不同促透劑對(duì)人參皂苷Rg1體外透皮吸收的影響

韓 莉，王 平，劉善新，蘇 酩，孫 虎

（山東省中醫(yī)藥研究院，山東濟(jì)南250014）

·制劑研究·

不同促透劑對(duì)人參皂苷Rg1體外透皮吸收的影響

韓 莉，王 平，劉善新，蘇 酩，孫 虎

（山東省中醫(yī)藥研究院，山東濟(jì)南250014）

目的通過(guò)小鼠體外透皮實(shí)驗(yàn)，探討不同促透劑對(duì)人參皂苷Rg1體外透皮吸收的影響，確定最佳促透劑，為研制新型透皮吸收制劑奠定基礎(chǔ)。方法采用改良Franz擴(kuò)散池法，以離體小鼠皮膚為透皮屏障，以生理鹽水為接受介質(zhì)，加入不同促透劑制備藥液樣品，以人參皂苷Rg1為定量指標(biāo)成分進(jìn)行體外透皮吸收檢測(cè)，考察人參皂苷Rg1累計(jì)透過(guò)量。結(jié)果無(wú)促透劑條件下，人參皂苷Rg1未能透過(guò)；單一促透劑中以7%丙二醇效果最好，7%氮酮效果次之，冰片促透作用較??；復(fù)合促透劑中，氮酮＋丙二醇組各濃度下累計(jì)透過(guò)量接近，氮酮＋冰片組以兩者質(zhì)量濃度各為2.5%效果較好。結(jié)論常用促透劑丙二醇、氮酮、冰片均可增加藥物中人參皂苷Rg1的透皮吸收量，其中，7%丙二醇為最佳促透劑。

人參皂苷Rg1；體外透皮吸收；促透劑

人參皂苷Rg1是傳統(tǒng)中藥三七、人參等的主要有效成分之一，具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值?，F(xiàn)代研究表明，人參皂苷Rg1具有多種藥理活性：可促進(jìn)細(xì)胞的增殖和分化［1］，減少糖皮質(zhì)激素的副作用［2］，抗疲勞、耐缺氧、增強(qiáng)記憶力［3］，提高人體免疫功能［4］，對(duì)炎癥性疾病具有強(qiáng)大的干預(yù)能力等。雖然目前人參皂苷有多種劑型，但經(jīng)皮吸收制劑較少，其外用劑型的研究成為國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。

人參皂苷Rg1相對(duì)分子質(zhì)量較大（801.01），易溶于水（在水中溶解度為19.16 mg·mL－1）、甲醇、乙醇，略溶于乙酸乙酯及氯仿，不溶于乙醚、苯，其結(jié)構(gòu)為四環(huán)三萜類衍生物，親脂性不強(qiáng)，油水分配系數(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于1［5，6］。根據(jù)現(xiàn)代藥劑學(xué)研究，這種結(jié)構(gòu)的分子屬于不易透皮吸收的類型［6］。但是，人參皂苷Rg1在表皮的擴(kuò)散系數(shù)比較高，在表皮內(nèi)具有優(yōu)良的水溶性。Peng LH等［7］研究發(fā)現(xiàn)了一種新型的用于骨折愈合的外用膏劑（FH），透皮起效的主要成分為人參皂苷Rg1以及大黃素，這就顯示了人參皂苷Rg1透皮給藥的可能性。我們?cè)O(shè)想可以通過(guò)相應(yīng)的促透劑增加人參皂苷Rg1透皮性。

透皮給藥系統(tǒng)（transdermal thrapeutic systems，TTS）系指在皮膚表面給藥，使藥物以恒速通過(guò)皮膚，進(jìn)入體循環(huán)產(chǎn)生全身或局部治療作用的新劑型［6］。藥物透皮吸收受多種因素影響：皮膚條件、藥物劑量和濃度、藥物分子大小、脂溶性、輔料組成與性質(zhì)等。促透劑（penetration enhancers）是TTS的重要組成部分，能夠滲透進(jìn)入皮膚降低藥物通過(guò)皮膚阻力、降低皮膚的屏障性能，加速藥物穿透皮膚。常用促透劑主要有三種：氮酮［8］、丙二醇、冰片。在制劑過(guò)程中促透劑的選取是影響藥物透皮吸收及治療作用的最為關(guān)鍵的因素［9～12］。本課題擬人參皂苷Rg1中加入不同促透劑制備藥液樣品，以人參皂苷Rg1為定量指標(biāo)成分進(jìn)行體外透皮吸收檢測(cè)，通過(guò)累積滲透液中人參皂苷Rg1的考察，確定最佳的促透劑，有效提高藥物透過(guò)率，為研制新型透皮吸收制劑打下基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters e2695高效液相色譜儀（美國(guó)Waters公司）；Waters 996二極管陣列檢測(cè)器（美國(guó)Waters公司）；BP 211D電子分析天平（北京賽多利斯儀器有限公司）；LC－350A超聲波中藥處理機(jī)；改良型Franz擴(kuò)散池（自制）；JB－3型定時(shí)恒溫磁力攪拌器（上海雷磁儀器廠新涇分廠）；數(shù)顯電子恒溫水浴鍋HH－4（江蘇金壇市晶玻實(shí)驗(yàn)儀器廠）。

