復(fù)方血栓通膠囊基于原料藥材與藥效相關(guān)聯(lián)的組方規(guī)律研究*

劉 宏，謝稱石，王永剛，李沛波，彭 維，龍超峰，蘇薇薇

(1.中山大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，廣東 廣州 510275；2. 廣東眾生藥業(yè)股份有限公司，廣東 東莞 523325)

復(fù)方血栓通膠囊系廣東眾生藥業(yè)股份有限公司的拳頭產(chǎn)品，于2001年被列為國家中藥保護(hù)品種。復(fù)方血栓通膠囊由三七、黃芪、丹參、玄參四味藥材組成，用于治療血瘀兼氣陰兩虛證的視網(wǎng)膜靜脈阻塞和穩(wěn)定性勞累型心絞痛，臨床療效顯著[1-4]。

中藥復(fù)方的特色在于：通過多味藥材的相互配合，實(shí)現(xiàn)對(duì)機(jī)體失衡狀態(tài)的修正。然而，由于東西方文化的差異，對(duì)于中藥復(fù)雜體系來說，傳統(tǒng)的“君臣佐使”理論，尚未被西方醫(yī)學(xué)界接受。目前，通過藥效實(shí)驗(yàn)科學(xué)解釋“君臣佐使”規(guī)律，尚處于發(fā)軔階段。本研究基于灰色關(guān)聯(lián)分析方法，研究復(fù)方血栓通膠囊組方中各味藥材與藥效間的關(guān)聯(lián)性，科學(xué)解釋其組方配伍規(guī)律，以祈在中西醫(yī)之間架起溝通的橋梁，具有理論意義和實(shí)用價(jià)值。

1 材 料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)SD大鼠，雄性，130只，體質(zhì)量180～220 g，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SCXK-(粵)2008-0002。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑

藥效實(shí)驗(yàn)：復(fù)方血栓通差異樣品浸膏(批號(hào)：120523)，由廣東眾生藥業(yè)股份有限公司提供，用生理鹽水分別配制成152 mg/mL的藥液；w=0.1%鹽酸腎上腺素注射液，規(guī)格1 mg：1 mL，上海禾豐制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字H31021062，批號(hào)：20111109、20120315，用生理鹽水稀釋至0.4 mg/mL，現(xiàn)用現(xiàn)配；阿司匹林(Asp)腸溶片，吉林市鹿王制藥公司，國藥準(zhǔn)字H22025784，批號(hào)：BTA7WH2；復(fù)方丹參滴丸(Fdd)，天津天士力制藥股份有限公司，國藥準(zhǔn)字Z10950111，批號(hào)：120201；氯化鈉注射液(w=0.9%)，廣東利泰制藥股份有限公司，批號(hào)：11100852、廣東科倫藥業(yè)有限公司，批號(hào)：D12070311-2；二水合檸檬酸三鈉，廣州化學(xué)試劑廠，批號(hào)：20030904-1；水合氯醛(水合三氯乙醛)，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20111114。

色譜部分：液相色譜所用試劑乙腈(Burdick & Jackson, Honeywell)、磷酸(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)為色譜純，水為超純水，其余所用試劑為分析純。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

藥效實(shí)驗(yàn)：渦旋振蕩器：Scientific Industries Vortex-Genie 2；十萬分之一電子天平：Sartorius BP211D、ACCμLAB ALC-210.4；超低溫冰箱：海爾 BCD-568W；冷凍離心機(jī)：Eppendorf 5430R、TD5A-WS、TDL-5M；北京普利生LBY-NJ4血小板聚集儀；Sysmex CA-510全自動(dòng)血凝分析儀；北京普利生LBY-N6B全自動(dòng)自清洗血流變儀；北京普利生LBY-XC40全自動(dòng)動(dòng)態(tài)血沉測(cè)試儀。

