自建檢測系統(tǒng)測定血清總蛋白測量不確定度的評估

呂賽平，劉琴，王春陽，金國兵，鄒學森

(江西省腫瘤醫(yī)院檢驗科，江西 南昌330029)

根據(jù) 《ISO15189醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力認可準則》的要求，實驗室在適用且可能的情況下應(yīng)該對臨床檢驗結(jié)果的測量不確定度進行評估[1]。嚴格評估臨床檢驗不確定度的方法是先對測量過程進行全面分析，識別每一個可能的不確定度來源后再加以評估，這種方法費時費力，難以在臨床檢驗工作中推廣使用[2]。在此背景下，各種測量不確定度的簡化評估方法逐步應(yīng)用于臨床，本研究即采用歐洲診斷試劑廠家協(xié)會頒發(fā)的醫(yī)學實驗室測量不確定度評估方法對我科自建檢測系統(tǒng)測定血清總蛋白的測量不確定度進行評估，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 試驗樣本 根據(jù)總蛋白的MDL采用混合血清法配制兩個濃度水平的試驗樣本，要求患者血清無溶血、無黃疸、無脂血，并且要求配制好的低值MDL樣本、高值MDL樣本總蛋白濃度分別在44~46g/L、79~81g/L區(qū)間之內(nèi)。將兩個試驗樣本各分裝成25份，每份至少0.5ml，1份用于批內(nèi)重復(fù)性試驗，其余24份-20℃冰凍保存，用于批間重復(fù)性試驗。

1.2 儀器與試劑 日本東芝公司生產(chǎn)的TBA-120FR全自動生化分析儀；上海執(zhí)誠生物科技有限公司生產(chǎn)的總蛋白試劑盒 (雙縮脲法)，批號為ZCJUNM002；英國朗道實驗診斷有限公司生產(chǎn)的復(fù)合校準品及質(zhì)控品，復(fù)合校準品批號為794UN，質(zhì)控品批號為709UN、498NE。

1.3 測量不確定度的評定方法

1.3 .1批內(nèi)重復(fù)性試驗 測定低值MDL樣本、高值MDL樣本的總蛋白濃度，每個樣本批內(nèi)重復(fù)測定10次以上，分別計算兩個樣本的均值(MEAN)、標準差(SD)、CVw。

1.3 .2批間重復(fù)性試驗 測定低值MDL樣本、高值MDL樣本的總蛋白濃度，每天測定1次，連續(xù)1個月，分別計算兩個樣本的MEAN、SD、CVB。在此過程中，對自建檢測系統(tǒng)測定總蛋白進行室內(nèi)質(zhì)控，室內(nèi)質(zhì)控在控時可以直接測定試驗樣本，室內(nèi)質(zhì)控失控時需要查找失控原因并給予糾正，待失控解決后再測定試驗樣本。

1.3 .3方法偏倚 根據(jù)衛(wèi)生部臨檢中心組織的室間質(zhì)評確定自建檢測系統(tǒng)測定血清總蛋白在低值MDL、高值 MDL的 CVBias。 具體方法如下：(1)調(diào)取2011-2013年共6次室間質(zhì)評結(jié)果，每次室間質(zhì)評含5個濃度水平的室間質(zhì)評品，從其中選取2個濃度水平的室間質(zhì)評用于計算方法偏倚，選擇原則是室間質(zhì)評靶值與低值MDL樣本、高值MDL樣本的總蛋白濃度最近。⑵低值MDL、高值MDL的CVBias均按如下方法計算：①計算每次室間質(zhì)評結(jié)果的百分差值dn(%)，注意dn具有正負號。②計算所有百分差值的平均值dm(%)。③計算Sdr，

2 結(jié)果

2.1 批內(nèi)重復(fù)性試驗結(jié)果 自建檢測系統(tǒng)測定血清總蛋白在低值MDL、高值MDL的CVw分別為0.86%、0.74%，見表 1。

表1 批內(nèi)重復(fù)性試驗結(jié)果

2.2 批間重復(fù)性試驗結(jié)果 自建檢測系統(tǒng)測定血清總蛋白在低值MDL、高值MDL的CVB分別為1.37%、1.41%，見表 2。

表2 批間重復(fù)性試驗結(jié)果

2.3 方法偏倚試驗結(jié)果 自建檢測系統(tǒng)測定血清總蛋白在低值MDL、高值MDL的CVBias分別為2.31%、3.29%，見表 3、表 4。2.4 EU計算結(jié)果 自建檢測系統(tǒng)測定血清總蛋白在低值MDL、高值MDL的EU分別為5.64%、7.31%。

