑（外消旋體，中國食品藥品檢定研究院）；正己烷、異丙醇、乙醇和三氯甲烷（色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Chiralpak IB柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：正己烷-乙醇（90∶10）；流速：0.8 mL/min；檢測波長：280 nm；柱溫：25 ℃。

2.2 樣品溶液的制備與測定

精密稱取奧美拉唑1.0 mg置10 mL容量瓶中用乙醇溶解并定容至刻度，得濃度為0.1 mg/mL的樣品溶液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾并超聲脫氣后取10 μL進(jìn)樣，按所選色譜條件操作，色譜結(jié)果見圖1。

圖1 奧美拉唑?qū)τ丑w手性拆分色譜圖

3 討 論

3.1 流動(dòng)相組成對分離的影響

在固定流速為0.8 mL/min，柱溫為25 ℃，流動(dòng)相正己烷的比例為90%的條件下，分別選擇乙醇和異丙醇為流動(dòng)相改性劑，考察醇類流動(dòng)相改性劑對分離的影響（表1）。由表1可知，采用乙醇為流動(dòng)相改性劑時(shí)，奧美拉唑?qū)τ丑w的分離度較大。Chiralpak IB為5 μ硅膠表面共價(jià)鍵合有纖維素-三（3，5-二甲苯基氨基甲酸酯）的色譜柱，其氨基及羰基可以與對映體和醇類形成氫鍵作用。與異丙醇相比，乙醇和固定相形成氫鍵的能力較弱，對對映體和固定相的氫鍵作用點(diǎn)競爭較弱，有利于對映體與固定相之間形成非對映體結(jié)合物，從而有利于分離。

此外，由于Chiralpak IB柱將纖維素衍生物共價(jià)鍵合在硅膠基質(zhì)上，從而擁有更廣泛的溶劑耐受性。本文考察了三氯甲烷為流動(dòng)相改性劑時(shí)對分離的影響。結(jié)果表明，隨著三氯甲烷含量的減少，流動(dòng)相的洗脫能力降低，容量因子逐漸增大，分離因子和分離度也隨之增大。與乙醇為流動(dòng)相改性劑相比，其分離度較小。因此，選擇乙醇為流動(dòng)相改性劑。

表1 醇的種類對分離的影響

3.2 流動(dòng)相改性劑比例對分離的影響

固定流速為0.8 mL/min，柱溫為25 ℃，選擇乙醇為流動(dòng)相改性劑，考察乙醇比例對分離的影響（表2）。由表3可知，隨著乙醇含量的增加，流動(dòng)相和固定相的分子作用增強(qiáng)，流動(dòng)相的洗脫能力增強(qiáng)，使對映體的柱保留減弱，容量因子和分離因子下降，分離度也隨之降低。乙醇含量在5%時(shí)，分離度最大，但出峰時(shí)間過長，影響分離效率，故選擇流動(dòng)相為正己烷-乙醇（90∶10）。

表2 醇的比例對分離的影響

3.3 流速對分離的影響

在流動(dòng)相為正己烷-乙醇（90∶10），柱溫為25 ℃的條件下，考察流速對分離的影響。結(jié)果表明，隨著流速的增加，分離度逐漸減小，在流速為0.4 mL/min時(shí)分離度達(dá)到最大。隨著流速的增加，對映體與固定相的作用時(shí)間縮短，不利于對映體與固定相間形成非對映體結(jié)合物，故分離度減小。綜合考慮出峰時(shí)間和分離度，選擇流速為0.8 mL/min。

3.4 柱溫對分離的影響

固定流動(dòng)相為正己烷-乙醇（90∶10），流速為0.8 mL/min，考察柱溫（20～35 ℃）對分離的影響。結(jié)果表明，隨著柱溫的升高，對映體與固定相之間的結(jié)合能力減弱，保留時(shí)間變短，分離度降低。低溫時(shí)，對映體與固定相形成的非對映體結(jié)合物比高溫時(shí)穩(wěn)定，有利于分離。由于25 ℃接近室溫，且分離度較好，故選擇25 ℃為柱溫。

4 結(jié) 論

本文采用Chiralpak IB色譜柱，在正相條件下對奧美拉唑?qū)τ丑w進(jìn)行拆分，考察了影響分離的因素：流動(dòng)相組成、流速和柱溫。本法簡便，準(zhǔn)確，適用于奧美拉唑?qū)τ丑w的拆分。

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：1671-8194（2014）08-0039-02