1.2 試藥 人參皂苷Rg1對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：07452200007）；人參皂苷Rg1（玉溪維和生物科技有限責(zé)任公司，批號(hào)：20130111）；氯化鈉注射液0.9%（辰新藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：1212278208）；氮酮（分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠，批號(hào)：20111116）；1，2－丙二醇（分析純，天津市廣成化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20110215）；冰片（百味堂飲片有限公司，批號(hào)：130401）；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康KM小鼠，雌雄各半，購(gòu)自山東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號(hào)：魯動(dòng)質(zhì)scxk（魯）20090001號(hào)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18柱（4.6 mm ×150 mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈（B）－水（A），梯度洗脫；梯度洗脫：0～12 min，B：20%～36%；流速：1.0 mL·min－1；檢測(cè)波長(zhǎng)：203 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μL；人參皂苷Rg1的保留時(shí)間約為11 min。

2.2 離體鼠皮的制備 取體重為（20±2）g的昆明種雄性小鼠，剃去腹背部皮膚的毛，處死，剪下皮膚，用棉棒輕輕刮去皮下組織至皮膚呈表面光滑，半透明狀，用蒸餾水反復(fù)洗凈，再用生理鹽水漂洗后使用。

2.3 透皮吸收裝置準(zhǔn)備 透皮吸收擴(kuò)散裝置模擬Kenhary－chien改進(jìn)型Franz擴(kuò)散池，由上下兩筒狀玻璃筒對(duì)合而成，夾于玻璃桶間的皮膚將其分成上下兩室，上室為供藥室，下室為接受室。

2.4 離體透皮實(shí)驗(yàn)

2.4.1 模型制備 取自制改良Franz擴(kuò)散池（接受池體積為18.0 mL，接受池有效接觸面積為2.54 cm2），接受室注滿0.9%生理鹽水，并加入1枚轉(zhuǎn)子。將處理后的離體小鼠皮膚固定在頂蓋和接收室之間，使皮膚內(nèi)層恰接觸接受液。將Franz擴(kuò)散池置于恒溫磁力攪拌器上，供藥室加入定量供試品，給藥時(shí)間為18 h。

2.4.2 接受液的處理 棄去供藥室殘余藥液，從取樣口收集接受液，同種藥物組的接受液合并于同一蒸發(fā)皿，水浴加熱蒸干后以甲醇溶解，溶液轉(zhuǎn)至另一潔凈干燥的蒸發(fā)皿中，水浴加熱蒸干。蒸干物以甲醇定容至1 mL，用0.22μm濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液進(jìn)樣，每次10μL，HPLC法測(cè)定人參皂苷Rg1的含量，記錄峰面積，計(jì)算累積透過(guò)量。

2.5 人參皂苷Rg1滲透量測(cè)定

2.5.1 對(duì)照品的制備 取人參皂苷Rg1對(duì)照品，加甲醇溶解制成1 mL含人參皂苷Rg10.228 mg對(duì)照品液。

2.5.2 線性關(guān)系的考察 分別取上述對(duì)照品溶液稀釋成系列濃度6.84、34.2、57.0、79.8、114μg·mL－1的溶液，進(jìn)樣分析。以峰面積對(duì)人參皂苷Rg1濃度進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y＝3 411.1X－5 113.2，R＝0.999 6，人參皂苷Rg1在6.84～114μg·mL－1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5.3 最低檢測(cè)限測(cè)定 用甲醇將對(duì)照品溶液逐級(jí)稀釋，進(jìn)樣10μL分析，人參皂苷Rg1的最低檢測(cè)限為1.72 ng（S／N＝3）。

