澤漆不同部位總黃酮的含量測(cè)定

李玉賢 董媛媛 王天杰 張俊利 王 磊

（河南中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，河南 鄭州 450046）

澤漆不同部位總黃酮的含量測(cè)定

李玉賢 董媛媛 王天杰 張俊利 王 磊

（河南中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，河南 鄭州 450046）

目的 測(cè)定澤漆不同部位總黃酮的含量。方法 以蘆丁含量為考察指標(biāo)，通過(guò)分光光度法對(duì)澤漆不同部位總黃酮含量進(jìn)行精密測(cè)定。結(jié)果 澤漆葉中總黃酮含量最高（29.6671 mg/g），根次之（13.1930 mg/g），莖最低（12.8009 mg/g）。結(jié)論 澤漆葉的總黃酮含量最高，利用價(jià)值最大。

澤漆；總黃酮；含量；不同部位；分光光度法

澤漆（Euphorbia helioscopia L），別名貓眼兒草，五燈頭，五朵云，五風(fēng)草，五鳳靈枝，一把傘，九頭獅子草，燈臺(tái)草，廯草，奶漿草等。主要生于山坡，荒野，田邊及河岸邊，分布于除新疆，西藏以外的全國(guó)各地，藥物資源較為豐富。澤漆主要化學(xué)成分含有二萜酯類(lèi)，黃酮類(lèi)，酚酸類(lèi)，三萜類(lèi)[1-4]，甾醇類(lèi)，多酚類(lèi)，氨基酸及天然油脂等物質(zhì)，并含有多種以槲皮素為苷元的黃酮苷。黃酮類(lèi)化合物是一類(lèi)生理活性較強(qiáng)的化合物[6-9]，且無(wú)毒無(wú)害，具有清除自由基、抗氧化、抗癌、抗菌、抗過(guò)敏、抗病毒等作用，近年來(lái)在醫(yī)療，食品等方面有著越來(lái)越重要的地位。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)澤漆中總黃酮含量測(cè)定，發(fā)現(xiàn)澤漆植物中黃酮類(lèi)化合物含量較高。

1 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器：KQ-100E型超聲波清洗器，721型可見(jiàn)分光光度計(jì)，F(xiàn)W80型高速萬(wàn)能粉碎機(jī)，DZKW-D型 星宇電熱恒溫水浴鍋，101-1型電熱恒溫干燥箱，微量分析天平（北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司），HZ-D循環(huán)水式真空泵，標(biāo)準(zhǔn)配套磨口玻璃儀器。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑：澤漆樣品于2012年5月采自河南（樣品經(jīng)風(fēng)干，粉碎，保存在塑料袋中備用），蘆丁對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品鑒定所），氫氧化鈉，亞硝酸鈉，硝酸鋁，乙醇等實(shí)驗(yàn)所用試劑均為分析純。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 黃酮的定性鑒別：依次做了紫外光下顯色反應(yīng)，濃氨水反應(yīng)，三氯化鋁反應(yīng)，乙酸鎂反應(yīng)，鹽酸-鎂粉反應(yīng)均顯陽(yáng)性反應(yīng)，可得出澤漆提取物中含有黃酮。

2.2 蘆丁對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制

2.2.1 對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：精密稱(chēng)量120 ℃干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品12.8 mg，置于50 mL干燥燒杯中，用60%乙醇溶液溶解，冷卻至室溫，并定容至100 mL的容量瓶中，振蕩均勻，則配制得到濃度為0.0128 mg/mL的蘆丁對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液，備用。

2.2.2 吸收波長(zhǎng)的確定：準(zhǔn)確量取蘆丁對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液1.00 mL置于10 mL容量瓶中，加入60%乙醇溶液4 mL，加入5%亞硝酸鈉溶液0.3 mL，放置5 min后，加入10%硝酸鋁溶液0.3 mL，放置5 min后，加入1 mol/L氫氧化鈉溶液4 mL，再用60%乙醇溶液定容。放置10 min后在400～600 nm波長(zhǎng)之間測(cè)定吸光度，確定最大吸收波長(zhǎng)為510 nm。2.2.3 蘆丁對(duì)照品溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制：精密量取蘆丁對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液0、1、2、3、4、5 mL分別置于6支10 mL容量瓶中，依次加入60%乙醇溶液 5、4、3、2、1、0 mL，各加入5%亞硝酸鈉溶液0.3 mL，搖蕩均勻，放置5 min后，各分別加入10%硝酸鋁溶液0.3 mL，搖蕩均勻，放置5 min后，各分別加入1 mol/L氫氧化鈉溶液4 mL，搖蕩均勻，最后用60%乙醇溶液定容。靜置10 min后于510 nm處測(cè)量吸光度，試劑1為空白參照液，以蘆丁對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（mg/mL），吸光度為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線(xiàn)性回歸分析，繪制蘆丁對(duì)照品溶液濃度與吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得到線(xiàn)性回歸方程：A=9.1406C-0.0007，R2=0.9999，說(shuō)明蘆丁對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與吸光度之間有良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.3 澤漆不同部位總黃酮的含量測(cè)定[10]

