高效液相色譜法測定生骨散中柚皮苷的含量

趙明會 付凌燕 程曉英

(吉林省吉林市食品藥品檢驗所，吉林 132001)

生骨散是由骨碎樸、續(xù)斷、自然銅等16味中藥制成的散劑，具有益髓生骨、養(yǎng)血強筋，通經(jīng)止痛的作用[1]。用于 “骨蝕”中后期，肝腎不足所致的髖部疼痛，患肢活動不利明顯，肉萎筋縮，腰膝酸軟無力，健忘失眠，舌淡苔白，脈沉細(xì)；股骨頭壞死等骨病見上證候者[2]。該制劑無含量測定方法，不能有效控制成藥的質(zhì)量。骨碎補為此方中主藥，柚皮苷為骨碎補藥材主要活性成分，也是質(zhì)量控制常用的指標(biāo)性成分?，F(xiàn)采用實用、有效、普及的高效液相法測定柚皮苷的含量以提高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[3-5]，以便控制其質(zhì)量，給用藥提供保障，結(jié)果滿意，可供該制劑質(zhì)量控制參考。

1 儀器與試藥

島津LC-2010C高效液相色譜儀，包括 （配套的泵，柱溫箱，自動進樣器，紫外檢測器 （島津），CLASS-VP色譜工作站），Sartorius電子分析天平；柚皮苷對照品由中國藥品生物制品檢定所提供，批號為110722-200309（供含量測定用）；生骨散為醫(yī)院制劑樣品 （吉林市股骨頭壞死專科醫(yī)院，批號：20121101，20121102，20121103）。甲醇為色譜純；水為超純水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜 條件 Warters-C18柱 （250mm×4.6mm，5μm） 色譜柱；流動相為甲醇-水(33∶67)；流速 1．0mL·min-1；檢測波長283nm；柱溫25℃。在此條件下，柚皮苷峰形對稱，分離效果良好，陰性試驗無干擾。見圖1。

圖1生骨散HPLC色譜圖

2.2 對照品溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥12h后的柚皮苷對照品適量，加甲醇制成235μg·ml-1的對照品溶液；再加甲醇制成21.15μg·ml-1的對照品溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備 取生骨散8g，精密稱定，精密加入甲醇40ml，稱定重量，加熱回流3h，放冷后用甲醇補足減失的重量，濾液轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶中，加甲醇至刻度，取續(xù)濾液，即得[1]。

2.4 陰性樣品溶液的制備 依照 “2.3”項下制備缺骨碎補的陰性對照溶液。

2.5 線性 精密吸取柚皮苷對照品溶液 （濃度：235μg·ml-1） 3、 9、 15、 30、 45、 60ml， 分 別 置 于100ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，在上述色譜條件下各進樣10μl， 以濃度 （C）-峰面積 （A），回歸方程為： A=18988.62C-3969.52， r=1.0000 （n=6）。柚皮苷在 7.05～141.00μg·ml-1范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.6 穩(wěn)定性 取同一批樣品 （批號20121101）制備后的0、1、2、4、8、12h測定，按柚皮苷的峰面積計算，RSD=0.7% （n=6），柚皮苷對照品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7重復(fù)性 取同一批樣品 （批號20121101），按供試品溶液的制備方法分別制備共6份，進行測定，求得柚皮苷含量的RSD=0.8% （n=6），表明重復(fù)性較好。

2.8 精密度 取同一批樣品 （批號 20121101）10μl，按相同色譜條件，連續(xù)進樣5次測定， RSD=0.3%（n=5），表明精密度較好。

2.9 回收率 取同一批已知含量的生骨散 （批號20121101， 柚 皮 苷 含 量 103.37μg·g-1， 平 均 袋 重8.1151g·袋-1）粉末約8g，共9份，分別加入柚皮苷對照品溶液 （235μg·ml-1） 4ml、 6m l、 8ml各 3 份混勻后，按 “2.3供試品溶液的制備”方法制備樣品測定，結(jié)果見表1。

表1回收率試驗結(jié)果

2.10 樣品測定 取3個批號的樣品，經(jīng)2次平行測定，結(jié)果見表2。

表2生骨散含量測定結(jié)果

3 討論

流動相的選擇試驗中采用不同的流動相：甲醇-醋酸-水 （35∶4∶61）， 甲醇-水 （33∶67）， 因為前者含酸較高，對色譜柱有一定的損壞，洗脫條件易發(fā)生變化，故選用后者。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].2010年版.一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：239-240.

[2]吉林省食品藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療機構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn)JLZJ-ZB-0016-2006.

[3]王舒，王苗苗，呂述麗.高效液相色譜法測定紅寶散中歐前胡素的含量[J].中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠程教育，2013，8：149-150.

[4]付凌燕，李亞榮.高效液相色譜法測定救爾心膠囊中原兒茶醛含量[J].中國藥師，2010，15：30-31.

[5]付凌燕，趙明會，高效液相色譜法測定舒冠片中原兒茶醛的含量[J].中國藥師，2010，3：373-374.