色譜部分：Ultimate 3000 DGLC高效液相色譜儀(美國Dionex公司，DGP-3600SD雙三元泵、SRD-3600脫氣機(jī)、WPS-3000SL自動(dòng)進(jìn)樣器、TCC3000-RS柱溫箱、DAD檢測(cè)器、Chromeleon6.8數(shù)據(jù)處理軟件)；十萬分之一電子分析天平(德國Sartorius公司，BP211D型)；超純水器(美國密理博Millipore公司，Simplicity)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(德國Laborota公司，4001型)；數(shù)控超聲波清洗器(昆山超聲儀器有限公司，KQ-250DE型)；燒杯、錐形瓶、茄形瓶、滴管、移液管等玻璃儀器。色譜柱型號(hào)：Dionex Acclaim?120 C18(3 μm，150 mm×4.6 mm)。

1.4 實(shí)驗(yàn)環(huán)境

經(jīng)中山大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)飼養(yǎng)于廣東省中山大學(xué)海洋與中藥實(shí)驗(yàn)室SPF級(jí)動(dòng)物房，許可證號(hào)： SCXK-(粵)2009-0020。觀察室溫度20～23 ℃，相對(duì)濕度50%～65%，顆粒飼料，在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物適應(yīng)新環(huán)境一周后開始實(shí)驗(yàn)并實(shí)驗(yàn)過程中采取適當(dāng)?shù)姆椒p輕對(duì)動(dòng)物的傷害。

2 方 法

2.1 差異樣品的構(gòu)建及指紋圖譜分析

1) 差異樣品的制備：根據(jù)復(fù)方血栓通膠囊的處方組成，按照配方約束下四因素九水平的均勻設(shè)計(jì)[5]，調(diào)整4味藥材的配比，在此基礎(chǔ)上制備了9個(gè)差異樣品[6]。

2) 差異樣品指紋圖譜分析及聚類分析：分別取復(fù)方血栓通差異樣品1-9號(hào)約0.3 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中加φ=70%的甲醇20 mL，密塞，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz) 30 min，濾過，將濾紙及殘?jiān)猛诲F形瓶中，再加入甲醇20 mL，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz) 30 min，濾過，合并兩次濾液，減壓回收溶劑至近干，加φ=50%甲醇使溶解，定量轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶，加φ=50%甲醇至刻度，搖勻，用0.22 μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得差異樣品供試品溶液。采用指紋圖譜的構(gòu)建方法[7-10]，對(duì)制備所得差異樣品1-9號(hào)進(jìn)行HPLC分析，并根據(jù)差異樣品指紋圖譜中21個(gè)已確證成分的共有峰峰面積，將其導(dǎo)入SPSS 18.0 中進(jìn)行聚類分析，聚類方法采用Between-groups linkage，距離計(jì)算方法采用Pearson correlation。

2.2 差異樣品藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)

1) 實(shí)驗(yàn)分組及給藥：SD大鼠130只隨機(jī)分為13組，分別為空白對(duì)照組，急性血瘀模型組，陽性對(duì)照Asp給藥組，陽性對(duì)照Fdd給藥組,復(fù)方血栓通差異樣品1-9組。陽性對(duì)照組Asp 100 mg/kg/d，陽性對(duì)照組Fdd 800 mg/(kg·d)-1,復(fù)方血栓通差異樣品1-9組1520 mg/(kg·d)-1。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在飼養(yǎng)環(huán)境中適應(yīng)一周后開始給藥，每天灌胃給藥一次，給藥體積均為10 mL/kg，空白對(duì)照組與模型組灌胃給予同體積生理鹽水，連續(xù)給藥10 d。

2) 大鼠急性血瘀模型：末次給藥后30 min，除空白對(duì)照組外其余各組大鼠均皮下注射鹽酸腎上腺素0.8 mg/kg，空白組大鼠皮下注射等量生理鹽水，過2 h 后除空白對(duì)照組外其余各組大鼠均浸入0～4 ℃ 冰水內(nèi)進(jìn)行冷刺激5 min，2 h 后再次皮下注射等量鹽酸腎上腺素0.8 mg/kg[11-14]，處置后禁食12 h后各組進(jìn)行灌胃給藥，1 h后每100 g體質(zhì)量腹腔注射麻醉φ=10%水合氯醛0.35 mL，腹主動(dòng)脈采血，枸櫞酸鈉1:9抗凝，血樣處理及檢測(cè)全部按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行，所取血液全部用于血液流變和凝血功能相關(guān)藥效指標(biāo)檢測(cè)[15-16]。