2.5.4 精密度試驗(yàn) 取濃度為79.8μg·mL－1的上述人參皂苷Rg1對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積，連續(xù)測(cè)定5次，每次進(jìn)樣10μL。結(jié)果表明峰面積RSD＝1.58%，此含量測(cè)定方法精密度良好。

2.5.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液（7%丙二醇促透的供試液），按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積，每隔3 h進(jìn)樣測(cè)定，每次進(jìn)樣10μL。結(jié)果表明，樣品溶液18 h內(nèi)無(wú)明顯變化，峰面積RSD＝1.97%，此含量測(cè)定方法具良好的穩(wěn)定性。

2.5.6 回收率試驗(yàn) 取生理鹽水5份，每份54 mL，分別加入濃度為228μg·mL－1的人參皂苷Rg1對(duì)照品溶液0.7 mL，水浴加熱蒸干，蒸干物以甲醇溶解定容至1 mL，制成回收率試驗(yàn)液，用0.22μm濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液進(jìn)樣，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積，每次進(jìn)樣10μL。記錄峰面積，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率結(jié)果

2.5.7 缺人參皂苷Rg1空白試驗(yàn) 缺人參皂苷Rg1空白透皮吸收溶液的制備：取不同促透劑配制成缺人參皂苷Rg1空白透皮吸收溶液如下：

①氮酮水溶液：稱取氮酮0.53 g，加入10 mL蒸餾水溶解，混勻；②丙二醇水溶液：稱取丙二醇0.54 g，加入10 mL蒸餾水溶解，混勻；③冰片醇溶液：稱取冰片0.20 g，滴加50%乙醇至20 mL，混勻，水浴加熱至完全溶解，靜置冷卻至室溫，備用；④氮酮＋丙二醇溶液：分別取5%氮酮水溶液、5%丙二醇水溶液等量，按1∶1混合均勻，即得；⑤氮酮＋冰片溶液：分別取上述5%氮酮水溶液、上述冰片醇溶液等量，混合均勻，即得。

缺人參皂苷Rg1空白試驗(yàn)：按照“2.4”項(xiàng)下離體透皮實(shí)驗(yàn)進(jìn)行操作，分別在供藥室加入缺人參皂苷Rg1空白透皮吸收溶液：氮酮水溶液、丙二醇水溶液、冰片醇溶液、氮酮與丙二醇的混合液及氮酮與冰片的混合液。透皮后按上述方法處理進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果缺人參皂苷Rg1空白透皮吸收溶液均無(wú)干擾，見(jiàn)圖1。

圖1 空白實(shí)驗(yàn)HPLC圖

2.6 透皮吸收實(shí)驗(yàn)

2.6.1 人參皂苷Rg1對(duì)照透皮吸收實(shí)驗(yàn) 精密稱取人參皂苷Rg1藥品（玉溪維和生物科技有限責(zé)任公司）0.315 0 g，加純凈水至7.00 g。得人參皂苷Rg1濃度為45 mg·g－1的溶液。按照“2.4”項(xiàng)下離體透皮實(shí)驗(yàn)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，無(wú)吸收峰，累計(jì)透過(guò)量為0。

2.6.2 人參皂苷Rg1促透透皮吸收實(shí)驗(yàn) 取人參皂苷Rg1藥品（玉溪維和生物科技有限責(zé)任公司）0.315 0 g，分別加入不同促透劑，精制藥液樣品：分別含促透劑氮酮（3%、5%、7%、10%）、丙二醇（3%、5%、7%、10%），冰片（3%、5%、7%），氮酮＋丙二醇（3%、5%、7%），氮酮＋冰片（3%、5%、7%），以純凈水補(bǔ)足7.00 g。得人參皂苷Rg1濃度為45 mg·g－1的溶液。

按照“2.4”項(xiàng)下離體透皮實(shí)驗(yàn)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，分別將配好的人參皂苷Rg1對(duì)照透皮吸收藥液、人參皂苷Rg1透皮吸收藥注入供藥室，以空白試驗(yàn)相同方法進(jìn)行藥物實(shí)驗(yàn)。藥物累計(jì)透過(guò)量結(jié)果見(jiàn)表2、3。