表3 低值MDL的方法偏倚

表4 高值MDL的方法偏倚

3 討論

測量不確定度是指表征合理地賦予被測量之值的分散性，與測量結(jié)果相聯(lián)系的參數(shù)[2]。測量不確定度可以用兩種方法表述，以標準差表述時為絕對不確定度，以變異系數(shù)表述時為相對不確定度，目前臨床上以后者更為常用[3]。根據(jù)不確定度的評定方法，測量不確定度可以分為A類不確定度、B類不確定度兩大類。A類不確定度采用統(tǒng)計學方法評定，主要包括批內(nèi)重復(fù)性不確定度、批間重復(fù)性不確定度等。B類不確定度采用非統(tǒng)計學方法評定，主要包括方法偏倚不確定度，其他原因的不確定度如校準品不確定度、分析前因素不確定度等[4,5]。在合成不確定度評定過程中，批內(nèi)重復(fù)性不確定度、批間重復(fù)性不確定度、方法偏倚不確定度較容易確定，校準品不確定度由生產(chǎn)廠商提供，但是分析前因素不確定度則難以確定，從而使得合成不確定度難以準確量化，因此目前臨床上評估測量不確定度時常常計算其擴展不確定度[6]。

在本研究中，由于我們未能成功向英國朗道實驗診斷有限公司索取校準品不確定度，因此我們只能根據(jù)批內(nèi)重復(fù)性不確定度、批間重復(fù)性不確定度、方法偏倚不確定度等3個因子評估我科自建檢測系統(tǒng)測定血清總蛋白的擴展不確定度。在研究過程中，我們對試驗樣本濃度提出了一定的要求。MDL是不同于參考值的另外一些限值，這些值在疾病診斷過程中發(fā)揮排除及確診的作用，或者可以用于評估疾病的預(yù)后。由于MDL在臨床檢驗結(jié)果的解釋過程中的有著十分重要的地位，因此選擇MDL作為試驗樣本濃度的臨床意義是不言而喻的。

本研究結(jié)果顯示我科自建檢測系統(tǒng)測定血清總 蛋 白在 低 值 MDL 的 CVw、CVB、CVBias分 別 為0.86%、1.37%、2.31%，EU為5.64%； 在高值 MDL的 CVw、CVB、CVBias分 別 為 0.74% 、1.41% 、3.29% ，EU為7.31%。由于目前臨床上暫未對各個檢驗項目的EU作出明確要求，因此在解釋本研究結(jié)果時我們難以作出定論。盡管如此，在日常工作過程中，如果我們狠抓分析前質(zhì)量控制，嚴格控制其他原因的不確定度，這樣就可以最大限度地縮小測量不確定度評估試驗得到的理論EU值與實際EU值的差距，此時本方法得到的試驗結(jié)果可以準確地反映臨床檢驗結(jié)果的分散性，從而有利于測量不確定度評估更好地應(yīng)用于臨床。

[1]中國合格評定國家認可委員會．IS015189醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力認可準則[S]．北京：中國合格評定國家認可委員會，2007．

[2]International Organization for Standardization．ISO guide to the expression of uncertainty in measurement[S].Geneva：ISO，1995．

[3]陳麗.羅氏電化學發(fā)光檢測血清腫瘤標志物測量不確定度的測定[J].實驗與檢驗醫(yī)學,2011,9(5):501-502.

[4]梅敏,李海珠,帥虎.血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶測定分析中的測量不確定度評定[J].實驗與檢驗醫(yī)學,2010,28(4):371-372，394.

[5]Guerrasio R,Haberhauer-Troyer C,Steiger M,et al.Measurement uncertainty of isotopologue fractions in fluxomics determined via mass spectrometry[J].Anal Bioanal Chem,2013,405(15):5133-5146.

[6]謝華斌,盛楠,林永志,等醫(yī)學實驗室電化學發(fā)光分析系統(tǒng)測量不確定度評價[J].國際檢驗醫(yī)學雜志,2013,34(1):85-87.