3) 大鼠血液藥效指標(biāo)檢測(cè)：取1.5 mL抗凝血液放入TDL-5M冷凍離心機(jī)進(jìn)行離心(2 000 r/min, 15 min, 20 ℃)得血漿，一部分血漿放入Sysmex CA-510全自動(dòng)血凝分析儀進(jìn)行活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)、凝血酶原時(shí)間(PT)項(xiàng)目檢測(cè)，一部分血漿放入北京普利生LBY-N6B全自動(dòng)自清洗血流變儀進(jìn)行毛細(xì)管血漿黏度(PV)檢測(cè)；取0.9 mL抗凝血液放入北京普利生LBY-N6B全自動(dòng)自清洗血流變儀進(jìn)行全血黏度(WBV, 150 s-1)、紅細(xì)胞聚集指數(shù)(EAI)及紅細(xì)胞電泳指數(shù)(RCEI)檢測(cè)；取0.9 mL抗凝血液放入TDL-5M冷凍離心機(jī)進(jìn)行離心(2 000 r/min, 15 min, 20 ℃)并放入北京普利生LBY-XC40全自動(dòng)動(dòng)態(tài)血沉測(cè)試儀進(jìn)行紅細(xì)胞壓積檢測(cè)；取3.0 mL抗凝血液放入TDL-5M冷凍離心機(jī)進(jìn)行第一次離心(500 r/min, 20 ℃, 10 min)得富血小板血漿(PRP)，取出富血小板血漿并將剩余部分再次離心(3 000 r/min, 20 ℃, 10 min)得貧血小板血漿(PPP)，5 μL ADP(300 μmol/L)用于誘導(dǎo)血小板聚集，300 μL PRP與300 μL PPP放入北京普利生LBY-NJ4血小板聚集儀檢測(cè)血小板最大聚集率(MPAR)。

2.3 灰色關(guān)聯(lián)分析[17-19]

在本研究中，各處理組藥效指標(biāo)的均值用以表征藥效高低，為方便各種分析方法的計(jì)算，在進(jìn)行藥材含量-藥效關(guān)聯(lián)分析之前先對(duì)藥效作用原始數(shù)據(jù)中的負(fù)向指標(biāo)先做正向化處理(取倒數(shù))再用均值化方法進(jìn)行無量綱化處理[20]。除了空白組外所有組動(dòng)物都進(jìn)行了造模處理，只受給藥單一因素的影響。為直觀顯示Asp、Fdd及9組差異樣品的藥效強(qiáng)弱，定義模型組的7個(gè)藥效指標(biāo)值為參考數(shù)列，其余Asp組、Fdd組及差異樣品1-9組為比較數(shù)列，利用灰色關(guān)聯(lián)分析方法計(jì)算比較數(shù)列與參考數(shù)列的灰色關(guān)聯(lián)度，灰色關(guān)聯(lián)度越高則認(rèn)為與模型組相似度越高，則整體藥效越差。

3 結(jié) 果

3.1 差異樣品指紋圖譜分析及聚類分析

對(duì)差異樣品的指紋圖譜(圖1 A、B)進(jìn)行聚類分析，結(jié)果見圖1(C)。當(dāng)聚類重新標(biāo)定距離(Rescaled Distance Cluster Combine)為5 時(shí)，9 批樣品可分為七類：2、3為一類，7、8為一類，其余自成一類。

圖1 復(fù)方血栓通膠囊差異樣品HPLC圖譜(A：203 nm；B：270 nm)及聚類分析結(jié)果(C) Fig.1 The HPLC fingerprint (A：203 nm；B：270 nm)and cluster analysis of samples

3.2 差異樣品藥效實(shí)驗(yàn)