表2 單一促透劑實(shí)驗(yàn)組累計(jì)透過(guò)量

表3 復(fù)合促透劑實(shí)驗(yàn)組累計(jì)透過(guò)量

由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，不添加任何促透劑的情況下，人參皂苷Rg1自身無(wú)法透過(guò)皮膚，無(wú)從進(jìn)入體內(nèi)發(fā)揮療效。加入促透劑后，透皮吸收情況能夠得到很好的改善。據(jù)表2單一促透劑組數(shù)據(jù)顯示，試驗(yàn)范圍內(nèi)，氮酮、丙二醇均呈現(xiàn)出隨含量升高累計(jì)透過(guò)量增大的趨勢(shì)，促透效果均以7%時(shí)最佳。對(duì)比三組數(shù)據(jù)，丙二醇效果更優(yōu)異，這或許與丙二醇具有助溶作用有關(guān)。相反，冰片組效果不理想，或與冰片不溶于水、易揮發(fā)有密切聯(lián)系。因最初實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)未曾考慮加入吐溫等表面活性劑的方案，值得進(jìn)一步進(jìn)行實(shí)驗(yàn)探究。

比較表2、3數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，復(fù)合促透劑效果并不像單一促透劑那般明顯，氮酮＋丙二醇組三種濃度下作用效果近似，成效均比較低。氮酮＋冰片組以5%效果略好。綜上所述，制備人參皂苷Rg1透皮制劑應(yīng)選擇7%丙二醇作為最佳促透劑。

3 討論

人參皂苷Rg1是人參及三七總皂苷中主要有效成分之一，性質(zhì)穩(wěn)定，具有臨床應(yīng)用廣泛、定量準(zhǔn)確檢測(cè)快捷、提取簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)［13］。本課題采用改良Franz擴(kuò)散池法，在人參皂苷Rg1中加入不同促透劑制備藥液樣品，以人參皂苷Rg1為定量指標(biāo)成分進(jìn)行體外透皮吸收檢測(cè)，通過(guò)累積滲透液中人參皂苷Rg1的考察，確定最佳的促透劑，從而有效提高藥物透過(guò)率，達(dá)到提高生物利用率的目的。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，加入促透劑后，人參皂苷Rg1透皮吸收情況能夠得到很好的改善。氮酮、丙二醇、冰片單一使用下，以7%丙二醇效果最佳，復(fù)合使用時(shí)，氮酮＋丙二醇組三種濃度下作用效果近似，氮酮＋冰片組以5%效果較理想。最佳促透劑為7%丙二醇。本論文實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以在中藥外用制劑的促透劑選取方面提供參考。

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Effects of different penetration enhancers on transdermal absorption of ginsenoside Rg1in vitro

HAN Li，WANG Ping，LIU Shan-xin，SU Ming，SUN Hu
（Shandong Academy of Chinese Medicine，Jinan 250014，China）

ObjectiveTo investigate the effects of different penetration enhancers on transdermal absorption of ginsenoside Rg1in vitro through skin－penetrating experiments inmice，and determine the best penetration enhancer for laying the foundation for researching new transdermal absorption preparations.MethodsUsing the modified Franz diffusion pool method，withmice skin as transdermal barrier，physiological saline as acceptmedium，adding different penetration enhancers tomake samples，with ginsenoside Rg1as quantitative indexes for transdermal absorption in vitro tests，measured by high performance liquid chromatography（HPLC）method，inspects the accumulation of ginsenoside Rg1through the volume.ResultsWithout penetration enhancers，ginsenoside Rg1had no accumulation；In single penetration enhancers，7% propylene glycolhad the besteffect，7%azone came second，borneol in aqueous solution hadmore lower effect；In compound penetration enhancers，the accumulation of azone＋propylene glycol groupswas closing atany concentrations；Effect of azone＋borneol group was better when both concentrations were at 2.5%.ConclusionCommon penetration enhancers as azone，propylene glycol and borneol can increase the accumulation of ginsenoside Rg1，among them，7%propylene glycol was the best.

Ginsenoside Rg1；Transdermal absorption in vitro；Penetration enhancer

R944

：A

2095－5375（2014）07－0391－004

山東省中醫(yī)藥科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（No.2011－154，2009－128）；山東省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（No.2010GSF10278）；濟(jì)南市青年科技明星計(jì)劃［濟(jì)科合字（2011）第01－0117號(hào)］

韓莉，女，副研究員，研究方向：中藥藥理研究，E－mail：wangpingjinan＠163.com

王平，女，副研究員，研究方向：中藥藥理研究，Tel：0531－82949812，E－mail：wangpingjinan＠163.com