推拿治療對(duì)急性軟組織損傷家兔血清神經(jīng)遞質(zhì)表達(dá)影響的研究①

王宇峰 叢德毓 高 輝 楚云杰 (長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，長(zhǎng)春 130021)

急性軟組織損傷是臨床上的常見(jiàn)病和多發(fā)病，中醫(yī)推拿療法是治療該病的主要療法，具有操作簡(jiǎn)便、療效確切等優(yōu)勢(shì)。本研究通過(guò)觀察推拿療法對(duì)急性軟組織損傷家兔血清中5-羥色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、去甲腎上腺素(NE)和β-內(nèi)啡肽(β-EP)表達(dá)水平的影響，旨在分析推拿治療急性軟組織損傷疼痛的作用機(jī)制，促進(jìn)推拿療法在急性軟組織損傷治療中的應(yīng)用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 大耳白家兔30 只，雌雄各半，體重2.0～3.0 kg，由長(zhǎng)春市億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限責(zé)任公司提供，動(dòng)物合格證號(hào):SCXK(吉)2012-0002。根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表，將家兔隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組和推拿治療組，每組各10 只。

1.1.2 儀器與試劑 NE 酶聯(lián)免疫試劑盒，5-HT 酶聯(lián)免疫試劑盒，DA 酶聯(lián)免疫試劑盒，β-EP 酶聯(lián)免疫試劑盒(美國(guó)R＆D Systems Inc.公司);賀利氏臺(tái)式離心機(jī)(德國(guó)賀利氏公司);酶標(biāo)儀(美國(guó)伯樂(lè)公司);MP120-1 型電子天平(上海第二天平儀器廠);FSH-ZA 型可調(diào)高速勻漿機(jī)(江蘇省金壇縣望華科教儀器廠);78-1 型電熱恒溫培養(yǎng)箱(湖北省黃石市醫(yī)療器械廠)。

1.2 方法

1.2.1 造模方法 采用重物懸空墜落沖擊法［1］，建立急性軟組織損傷家兔模型，具體操作如下:實(shí)驗(yàn)前用電動(dòng)推剃除家兔右側(cè)臀部背毛，剃毛面積約5 cm × 5 cm。將動(dòng)物左側(cè)臥位固定于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，充分暴露脫毛區(qū)域，在動(dòng)物臀部肌肉最豐滿的股二頭肌處標(biāo)記。用長(zhǎng)60 cm、直徑4 cm 不銹鋼導(dǎo)管的一端垂直對(duì)準(zhǔn)標(biāo)記部位，從導(dǎo)管另一端將重量為250 g的金屬重物沿導(dǎo)管呈自由落體落下，連續(xù)打擊6 次。損傷區(qū)域面積約3 cm × 3 cm，損傷后局部皮膚無(wú)破損，損傷區(qū)域明顯腫脹、瘀血，表明已完成該部位的急性軟組織損傷模型。

1.2.2 干預(yù)方法 (1)空白對(duì)照組:不予以任何處置，僅作對(duì)照觀察;(2)模型對(duì)照組:造模成功后，不予以任何處置，僅作對(duì)照觀察;(3)推拿治療組:造模成功后恢復(fù)24 h，予以推拿手法治療，具體操作如下:①三指摩法:食指、中指、無(wú)名指3 個(gè)手指自然伸直并攏，以3 個(gè)手指的指腹附著于家兔受傷的軟組織周?chē)捎幂p柔的逆時(shí)針摩法，頻率為120 次/min，共操作5 min。②拇指推法:以拇指指腹附著于家兔傷側(cè)臀部，沿著家兔臀部的肌肉走形方向，施以拇指平推法，頻率為60 次/min，共操作5 min。③大魚(yú)際揉法:在家兔傷側(cè)的臀部，施以大魚(yú)際揉法，頻率為120 次/min，共操作5 min。上述治療15 min/次，1次/d，連續(xù)治療3 d。

1.2.3 標(biāo)本采集與測(cè)定 分別在造模24 h 后，第1次推拿治療后30 min，以及第3 次推拿治療后30 min，對(duì)各組家兔進(jìn)行耳緣靜脈采血，采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定家兔血清中5-HT、DA、NE 和β-EP的表達(dá)水平，具體檢測(cè)方法按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用±s 表示，組間比較采用t 檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 推拿對(duì)急性軟組織損傷家兔血清中5-HT 表達(dá)水平的影響 造模24 h 后，模型對(duì)照組家兔血清中5-HT 的表達(dá)水平顯著升高，與空白對(duì)照組比較具有顯著性差異(P＜0.001);在第1 次推拿治療后30 min 和第3 次治療后30 min，推拿治療組家兔血清中5-HT 的表達(dá)水平明顯降低，與模型對(duì)照組比較均具有顯著性差異(P＜0.01)，見(jiàn)表1。

2.2 推拿對(duì)急性軟組織損傷家兔血清中DA 表達(dá)水平的影響 造模24 h 后，模型對(duì)照組家兔血清中DA 的表達(dá)水平明顯升高，與空白對(duì)照組比較具有顯著性差異(P＜0.001);在第1 次推拿治療后30 min 和第3 次治療后30 min，推拿治療組家兔血清中DA 的表達(dá)水平明顯降低，與模型對(duì)照組比較均具有顯著性差異(P＜0.001)，見(jiàn)表2。