1) WBV(150 s-1)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：急性血瘀大鼠高切變率下WBV顯著升高(P<0.05)，而Asp、Fdd、差異樣品1、2、3、4、5組對(duì)大鼠WBV升高有顯著抑制作用(P<0.05，P<0.01)，其余各組與模型組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(圖2)。

圖2 差異樣品對(duì)150 s-1切變率下全血黏度的改善作用柱狀圖Fig.2 The effects of samples on WBV at 150 s-1

2) EAI、RCEI

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，急性血瘀大鼠EAI顯著升高(P<0.01)，RCEI顯著降低(P<0.01)；而Asp、Fdd、差異樣品1、2、3、4、5、6、8組對(duì)EAI升高均有顯著抑制作用(P<0.05)，差異樣品2、4、5對(duì)RCEI的降低有顯著改善作用(P<0.05)，其余各組與模型組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(圖3)。

圖3 差異樣品對(duì)紅細(xì)胞聚集、電泳指數(shù)的改善作用柱狀圖Fig.3 The effects of samples on EAI and RCEI

3) PT、APTT

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，急性血瘀大鼠PT顯著降低(P<0.01)、APTT顯著降低(P<0.05)，而各給藥組中只有差異樣品3組對(duì)APTT的降低有顯著抑制作用(P<0.05)，其余各組除了差異樣品7組外對(duì)PT、APTT均有一定的提升作用，但與模型組比較無顯著性差異(圖4、圖5)。

圖4 差異樣品對(duì)PT的改善作用柱狀圖Fig.4 The effects of samples on PT

圖5 差異樣品對(duì)APTT的改善作用柱狀圖Fig.5 The effects of samples on APTT

4) MPAR、PV

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，急性血瘀大鼠PV 及MPAR均顯著升高 (P<0.01)，而Asp、差異樣品1、5組對(duì)MPAR的升高有顯著抑制作用(P<0.01)，其余各組則均有一定的改善作用，Asp、Fdd、差異樣品各組對(duì)PV 的改善作用較弱，與模型組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(圖6、圖7)。

圖6 差異樣品對(duì)血小板最大聚集率的影響柱狀圖Fig.6 The effects of samples on MPAR

圖7 差異樣品對(duì)血漿黏度的影響柱狀圖Fig.7 The effects of samples on PV

3.3 灰色關(guān)聯(lián)分析

差異樣品藥效比較的灰色關(guān)聯(lián)分析結(jié)果見表1。在驗(yàn)證了復(fù)方血栓通差異樣品間具有藥效差異后，進(jìn)一步考察三七、黃芪、玄參、丹參4味藥材對(duì)藥效的貢獻(xiàn)大小。以4味藥材在差異樣品中的含量為參考數(shù)列，以每個(gè)藥效指標(biāo)值在差異樣品中的大小為比較數(shù)列，利用灰色關(guān)聯(lián)分析方法計(jì)算比較數(shù)列與參考數(shù)列的灰色關(guān)聯(lián)度，關(guān)聯(lián)度越高則表明該藥材藥效貢獻(xiàn)越大，計(jì)算結(jié)果見表2。在明確了四味藥材的藥效貢獻(xiàn)大小后，對(duì)每味藥材與7個(gè)藥效指標(biāo)的關(guān)聯(lián)度進(jìn)行排序，從而進(jìn)一步分析各味藥材的主要藥效作用靶點(diǎn)，計(jì)算結(jié)果見表3。

表1 復(fù)方血栓通差異樣品各組與模型組灰色關(guān)聯(lián)度(由左至右依次降低)Table 1 The grey relational degree of samples

表2 四味藥材與7個(gè)指標(biāo)灰色關(guān)聯(lián)度Table 2 The grey relational degree between herbs and efficacy indicators

表3 四味藥材與7個(gè)藥效指標(biāo)灰色關(guān)聯(lián)度排序結(jié)果(從上至下遞減)Table 3 The grey relational degree ranling results efficacy indicators towards herbs

