注射用培美曲塞二鈉與0.9%氯化鈉注射液及不同pH的5%葡萄糖注射液的配伍穩(wěn)定性考察

李博樂，鄭 雙，魏 淳，王 晨#（.天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院藥學(xué)部/國家腫瘤臨床醫(yī)學(xué)研究中心/天津市腫瘤防治重點實驗室，天津 300060；.天津醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，天津 300070）

培美曲塞是一種多靶點葉酸拮抗藥，目前已批準(zhǔn)用于治療非小細(xì)胞肺癌和惡性胸膜間皮瘤，臨床應(yīng)用廣泛。該藥屬于細(xì)胞周期特異性抗代謝藥，作用機制主要是抑制細(xì)胞胸腺嘧啶核苷酸及嘌呤核苷酸生物合成的關(guān)鍵性葉酸依賴性酶，從而殺傷S 期細(xì)胞，與很多藥物聯(lián)用具有協(xié)同細(xì)胞毒作用[1]。臨床上該藥多在靜脈藥物配置中心（PIVAS）配伍，從配伍到使用有一定時間間隔，如配伍不當(dāng)，會產(chǎn)生一些不良反應(yīng)，造成毒副作用增加，因此，研究該藥的配伍穩(wěn)定性十分有意義。目前，PIVAS多將培美曲塞與說明書建議采用的0.9%氯化鈉注射液進行配伍。本文在研究該藥與0.9%氯化鈉注射液配伍穩(wěn)定性基礎(chǔ)上，為打破生理鹽水易誘發(fā)心、腎功能不全患者產(chǎn)生心力衰竭或高鈉血癥的限制，擴大該藥的應(yīng)用范圍，研究了不同溫度、不同光照條件下，該藥與不同pH[2]的5%葡萄糖注射液的配伍穩(wěn)定性（未見文獻報道），為臨床合理用藥提供實驗依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

LC-20AB 高效液相色譜系統(tǒng)，包括SPD-20A 紫外檢測器（日本Shimadzu公司）；GWJ-4型智能微粒檢測儀（天大天發(fā)科技有限公司）；W-DA型藥物穩(wěn)定性檢查儀（天津藥典標(biāo)準(zhǔn)儀器廠）；DELTA-320pH 計（瑞士Mettler-Toledo 公司）；FAI604S 電子天平（德國Sartorius公司）。

1.2 藥品與試劑

培美曲塞二鈉對照品（江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司，批號：40880RS100621）；注射用培美曲塞二鈉（江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司，批號：101101）；0.9%氯化鈉注射液（中國大冢制藥有限公司，規(guī)格：500 ml，批號：OJ77F5）；5%葡萄糖注射液（中國大冢制藥有限公司，規(guī)格：500 ml，批號：110615）；甲醇為色譜純，其他試劑為分析純。

2 方法

2.1 試驗溶液的配制

2.1.1 對照品溶液。準(zhǔn)確稱取培美曲塞二鈉對照品10.00 mg，置于100 ml 量瓶中，加入流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，得0.1 mg/ml 的對照品貯備液。精密量取貯備液5 ml 置于50 ml量瓶中，加流動相稀釋定容，即得0.01 mg/ml的對照品溶液。

2.1.2 供試品溶液。準(zhǔn)確稱取注射用培美曲塞二鈉10.34 mg（含10 mg 培美曲塞二鈉）3 份，置于100 ml 量瓶中，分別加入pH 6.12的0.9%氯化鈉注射液、pH 4.76的5%葡萄糖注射液及用標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉滴定液調(diào)節(jié)pH至6.50的5%葡萄糖注射液溶解并稀釋至刻度，搖勻，得0.1 mg/ml的供試品貯備液。精密量取貯備液5 ml 置于50 ml 量瓶中，分別加上述溶液稀釋定容，即得0.01 mg/ml的3份供試品溶液。

2.2 檢測波長的選擇

取0.01 mg/ml培美曲塞二鈉對照品溶液，以流動相作為空白對照，在190～400 nm 波長范圍內(nèi)進行紫外掃描。結(jié)果顯示，培美曲塞二鈉在225 nm 波長處有最大吸收，確定225 nm為檢測波長。

2.3 色譜條件[3]

色譜柱：Hypersil GOLD aQ（250 nm×4.6 nm，5 μm）；流動相：0.01 mol/L 磷酸二氫鈉溶液（用磷酸調(diào)至pH 4.0）-甲醇（7∶3）；流速：1.0 ml/min；柱溫：27 ℃；進樣量：20 μl；檢測波長：225 nm。