2.3.1 澤漆總黃酮的提?。阂砸掖既芤簼舛葹?0%，物料比為1∶25，提取時(shí)間20 min，提取溫度60 ℃為提取條件。精密稱(chēng)量澤漆根，莖，葉各3份，每份2.4 g，分別置于9個(gè)具塞錐形瓶中，分別加入60%乙醇溶液60 mL，稱(chēng)重，調(diào)節(jié)超聲清洗器溫度為60 ℃，提取20 min，補(bǔ)加60%乙醇至相同質(zhì)量，抽濾，分別得到根，莖，葉的提取液。

2.3.2 澤漆不同部位總黃酮含量的測(cè)定：精密吸取上述各提取溶液1 mL，置于10 mL容量瓶中，按照“2.2.3”實(shí)驗(yàn)步驟測(cè)定吸光度，每種提取液平行測(cè)定3次，計(jì)算不同部位總黃酮含量（%）。

2.4 實(shí)驗(yàn)方法考察

2.4.1 穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取1 mL超聲提取溶液，置于10 mL容量瓶中，按照“2.2.3”實(shí)驗(yàn)步驟測(cè)定吸光度，再在30、60、90、120、150 min之后測(cè)定吸光度。由一系列實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)得：吸光度的RSD值為1.04%，表明供試溶液在顯色后150 min之內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.2 重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批澤漆樣品細(xì)粉6份，每份2.4 g，分別按照“2.3.1”實(shí)驗(yàn)步驟得供試品溶液，分別精密吸取1 mL，置于10 mL容量瓶中，按照“2.2.3”實(shí)驗(yàn)步驟測(cè)定吸光度。由一系列實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)得：吸光度的RSD值為1.32%，表明實(shí)驗(yàn)重復(fù)性良好。

2.4.3 精密度試驗(yàn)：精密量取蘆丁對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液6份，各份1 mL，分別置于6支10 mL容量瓶中，按照“2.2.3”實(shí)驗(yàn)步驟測(cè)定吸光度。由一系列實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)得：吸光度的RSD值為0.98%，表明儀器精密度良好。

2.4.4 加樣回收試驗(yàn)：精密量取供試品溶液9份，每份1 mL，置于九支10 mL容量瓶中，再分別精密加入蘆丁對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，混勻。分別按照“2.2.3”實(shí)驗(yàn)步驟測(cè)定吸光度，計(jì)算總黃酮含量。加樣回收試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。

結(jié)果表明：平均回收率分別為102.84%、101.04%、98.53%，加樣回收率RSD分別為1.12%、0.98%、0.76%，加樣回收率良好，符合質(zhì)量分析要求。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

澤漆不同部位總黃酮含量測(cè)定結(jié)果，見(jiàn)表2。

4 討 論

4.1 超聲提取法提取澤漆總黃酮的實(shí)驗(yàn)方法簡(jiǎn)單、穩(wěn)定，有助于提高總黃酮的提取率，縮短提取時(shí)間，節(jié)省提取溶劑，因此，超聲提取法可作為澤漆中總黃酮開(kāi)發(fā)研究和質(zhì)量評(píng)價(jià)的方法。

表1 加樣回收試驗(yàn)

表2 澤漆不同部位總黃酮含量測(cè)定結(jié)果

4.2 采用分光光度法（比色法）測(cè)定澤漆中總黃酮含量具有科學(xué)，高效，準(zhǔn)確，快速，重現(xiàn)性較好，儀器便宜易得的特點(diǎn)。

4.3 澤漆中不同部位所含的天然黃酮類(lèi)化合物含量由大到小為葉、根、莖。為臨床用藥提供科學(xué)依據(jù)。

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[10] 楊帆,張軒.柿葉中總黃酮的鑒別與含量測(cè)定[J].中國(guó)醫(yī)藥指南, 2013,11(8):435-436.

醫(yī)學(xué)科技期刊中的代號(hào)與縮寫(xiě)

非各學(xué)科公認(rèn)的縮寫(xiě)首次出現(xiàn)時(shí)應(yīng)有全稱(chēng)（摘要及正文中首次出現(xiàn)的均應(yīng)有全稱(chēng)與英文全稱(chēng)及縮寫(xiě)對(duì)照）。常用的名詞術(shù)語(yǔ)統(tǒng)一如下：總蛋白TP，清蛋白Alb，白細(xì)胞WBC，紅細(xì)胞RBC，血紅蛋白Hb，肌酐Cr,三酰甘油TG，尿蛋白測(cè)定量UTP，尿糖US，等。

R282.710.2

：B

：1671-8194（2014）32-0061-02

河南中醫(yī)學(xué)院大學(xué)生創(chuàng)新學(xué)習(xí)項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào): YXCX [2012]5；CXXM[2012]04)