4 討 論

Asp為世界公認(rèn)的有效抑制血小板聚集的藥物，可有效緩解血液高凝狀態(tài)，有證據(jù)顯示Asp可減少心肌梗死、中風(fēng)和血管性死亡的風(fēng)險(xiǎn)[21-22]。Fdd可顯著改善血液循環(huán)障礙，臨床上常用于治療冠心病、心絞痛[23]。本研究中，作為陽性藥物，Asp和Fdd分別顯示了較好的活血化瘀療效，其中Asp可顯著改善全血黏度及血小板聚集率，F(xiàn)dd可顯著改善全血黏度及紅細(xì)胞聚集性，表明本實(shí)驗(yàn)藥效模型適用于活血化瘀藥物的篩選。

由于4味藥材配比的不同，9個(gè)復(fù)方血栓通差異樣品的藥效顯示出明顯的差異。由表1可知，藥效作用強(qiáng)弱順序由大到小為S5>S1>S2>S4>S3>S8>S9>S6>S7，即5號(hào)差異樣品藥效作用最強(qiáng)，6-9號(hào)樣品藥效較差。

從表2可知，三七藥材與所有藥效指標(biāo)間的關(guān)聯(lián)度均在0.8左右，其余三味藥材的關(guān)聯(lián)度則在0.6左右，三七對(duì)藥效的貢獻(xiàn)要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其余三味藥材，從而表明三七為組方中主要藥效貢獻(xiàn)者，是活血化瘀之要藥。

藥材與藥效指標(biāo)間關(guān)聯(lián)度的排序能夠直觀顯示藥材主要作用于哪些藥效指標(biāo)，結(jié)合其臨床意義則可揭示4味藥材間的相互協(xié)調(diào)作用。表3提示，三七與PV、PT、APTT、高切變率下WBV及血小板聚集率關(guān)聯(lián)密切，表明三七可能對(duì)血液中紅細(xì)胞變形性、血小板、血漿蛋白及凝血因子具有調(diào)節(jié)作用，其余三味藥材均主要與EAI關(guān)聯(lián)較大，表明三味藥材可能對(duì)血液中紅細(xì)胞聚集性具有抑制作用，從而可有效抑制全血黏度的升高。

紅細(xì)胞呈雙凹圓盤形狀，直徑約7～8 μm，它可以通過比自己直徑要小甚至小好幾倍的微血管，這一特性對(duì)微循環(huán)具有重大意義。紅細(xì)胞具有明顯的變形能力及很好的彈性，若這種能力喪失，紅細(xì)胞無法通過微小的毛細(xì)血管，極易導(dǎo)致微循環(huán)障礙，血液堵塞，黏度增高。高切變率下全血黏度表征血液中紅細(xì)胞變形性的強(qiáng)弱[24]，三七可顯著降低高切變率下的全血黏度表明其對(duì)紅細(xì)胞變形性具有很好的調(diào)節(jié)作用，從而可以增強(qiáng)微小血管的血液流動(dòng)性，改善微循環(huán)。由此可見三七作為復(fù)方血栓通膠囊藥效的主要貢獻(xiàn)者，對(duì)其適應(yīng)癥之一視網(wǎng)膜眼底靜脈栓塞、眼底瘀血有著舉足輕重的作用。

PT表征外源性凝血系統(tǒng)功能，是監(jiān)測(cè)口服抗凝劑的常用指標(biāo)，APTT是內(nèi)源性凝血系統(tǒng)較為簡便、敏感的篩選試驗(yàn)。二者均與血液中凝血因子息息相關(guān)[25]。血小板功能的正常是血液通暢的必要條件之一，血小板聚集率升高是心血管疾病的重要致病因素之一[26]。血漿黏度的升高是由血液中大分子血漿蛋白紊亂引起，可引發(fā)血液產(chǎn)生高凝狀態(tài)。凝血因子、血小板、血漿蛋白等是血液系統(tǒng)中的重要組成部分，三七與PV 、PT、APTT及血小板聚集率關(guān)聯(lián)密切，可推測(cè)三七在改善微循環(huán)的同時(shí)可在一定程度上修復(fù)血液系統(tǒng)，對(duì)非細(xì)胞結(jié)構(gòu)成分具有一定的調(diào)節(jié)作用。