2.4 專屬性試驗

取“2.1.1”項下的0.01 mg/ml 對照品溶液，分別加入pH 6.12 的0.9%氯化鈉注射液、pH 4.76 及pH 6.50 的5%葡萄糖注射液適量，按“2.3”項下色譜條件，分別進樣20 μl測定，結(jié)果顯示在此色譜條件下，培美曲塞與其他物質(zhì)分離度良好，無雜質(zhì)干擾。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

分別精密量取適當(dāng)體積對照品貯備液至10 ml量瓶中，以流動相定容后混合均勻，得到對照品質(zhì)量濃度分別為0.008、0.010、0.012、0.014、0.02 mg/ml 的系列溶液。每種質(zhì)量濃度溶液進樣3次，每次進樣20 μl，計算平均值。以培美曲塞二鈉對照品的質(zhì)量濃度（c）對峰面積（A）進行線性回歸，得回歸方程為A＝72 560 165c－39 882.11（r＝0.999 9，n＝3）。結(jié)果表明，培美曲塞二鈉檢測質(zhì)量濃度在0.008～0.02 mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗

取0.010 mg/ml 的培美曲塞二鈉對照品溶液連續(xù)進樣6次[4]，測定峰面積，RSD＝0.75%，表明精密度良好。

2.7 加樣回收率試驗

準(zhǔn)確稱取培美曲塞二鈉樣品適量，按“2.1.2”項下方法分別溶于0.9%氯化鈉注射液（pH 6.12）、5%葡萄糖注射液（pH 4.76及pH 6.50）制成質(zhì)量濃度為0.01 mg/ml 的培美曲塞二鈉樣品溶液各9份，每份10 ml；分別加入0.008、0.010、0.012 mg/ml 的培美曲塞二鈉對照品溶液各10 ml，作為80%、100%、120%3個質(zhì)量濃度的加樣回收率測試液，依法測定。結(jié)果顯示，回收率在98%～102%范圍內(nèi)，RSD 均小于2%，表明本方法回收率符合規(guī)定，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果（n＝3）Tab 1 Results of recovery tests（n＝3）

2.8 配伍穩(wěn)定性考察

采用臨床常用濃度配制方法，準(zhǔn)確稱取注射用培美曲塞二鈉樣品適量，置于10 ml 量瓶中定容配制為2 mg/ml 的配伍液若干份，定容溶液分別采用0.9%氯化鈉注射液（pH 6.12），5%葡萄糖注射液（pH 4.76）、5%葡萄糖注射液（pH 6.50）。配伍液分別在下列條件中放置：25 ℃光照條件、25 ℃避光條件、40 ℃光照條件、40 ℃避光條件。每種條件下均用上述3 種溶液進行定容，平行配制3 份（n＝3）。在0、1、2、4、6、8、24、48 h分別檢查外觀，測定pH、不溶性微粒數(shù)及主藥含量。

3 結(jié)果

3.1 外觀

取潔凈的20 ml具塞比色管若干支，分別加入上述配伍液各15 ml，在上述時間點分別檢查外觀變化。結(jié)果顯示，48 h內(nèi)，4 種放置條件下各配伍液均呈無色、澄清、透明，無沉淀生成和顏色變化。

3.2 pH

取各配伍液在上述時間點測定pH，結(jié)果顯示，培美曲塞二鈉與0.9%氯化鈉注射液（pH 6.12）組成的配伍液pH 在0～6 h無明顯變化，在＞6～8 h內(nèi)pH有所降低，＞8～48 h內(nèi)pH明顯降低，4種放置條件下8 h相對0 h pH分別降低1.83%、2.81%、3.00%、2.84%；該藥與5%葡萄糖注射液（pH 4.76）組成的配伍液pH 在0～8 h 無明顯變化，在24～48 h 內(nèi)pH 有所降低，4種放置條件下24 h 相對0 h pH 分別降低0.88%、1.77%、2.30%、3.52%；該藥與5%葡萄糖注射液（pH 6.50）的配伍液pH在0～6 h無明顯變化，在＞6～8 h內(nèi)pH有所降低，＞8～48 h 內(nèi)pH 明顯降低，4 種放置條件下8 h 相對0 h pH 分別降低3.62%、3.15%、5.02%、6.70%，結(jié)果見表2。

3.3 不溶性微粒

取各配伍液在上述時間點按《中國藥典》（2010年版）[4]微粒檢測法中的光阻法檢查微粒，結(jié)果顯示，不溶性微粒在48 h內(nèi)符合《中國藥典》相關(guān)規(guī)定。