2.3 推拿對(duì)急性軟組織損傷家兔血清中NE 表達(dá)水平的影響 造模24 h 后，模型對(duì)照組家兔血清中NE 的表達(dá)水平明顯升高，與空白對(duì)照組比較具有顯著性差異(P＜0.001);在第1 次推拿治療后30 min和第3 次治療后30 min，推拿治療組家兔血清中NE的表達(dá)水平明顯降低，與模型對(duì)照組比較均具有顯著性差異(P＜0.01 和P＜0.001)，見(jiàn)表3。

表1 推拿對(duì)急性軟組織損傷家兔血清中5-HT 表達(dá)水平的影響(ng/ml，±s，n=10)Tab.1 Massage of acute soft tissue injury were investi-gated effects of 5-HT expression level in serum(ng/ml，±s，n=10)

表1 推拿對(duì)急性軟組織損傷家兔血清中5-HT 表達(dá)水平的影響(ng/ml，±s，n=10)Tab.1 Massage of acute soft tissue injury were investi-gated effects of 5-HT expression level in serum(ng/ml，±s，n=10)

Note:Compared with model control group，1)P＜0.01，2)P＜0.001.

表2 推拿對(duì)急性軟組織損傷家兔血清中DA 表達(dá)水平的影響(nmol/l，±s，n=10)Tab.2 Massage for acute soft tissue injury in rabbit serum DA expression level of influence(nmol/L ±s，n=10)

表2 推拿對(duì)急性軟組織損傷家兔血清中DA 表達(dá)水平的影響(nmol/l，±s，n=10)Tab.2 Massage for acute soft tissue injury in rabbit serum DA expression level of influence(nmol/L ±s，n=10)

Note:Compared with model control group，1)P＜0.001.

表3 推拿對(duì)急性軟組織損傷家兔血清中NE 表達(dá)水平的影響(ng/ml，±s，n=10)Tab.3 Massage for acute soft tissue injury in rabbit serumNE expression level influence(ng/ml，±s，n=10)

表3 推拿對(duì)急性軟組織損傷家兔血清中NE 表達(dá)水平的影響(ng/ml，±s，n=10)Tab.3 Massage for acute soft tissue injury in rabbit serumNE expression level influence(ng/ml，±s，n=10)

Note:Compared with model control group，1)P＜0.01，2)P＜0.001.

表4 推拿對(duì)急性軟組織損傷家兔血清中β-EP 表達(dá)水平的影響(nmol/l，±s，n=10)Tab.4 Massage for acute soft tissue injury in rabbit serum β-EP expression level of influence (nmol/L，±s，n=10)

表4 推拿對(duì)急性軟組織損傷家兔血清中β-EP 表達(dá)水平的影響(nmol/l，±s，n=10)Tab.4 Massage for acute soft tissue injury in rabbit serum β-EP expression level of influence (nmol/L，±s，n=10)

Note:Compared with model control group，1)P＜0.05，2)P＜0.01，3)P＜0.001.

2.4 推拿對(duì)急性軟組織損傷家兔血清中β-EP 表達(dá)水平的影響 造模24 h 后，模型對(duì)照組家兔血清中β-EP 的表達(dá)水平明顯降低，與空白對(duì)照組比較具有顯著性差異(P＜0.001);在第1 次推拿治療后30 min和第3 次治療后30 min，推拿治療組家兔血清中β-EP 的表達(dá)水平明顯升高，與模型對(duì)照組比較均具有顯著性差異(P＜0.001 和P＜0.05)，見(jiàn)表4。

3 討論

急性軟組織損傷多由外力作用于機(jī)體所致，造成損傷部位細(xì)胞變性壞死，正常的血液循環(huán)遭到破壞，引起急性無(wú)菌性炎癥［2］，局部出現(xiàn)腫脹及疼痛。推拿療法具有促進(jìn)局部毛細(xì)血管擴(kuò)張，改善血液循環(huán)和組織營(yíng)養(yǎng)，促進(jìn)肌肉的正常代謝，而起到止痛的作用。相關(guān)研究顯示，推拿療法具有明顯改善微循環(huán)障礙的作用［3］;還能促進(jìn)局部的血液循環(huán)，加快局部病理產(chǎn)物的吸收［4］。

5-HT、DA、NE 和β-EP 等均屬于重要的神經(jīng)遞質(zhì)，與疼痛的發(fā)生關(guān)系密切。近年來(lái)，隨著推拿學(xué)科的發(fā)展進(jìn)步，有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)5-HT、DA 在推拿鎮(zhèn)痛的過(guò)程中發(fā)揮了重要的作用［5，6］。本研究發(fā)現(xiàn):①5-HT、DA、NE 和β-EP 等神經(jīng)遞質(zhì)與軟組織損傷關(guān)系密切，在導(dǎo)致急性軟組織損傷家兔疼痛的過(guò)程中具有重要作用;②推拿療法對(duì)5-HT、DA、NE和β-EP 等神經(jīng)遞質(zhì)具有良好的調(diào)整作用，可以通過(guò)調(diào)節(jié)5-HT、DA、NE 和β-EP 的表達(dá)水平而發(fā)揮其鎮(zhèn)痛作用。本研究初步揭示了推拿治療急性軟組織損傷疼痛的作用機(jī)制，并為推拿療法在急性軟組織損傷臨床治療中的應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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