有證據(jù)顯示缺血性心臟病、心肌梗塞患者其紅細(xì)胞聚集性顯著增高。紅細(xì)胞聚集程度增加，促使血液黏度增加，同時(shí)還可能引發(fā)其他血流變指標(biāo)改變，導(dǎo)致血液阻力增大，血液流動(dòng)性減弱，甚至使某些毛細(xì)血管、微小靜脈堵塞，導(dǎo)致循環(huán)血液灌注量不足，組織或器官缺血、缺氧及酸性代謝產(chǎn)物增加，后果十分嚴(yán)重。紅細(xì)胞聚集指數(shù)可表征血液中紅細(xì)胞聚集性的強(qiáng)弱[24]。黃芪、丹參、玄參三味藥材均與該藥效指標(biāo)密切相關(guān)，表明三味藥材可顯著降低紅細(xì)胞聚集性，降低血液黏度，調(diào)節(jié)全身組織的血液流動(dòng)性。由此可知復(fù)方血栓通膠囊中三味藥材可增強(qiáng)三七對(duì)血液微循環(huán)障礙的改善作用，對(duì)其適應(yīng)癥之一血瘀兼氣陰兩虛的穩(wěn)定性勞累型心絞痛發(fā)揮較好的療效。

綜合上述分析，三七可顯著改善微循環(huán)障礙，調(diào)節(jié)凝血功能，緩解毛細(xì)血管及微小靜脈堵塞；黃芪、丹參、玄參三味藥材可顯著降低血液中紅細(xì)胞間的聚集性，從而使血液運(yùn)行順暢，防止血液高凝狀態(tài)出現(xiàn)。四味藥材藥效作用各有優(yōu)勢(shì)又相互補(bǔ)充，合理發(fā)揮了多靶點(diǎn)、多途徑調(diào)控的作用。

傳統(tǒng)中醫(yī)理論認(rèn)為，三七活血化瘀為君藥，丹參為臣藥，破瘀血、補(bǔ)新生血，加強(qiáng)君藥之活血化瘀，黃芪之大補(bǔ)元?dú)馀c玄參之滋陰合用治療氣陰兩虛為佐藥。本研究結(jié)果與傳統(tǒng)中醫(yī)理論不謀而合，以創(chuàng)新的思路與方法解釋了復(fù)方血栓通膠囊組方配伍規(guī)律，為其他中藥復(fù)方配伍研究提供了范例。

[1] 劉忠政,梁潔萍,聶怡初,等. 復(fù)方血栓通膠囊基于血液循環(huán)和凝血過程相關(guān)靶點(diǎn)的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究[J]. 中山大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版, 2013, 52(2): 97-100.

[2] 何善智. 復(fù)方血栓通膠囊的藥理研究[J]. 廣東醫(yī)學(xué), 1997, 18(1): Ⅱ.

[3] 邢玉微. 復(fù)方血栓通膠囊對(duì)糖尿病大鼠微血管保護(hù)作用及機(jī)制探討[D]. 上海: 第二軍醫(yī)大學(xué), 2010.

[4] 張建浩,黃緒亮,黃海波,等. 復(fù)方血栓通滴丸對(duì)血瘀大鼠血液流變學(xué)及小鼠凝血時(shí)間的影響[J]. 中國藥學(xué)雜志, 2000, 39(5): 350-352.

[5] 方開泰. 均勻設(shè)計(jì)與均勻設(shè)計(jì)表[M]. 北京: 科學(xué)出版社, 1994.

[6] 國家藥典委員會(huì). 中華人民共和國藥典(一部) [S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010: 909-910．

[7] 梁潔萍,劉忠政,彭維,等. 復(fù)方血栓通膠囊HPLC指紋圖譜質(zhì)量控制方法研究[J]. 中藥材, 2012, 35(11), 1854-1858.