3.4 含量測定

取上述配伍液，分別稀釋200 倍，按“2.3”項下色譜條件，分別進樣，記錄峰面積，以0 h 時含量為100%，觀察不同時間點各配伍液中主藥的百分含量。結(jié)果顯示，培美曲塞二鈉與0.9%氯化鈉注射液組成的配伍液相對百分含量0～8 h無明顯變化，各條件下8 h相對0 h含量變化均＜2%；而24 h相對0 h已有含量變化超過2%的配伍液；24 h 4種放置條件下含量分別相對升高1.85%、2.23%、1.33%、2.30%。而該藥與pH 4.76的5%葡萄糖注射液組成的配伍液同樣在0～8 h無明顯變化，各條件下8 h相對0 h含量變化均＜2%；而24 h相對0 h的含量變化除25 ℃光照條件下，其余均超過2%；24 h 4種放置條件下分別含量相對升高1.96%、2.57%、2.16%、2.55%。該藥與pH 6.50的5%葡萄糖注射液組成的配伍液在0～24 h 內(nèi)無明顯變化，＞24～48 h相對百分含量變化超過2%；48 h 4種放置條件下，相對0 h含量分別升高2.51%、3.16%、2.15%、2.65%，見表3。

表2 不同條件下注射用培美曲塞二鈉與不同注射液組成的配伍液pH值Tab 2 pH value of Pemetrexed disodium for injection in different solutions under different conditions

表3 不同配伍液中培美曲塞二鈉的相對百分含量（n＝3）Tab 3 The relative contents of pemetrexed disodium in different solution（n＝3）

4 討論

4.1 培美曲塞二鈉在配伍液中的pH變化

該藥本身的pH約為6.6～7.8，其與pH 6.12的0.9%氯化鈉注射液、pH 4.76 和pH 6.50 的5%葡萄糖注射液組成的3 種配伍液pH 在0～6 h 無明顯變化；而在＞6～48 h pH 都發(fā)生了不同程度的降低，其原因可能為空氣中CO2在溶液中溶解有關(guān)。同時，40 ℃條件下配伍液pH降低的程度較25 ℃條件下大，其原因可能為40 ℃條件使培美曲塞二鈉結(jié)構(gòu)中弱堿性的酰胺鍵斷裂導(dǎo)致pH下降。

4.2 培美曲塞二鈉在配伍液中的相對百分含量變化

該藥與pH 6.12 的0.9%氯化鈉注射液、pH 4.76 和6.50 的5%葡萄糖注射液組成的3 種配伍液中培美曲塞二鈉的相對百分含量在0～8 h 無明顯變化；而在＞8～48 h 都發(fā)生了不同程度的升高，可能歸因于培美曲塞二鈉的結(jié)構(gòu)中嘧啶環(huán)和吡咯環(huán)上的胺基給出電子，易被氧化，可能發(fā)生聚合反應(yīng)而使含量略有上升，具體原因有待考察。而該藥與pH 6.50 的5%葡萄糖注射液組成的配伍液在24 h相對百分含量的變化較另外兩種配伍液小，可能與該pH下上述結(jié)構(gòu)中的胺基給出電子難易程度增加有關(guān)。

4.3 培美曲塞二鈉在配伍液中的外觀檢查與不溶性微粒檢查

該藥與上述3種注射液組成的配伍液在4種放置條件下，各配伍液均呈無色、澄清、透明，無沉淀生成和顏色變化，證明該藥與pH 6.12 的0.9%氯化鈉注射液，pH 4.76 和pH 6.50 的5%葡萄糖注射液組成的3 種配伍液無光敏性。同時，不同配伍液中微粒數(shù)符合《中國藥典》（2010年版）相關(guān)規(guī)定。

綜上所述，該藥與pH 6.12的0.9%氯化鈉注射液、pH 4.76和pH 6.50 的5%葡萄糖注射液組成的3 種配伍液在6 h 內(nèi)穩(wěn)定，外觀、pH、不溶性微粒、相對含量等均符合《中國藥典》（2010年版）規(guī)定，證實該藥從配置完成到臨床使用，不應(yīng)超過該時間范圍。建議廠家在有其他安全性試驗基礎(chǔ)上可增加該藥與葡萄糖注射液的配伍應(yīng)用。另外，pH 6.50為《中國藥典》（2010年版）規(guī)定葡萄糖注射液pH的上限，在本試驗中是人為調(diào)節(jié)的pH，為利于提高輸液安全性，該pH 條件下試驗數(shù)據(jù)為其他研究提供參考。

[1]李軍，徐向英.培美曲塞在非小細(xì)胞肺癌治療中的應(yīng)用[J].國際腫瘤學(xué)雜志，2013，40（2）：123.

[2]盛紅彬.氨芐西林鈉在不同pH值5%葡萄糖注射液中穩(wěn)定性研究[J].中南藥學(xué)，2011，13（8）：587.

[3]賈佳，劉冬.高效液相色譜法測定注射用培美曲塞二鈉的含量[J].醫(yī)藥導(dǎo)報，2010，29（8）：1 080.

[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄ⅨC、ⅪⅩA.