[8] 關(guān)倩怡,黃琳,彭維,等. 口炎清顆粒指紋圖譜研究[J]. 中山大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版, 2011, 50(1): 115-118.

[9] 鄭文燕,王曉東,彭維,等. 祛痰止咳顆粒指紋圖譜研究[J]. 中山大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版, 2011, 50(3): 98-101.

[10] 梁潔萍,陳思,謝稱石,等. 復(fù)方血栓通膠囊中4個(gè)有效成分的一測(cè)多評(píng)定量方法研究[J]. 中山大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版, 2013,52(5): 123-126

[11] 陳奇. 中藥藥理研究方法學(xué)[M]. 北京: 人民衛(wèi)生出版社, 1993: 564.

[12] 紀(jì)文巖,劉英慧,高曉昕. 腎上腺素合冷刺激致血瘀模型大鼠血栓形成標(biāo)志物變化的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 世界中西醫(yī)結(jié)合雜志, 2010, 5(9): 758-759.

[13] 李偉霞,黃美艷,唐于平,等. 大鼠急性血瘀模型造模方法的研究與評(píng)價(jià)[J]. 中國藥理學(xué)通報(bào), 2011, 27(12): 1761-1765.

[14] LIU L, DUAN J A, TANG Y, et al. Taoren-Honghua herb pair and its main components promoting blood circμlation through influencing on hemorheology, plasma coagμlation and platelet aggregation[J]. J Ethnopharmacol, 2012, 139(2): 381-387.

[15] 曹明山,張道華. 血液流變學(xué)檢查的臨床應(yīng)用及注意事項(xiàng)[J]. 臨床醫(yī)藥實(shí)踐, 2003,12(6):474.

[16] 李鳳蘭,程虎英,劉瑩. 血液流變學(xué)標(biāo)本采集的注意事項(xiàng)[J]. 全科護(hù)理, 2009, 7(2): 328.

[17] 蘇薇薇. 嶺南特色中藥指紋圖譜質(zhì)量控制關(guān)鍵技術(shù)研究[M]. 廣州：廣東科技出版社, 2012: 327-340.

[18] SONG Q, SHEPPERD M. Predicting software project effort: A grey relational analysis based method[J]. Expert Systems with Applications，2011, 38(6)：7302-7316.

[19] KUO Y, YANG T, HUANG G W.The use of grey relational analysis in solving mμltiple attribute decision-making problems[J].Computers & Industrial Engineering, 2008, 55(1)：80-93.

[20] 劉新華. 因子分析中數(shù)據(jù)正向化處理的必要性及其軟件實(shí)現(xiàn)[J]. 重慶工學(xué)院學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版, 2009, 23(9): 152-155.

[21] HENNEKENS C H, BURING J E. Aspirin in the primary prevention of cardiovascular disease[J]. Cardiology Clinics, 1994, 12(3): 443-450.

[22] MAREE A O, CURTIN R J, DOOLEY M, et al. Platelet response to low-dose enteric-coated aspirin in patients with stable cardiovascμlar disease[J]. Journal of the American College of Cardiology， 2005, 46(7)：1258-1263.

[23] JIANG S M, FU Y, CHEN Y P, et al. Study on protective effects of traditional Chinese medical complex prescription on myocardial ischemia/reperfusion injury after coronary artery ligation in rats[J]. Chinese Journal of Integrated Traditional and Western Medicine in Intensive and Critical Care, 2005, 12(6):347-351.

[24] WEN Z, YAO W, XIE L, et al.Influence of neuraminidase on the characteristics of microrheology of red blood cells[J]. Clinical Hemorheology and Microcircμlation,2000, 23(1):51-57.

[25] BAJAJ S P, JOIST J H. Seminars in thrombosis and hemostasis[M].New York: Stratton Intercontinental Medical Book Corporation, c1974-1999: 407-418.

[26] GACHET C, CAZENAVE J. ADP induced blood platelet activation: a review[J]. Nouvelle Revue Francaise Dhématologie, 1991, 33(5): 347.